CircACTN4 直接與 FUBP1 相互作用并*** MYC 的轉(zhuǎn)錄
為了探索circACTN4的分子機(jī)制，首先進(jìn)行了pull down和質(zhì)譜分析circACTN4結(jié)合蛋白，發(fā)現(xiàn)FUBP1在circACTN4上顯著富集。RIP 檢測進(jìn)一步證實 FUBP1 可以通過qRT-PCR與BC細(xì)胞中的內(nèi)源性circACTN4 特異性結(jié)合。FISH-IF 分析顯示 circACTN4和FUBP1共定位于細(xì)胞核中。但是circACTN4 的上調(diào)和敲低并沒有改變 FUBP1的表達(dá)水平，表明circACTN4不參與FUBP1的翻譯后調(diào)控。ChIP-PCR測定證實FUBP1與BC細(xì)胞中MYC啟動子結(jié)合。構(gòu)建了 FUBP1 和 FIR 過表達(dá)和敲低質(zhì)粒。通過qRT-PCR和蛋白質(zhì)印跡確定轉(zhuǎn)染效率。qRT-PCR和WB的結(jié)果表明，F(xiàn)UBP1的上調(diào)或下調(diào)分別顯著增加或降低了BC細(xì)胞中MYC的表達(dá)水平。此外， qRT-PCR發(fā)現(xiàn)FUBP1在BC組織中的表達(dá)明顯高于鄰近正常組織中的表達(dá)。 英拜的員工福利待遇很好。cancer科研實驗外包
一、在pik3a突變的ER+乳腺*中，INPP4B的表達(dá)增加
INPP4B被確定為人類乳腺*er陽性標(biāo)記物.INPP4B在三陰性乳腺*中表達(dá)缺失，然而，它作為其他**中潛在的致*基因的出現(xiàn)，促使我們檢測其在ER+乳腺*中的相對表達(dá)和功能。INPP4B蛋白表達(dá)缺失與三陰性乳腺*相關(guān)(圖1a, b) 增加INPP4B蛋白表達(dá)在14 40%的乳腺*相對于正常組織與ER / PR-positivity和腔內(nèi)(ER +和/或PR+)乳腺*亞型(圖1 a, b和補充圖1 b, c)。在mRNA表達(dá)數(shù)據(jù)不能用于這些cohorts使用組織掃描乳腺*cDNA陣列I IV (OriGene)檢測130例原發(fā)人類乳腺*和16例正常乳腺組織的INPP4B mRNA表達(dá)(圖1c)。INPP4B表達(dá)降低與三陰性乳腺*相關(guān)，而***增加的INPP4B表達(dá)在25%的乳腺*中與ER/ propositivity和luminal亞型相關(guān)(圖1c, d和補充圖1d, e)。使用METABRIC和TCGA數(shù)據(jù)集，我們發(fā)現(xiàn)只有1%的乳腺*表現(xiàn)出INPP4B基因改變，如突變、截斷、擴(kuò)增或缺失。INPP4B mRNA表達(dá)與PTEN或AKT1突變無關(guān)，但與pik3a突變狀態(tài)正相關(guān)(圖1e和補充圖1f)。在PIK3CA多突變的乳腺*中，INPP4B的表達(dá)也***升高(補充圖1g)。進(jìn)一步分層研究發(fā)現(xiàn)，INPP4B高表達(dá)與pik3c突變ER+乳腺*亞型特異性相關(guān)(圖1f)。 炎癥因子科研創(chuàng)新服務(wù)專注于生命科學(xué)內(nèi)的前沿研究。
由于circMAPK1在GC細(xì)胞系中穩(wěn)定表達(dá)，我們推測circMAPK1可能是一種適合GC診斷或預(yù)后的標(biāo)志物。qRT-PCR顯示circMAPK1在*組織中的表達(dá)低于匹配的非*組織(圖1m)。Kaplan-Meier生存分析顯示胃*組織中circMAPK1水平較高的患者總生存期***延長(圖1n)。綜上所述，circMAPK1是一種穩(wěn)定表達(dá)的circRNA，可作為有效的診斷和預(yù)后標(biāo)志物，值得進(jìn)一步研究。
2）CircMAPK1在體外抑制GC細(xì)胞的增殖和遷移
為了研究circMAPK1在GC中的生物學(xué)功能，我們進(jìn)行了一系列細(xì)胞實驗。隨CCK8實驗(圖2a)、集落形成實驗(圖2b)和EdU實驗(圖2c)結(jié)果表明，沉默circMAPK1可***增強(qiáng)GC細(xì)胞的增殖能力。我們發(fā)現(xiàn)circMAPK1的減少增加了S期GC細(xì)胞的數(shù)量(圖2d)。Transwell(圖2e)試驗顯示circMAPK1的干擾促進(jìn)了GC細(xì)胞的遷移。此外，過表達(dá)circMAPK1***削弱了GC細(xì)胞的增殖能力。同樣，過表達(dá)circMAPK1時，S期GC細(xì)胞的數(shù)量***減少，細(xì)胞遷移受到抑制。綜上所述，circMAPK1在GC細(xì)胞的增殖和遷移中起著重要作用。
