4）體外實驗表明，上調(diào)UCP1以減輕AKI期間的脂質(zhì)積累，可通過影響炎癥和凋亡，***抑制疾病進展
越來越多的證據(jù)表明，在AKI中有明顯的脂質(zhì)積累和UCP1的異常表達，并與腎損傷的嚴重程度有很強的相關性。為了確定脂質(zhì)積累是否影響AKI期間的細胞功能，我們首先使用UCP1過表達慢病毒和UCP1激動劑CL316243構建AKI細胞脂質(zhì)積累***模型。如圖4A所示，在AKI中上調(diào)UCP1***脂質(zhì)積聚，導致腎小管損傷指數(shù)、NGAL***下調(diào)，說明UCP1***脂質(zhì)積聚可***減輕模型細胞的損傷。鑒于炎癥和凋亡是AKI細胞損傷**重要和直接的原因，我們對上述細胞模型中的炎癥和凋亡標記物進行了量化。IL-1β、IL-6和TNF-α隨著UCP1的上調(diào)而***降低(圖4B-D)。在凋亡指標Bax和C-caspase3中也觀察到類似的趨勢，而Bcl-2升高(圖4E)。***，通過TUNEL熒光染色直接定量評估細胞凋亡，證實上調(diào)UCP1緩解AKI模型細胞的凋亡(圖4F)。 提供分子生物以及到后續(xù)動物建模的一整套服務。FISH課題設計實驗
為了確定ATM介導的PTEN磷酸化如何調(diào)節(jié)DDR，構建Pten398A/398A和Pten+/+ littermates MEFs細胞模型。PTEN蛋白水平不受398A突變的影響(補充圖3A, B)。此外，磷酸化AKT (PI3K通路活性的標記物)水平在Pten398A/398A和PTEN +/+ MEFs中相似(補充圖3B)。構建人乳腺上皮細胞系(MCF10A)，穩(wěn)定表達野生型PTEN (PTEN- wt)，或PTEN的突變形式，不能被ATM磷酸化(PTEN- 398a)。在這些細胞中，內(nèi)源性的PTEN基因被CRISPR/Cas9編輯刪除，創(chuàng)建了PTEN空細胞，然后用野生型或突變型的蛋白質(zhì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)導重組。在表達PTEN- wt和PTEN- 398a的MCF10A細胞中，PTEN蛋白和磷酸化AKT水平相似(補充圖3A)，使這些細胞成為ATM磷酸化PTEN分子作用研究的合適替代模型。免疫熒光課題分子生物學我們接下來研究了Pex對HSCs生物學行為的影響。
在TYRO3-OE 4T1**細胞中，阻斷鐵死亡的基因上調(diào)（Slc40a1、Slc7a11、Slc3a2、Gpx4、Fth1和Blvrb），而增強鐵死亡的基因下調(diào)（Slc5a1、Tfrc）。在接受抗PD-1***的黑色素瘤患者中，阻止脂質(zhì)過氧化和鐵死亡的分子SLC3A2與TYRO3***共表達?？筆D-1***后，Tyro3-OE CD45-**細胞的脂質(zhì)ROS水平低于4T1-P CD45-**細胞，而加入抗PD-1***增加4T1-P**細胞的脂質(zhì)ROS，但不增加Tyro3-OE**細胞的脂質(zhì)ROS，表明Tyro3抑制抗PD-1誘導的**細胞鐵死亡。在體外用鐵死亡誘導劑erastin和鐵死亡抑制劑ferrostatin 1(Fer-1)處理4T1-P和Tyro3-OE 4T1細胞。與親代細胞相比，Tyro3過表達抑制了鐵死亡誘導劑誘導的細胞死亡。當Fer-1阻斷鐵死亡時，Tyro3過表達抑制誘導劑誘導的脂質(zhì)ROS。Tyro3缺失增加了誘導劑誘導的細胞死亡和脂質(zhì)過氧化，F(xiàn)er-1消除了這些作用。這些結(jié)果表明TYRO3對于保護**細胞免受鐵死亡至關重要。
此外，生存分析顯示，EV中CD44v6和C1QBP高表達的患者的生存結(jié)局明顯較差(圖7F)。循環(huán)外泌體的隨訪數(shù)據(jù)也顯示了一致的結(jié)果。PDAC患者中循環(huán)外泌體CD44v6和C1QBP的表達明顯高于健康對照組(圖7G)， PDAC伴有肝轉(zhuǎn)移的患者中循環(huán)外泌體CD44v6和C1QBP的表達明顯高于無肝轉(zhuǎn)移的患者(圖7G)。免疫電子顯微鏡顯示，CD44v6和C1QBP在PDAC患者的循環(huán)外泌體***表達(圖7H)。高循環(huán)外泌體表達CD44v6和C1QBP的患者比其他患者更容易發(fā)生肝轉(zhuǎn)移 (圖7I)。然而，高表達循環(huán)外泌體CD44v6和C1QBP的患者生存率明顯較差(圖7J)?？傊?，我們的研究結(jié)果證實了CD44v6和C1QBP在組織源性EV和循環(huán)外泌體中的表達可以預測PDAC患者的預后和肝轉(zhuǎn)移。