四、在體內(nèi)和體外，NUPs的上調(diào)導(dǎo)致TDP-43/TBPH定位錯誤和聚集
為了檢測Nup上調(diào)對Tbph (Drosophila TDP-43)病理的影響，我們建立了一個位點特異性Nup62過表達(dá)(Nup62 OE)蠅線，并對內(nèi)源性Tbph進(jìn)行染色。在eGFP對照(以下稱為對照)表達(dá)的果蠅幼蟲VNC中，Tbph的分布以細(xì)胞核為主，而Nup62 OE幼蟲VNC***改變了Tbph的定位，出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)聚集(圖4A)。定量分析顯示，與對照組相比，Nup62 OE果蠅幼蟲或成年大腦中斑點Tbph***增加(圖4B）。與對照組相比，Nup62 OE vnc的核Tbph強(qiáng)度***降低(圖4C)。此外，核細(xì)胞質(zhì)(N/C)分割進(jìn)一步證實，與對照組相比，Nup62 OE動物的Tbph N/C比值***降低(圖4D和E)，表明Nup62的上調(diào)改變了Tbph在體內(nèi)的亞細(xì)胞定位。 英拜跟客戶形成產(chǎn)學(xué)研合作模式。
m6A RNA甲基化是mRNA轉(zhuǎn)錄后**常見的內(nèi)部甲基化。這是一個由m6A WER系統(tǒng)控制的可逆過程，由書寫器(W)、擦除器(E)和閱讀器(R)組成，而m6A甲基化的**終結(jié)果取決于特異性閱讀器的識別并結(jié)合。目前研究發(fā)現(xiàn)抑制肺腺*(LUAD)與m6A閱讀器YTHDC2相關(guān)。該研究2021年1月發(fā)表在《Redox biology》，IF：11.799的期刊上。
1.YTHDC2表達(dá)在LUAD中被抑制，且與臨床預(yù)后差相關(guān)
為了驗證m6A閱讀器在肺*的表達(dá)，作者通過GEPIA數(shù)據(jù)庫分析了LUAD中已知的閱讀器，包括YTHDF1/2/3、YTHDC1/2、HNRNPA2B1、HNRNPC/G、eIF3A、FMR1和IGF2BP1/2。如圖1A和B顯示，與正常肺相比，LUAD中YTHDC2、IGF2BP2表達(dá)下調(diào)，而結(jié)合Oncomine數(shù)據(jù)庫和Kaplan-Meier圖譜進(jìn)一步分析，發(fā)現(xiàn)較低的YTHDC2與LUAD患者較差的總生存率相關(guān)(圖1D)，這證實了YTHDC2與LUAD存在負(fù)相關(guān)的關(guān)系。 這些數(shù)據(jù)表明大黃酸***可以改善DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎。貴州科研售后服務(wù)
結(jié)腸炎也會導(dǎo)致促炎細(xì)胞因子或趨化因子的增加。cancer科研實驗外包
為了檢測補充NAD + 是否可以糾正IFNα刺激的下游效應(yīng)，用1 mM β-煙酰胺單核苷酸(NMN)培養(yǎng)CD8 + T細(xì)胞以恢復(fù)NAD +/NADH比值（圖6e）。然后，評估了用抗CD3/CD28再刺激后的氧化反應(yīng)和細(xì)胞活力。補充NMN的NAD + 增加了OCR（圖6f），但未增加ECAR，表明線粒體能力增加。重要的是，通過NMN處理恢復(fù)NAD + 的可用性改善了IFNα延長和TCR刺激后的細(xì)胞活力（圖6 g），表明NAD途徑調(diào)節(jié)這些活化的人CD8 + T細(xì)胞中的線粒體適應(yīng)性和細(xì)胞存活率?？傊@些數(shù)據(jù)表明，在人TCR刺激的CD8 + T細(xì)胞中，延長IFNα暴露增加了NAD + 的消耗，并降低了NAD +/NADH比值。這導(dǎo)致再刺激后線粒體呼吸缺陷和細(xì)胞活力降低。NAD + 前體NMN糾正了這些代謝變化，提高了CD8 + T細(xì)胞活力。cancer科研實驗外包
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進(jìn)度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請：提供標(biāo)書課題設(shè)計、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實驗的開展，設(shè)計的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c，中標(biāo)率很高。
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4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實驗