結(jié)論：我們揭示了原代PDAC細胞和HSCs之間通過PDAC來源的外泌體進行遠距離的細胞通信。此外，Pex通過促進肝纖維化微環(huán)境的形成來指示肝特異性轉(zhuǎn)移。更重要的是，我們發(fā)現(xiàn)外泌體CD44v6/C1QBP復合物傳遞到HSC的質(zhì)膜上誘導IGF-1信號通路的***。外泌體CD44v6和C1QBP可能是預測PDAC患者預后的有前途的生物標志物，也是***PDAC肝轉(zhuǎn)移的潛在靶點。 英拜生物致力于分子生物行業(yè)十余年。
2021年4月，加拿大UniversityAve和中國香港大學團隊與**研究所表觀遺傳學和基因組穩(wěn)定性小組在CellDeath&Differentiation雜志上發(fā)表了文章“ThePTENandATMaxiscontrolstheG1/ScellcyclecheckpointandtumorigenesisinHER2-positivebreastcancer”。此報道發(fā)現(xiàn)ATM磷酸化PTEN的398位(人類蘇氨酸;在小鼠絲氨酸)的***，為了理解ATM磷酸化PTEN的生物學意義，建立了一個小鼠模型，構建了一個不能被ATM磷酸化的PTEN突變形式，用398位(PTEN-398a)的絲氨酸取代了丙氨酸。PTEN-398A的表達可加速her2陽性乳腺*小鼠模型的**發(fā)展和進展。利用分子生物學方法，發(fā)現(xiàn)了一種新的機制，通過ATM磷酸化PTEN調(diào)節(jié)其細胞再分配，并有助于該蛋白的*****功能。 soRNA測序的 整套服務。高通量測序課題整包服務
zVAD預處理也略微增加了IR后PTEN-398A細胞中未解決的DNA損傷灶的數(shù)量。FISH課題設計實驗
。CDKs的催化活性受細胞周期檢查點的調(diào)控，這些檢查點監(jiān)測細胞周期中主要事件的有序執(zhí)行。檢查點**了故障安全機制，它確保只有在滿足的比較好情況下才允許細胞分裂。所有生物體都需要通過細胞分裂周期進行適當?shù)幕蚪M維護，以確保正常生殖、發(fā)育和預防包括**在內(nèi)的各種疾病。DNA損傷可由內(nèi)源性過程引起，如DNA復制過程中偶爾引入的DNA不匹配，拓撲異構酶I和拓撲異構酶II活性失效導致的DNA鏈斷裂，或由正常代謝副產(chǎn)品產(chǎn)生的ROS攻擊DNA。外源性來源主要包括誘變化學品、紫外線和電離輻射(IR)。細胞周期檢查點能夠檢測DNA損傷，提示其存在，并***延緩細胞周期進程的通路，修復DNA損傷，或通過誘導細胞死亡來消除基因不穩(wěn)定細胞。哺乳動物細胞DNA損傷反應(DDR)信號的**是共濟失調(diào)***擴張癥突變(ATM)和ATM-和rad3相關(ATR)蛋白激酶。ATM和ATR磷酸化并***另外兩個激酶CHK1和CHK2,CHK1和CHK2與ATM和ATR一起，是細胞周期檢查點[24]的主調(diào)節(jié)器。通過調(diào)節(jié)CDKs的活性，這些分子在細胞周期G1S期、S內(nèi)期和G2M期減緩或阻止細胞周期進程，使DNA損傷得以修復。ATM和ATR通過控制不同因子在DNA損傷位點的表達、活性或招募來促進DNA修復FISH課題設計實驗
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設計外包、撰寫SCI論文一站式服務。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導下完成。
1.整體課題外包服務：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標書奠定較好的基礎
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3.提供熱點**文獻技術支持，探討科研前沿熱點研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