3、外泌體S100A4是HCC細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛力的關(guān)鍵增強(qiáng)子
為了探究通過HMH-exo增強(qiáng)HCC轉(zhuǎn)移能力的關(guān)鍵，作者對LMH-exo和HMH-exo進(jìn)行了iTRAQ質(zhì)譜篩選。結(jié)果從HMH-exo中鑒定到116個(gè)***上調(diào)和43***下調(diào)的蛋白質(zhì)；結(jié)果發(fā)現(xiàn)了4個(gè)蛋白家族的聚類：Apo、PSM、EEF/EIF和S100鈣結(jié)合蛋白家族（圖3a-b）。經(jīng)過文獻(xiàn)分析，作者主要關(guān)注了S100鈣結(jié)合蛋白家族，并以其中*****差異表達(dá)的4個(gè)蛋白為主：依次是S100A4，S100A6，S100A10，和S100A11。作者檢測了這4個(gè)蛋白在5個(gè)HCC細(xì)胞系外泌體中的表達(dá)豐度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)依然是S100A4的表達(dá)水平比較高（圖3c）。因此，初步選擇S100A4進(jìn)行下一步分析。 深耕科研行業(yè)提高科研的高效。lncRNA
6、白樺素降低***的發(fā)展
用LDLR敲除小鼠探索了白樺素對***病變形成的作用。LDLR缺陷小鼠用WD飲食并分別添加了成分，對照（鹽），洛伐他汀（30mg/kg/day）或白樺素（30mg/kg/day）處理14周。不同組的小鼠顯示出相似的食物攝入量和體重（圖7A-7B）。在經(jīng)白樺素處理的小鼠肝臟中，SREBP-1c和SREBP-2降低，脂質(zhì)合成基因（包括HMGCS，HMGCR和FAS）下調(diào)（圖7C）。但是，洛伐他汀可上調(diào)HMGCR和FAS基因的表達(dá)（圖7C）。白樺素極顯著降低了血液中的TC，TG和LDL-c的含量，并增加了HDL-c。洛伐他汀具有類似的作用，只是它不降低TG（圖7D–7G）。與對照處理的小鼠相比，洛伐他汀或白樺素處理的小鼠的主動脈斑塊的數(shù)量和大小顯著降低（圖7H和7I）。特別是，主動脈弓（圖7J）和胸主動脈（圖7K）的病變區(qū)域明顯較小。以上數(shù)據(jù)表明，白樺素降低了WD喂養(yǎng)的LDLR敲除小鼠***病變的形成，并穩(wěn)定了主動脈根部粥樣硬化斑塊。
總之，本文確定了SREBP的一種特定的小分子抑制劑，即betulin白樺素，可以降低脂質(zhì)水平，增強(qiáng)胰島素敏感性并減少***斑塊的形成。 這些數(shù)據(jù)支持以下觀點(diǎn)：抑制SREBP途徑可能是***II型糖尿病和***的有用策略。 Betulin可以作為藥物控制代謝性疾病的主要化合物。 標(biāo)書課題整包服務(wù)也是***PDAC肝轉(zhuǎn)移的潛在靶點(diǎn)。
3）CircMAPK1在體內(nèi)抑制胃*的發(fā)生和轉(zhuǎn)移
為了進(jìn)一步證實(shí)體外研究結(jié)果，我們在體內(nèi)驗(yàn)證了circMAPK1在影響致瘤性方面的生物學(xué)作用。circMAPK1的沉默可***促進(jìn)**的生長。相比之下，過表達(dá)circMAPK1***抑制了皮下**的生長(圖3a)。接下來，我們通過對增殖細(xì)胞標(biāo)記物Ki67的染色來監(jiān)測異種移植瘤的增殖。穩(wěn)定敲除circMAPK1的**組織表現(xiàn)出更強(qiáng)的Ki67染色，而過表達(dá)circMAPK1的**組織表現(xiàn)出更弱的Ki67染色(圖3b和c)。為了研究circMAPK1在體內(nèi)的轉(zhuǎn)移潛能，我們用熒光素酶質(zhì)粒穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染上述細(xì)胞系，然后注射到裸鼠的尾靜脈中。結(jié)果顯示，circMAPK1的敲低有效地增加了肺轉(zhuǎn)移病灶的數(shù)量和大小。相比之下，生物發(fā)光成像(圖3d和e)和H&E染色(圖3f和g)顯示，過表達(dá)circMAPK1減少了肺轉(zhuǎn)移病變。
哺乳動物細(xì)胞DNA損傷反應(yīng)(DDR)信號的**是共濟(jì)失調(diào)***擴(kuò)張癥突變(ATM)和ATM-和rad3相關(guān)(ATR)蛋白激酶。ATM和ATR磷酸化并***另外兩個(gè)激酶CHK1和CHK2, CHK1和CHK2與ATM和ATR一起，是細(xì)胞周期檢查點(diǎn)[24]的主調(diào)節(jié)器。通過調(diào)節(jié)CDKs的活性，這些分子在細(xì)胞周期G1 S期、S內(nèi)期和G2 M期減緩或阻止細(xì)胞周期進(jìn)程，使DNA損傷得以修復(fù)。ATM和ATR通過控制不同因子在DNA損傷位點(diǎn)的表達(dá)、活性或招募來促進(jìn)DNA修復(fù)。一般來說，DDR機(jī)制能夠修復(fù)細(xì)胞在其生命周期中積累的DNA損傷，但如果認(rèn)為損傷程度過高，就會誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或細(xì)胞衰老導(dǎo)致細(xì)胞死亡?？梢酝茢嗷蛘{(diào)控事件之間的關(guān)系。
進(jìn)一步檢測S100A4的功能，結(jié)果顯示敲除S100A4***降低高轉(zhuǎn)移性HCC細(xì)胞系的遷移和侵襲能力，過表達(dá)S100A4則***增強(qiáng)低轉(zhuǎn)移性HCC細(xì)胞系的遷移和侵襲能力（圖3d）。然后作者收集了S100A4敲除和S100A4過表達(dá)的HCC細(xì)胞的外泌體，結(jié)果得到了類似的結(jié)論，S100A4過表達(dá)外泌體***增強(qiáng)HCC細(xì)胞的遷移和侵襲，以及體內(nèi)肺部轉(zhuǎn)移的能力（圖3e-f）。這些結(jié)果證實(shí)了外泌體S100A4具有增強(qiáng)HCC細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛力的功能。
4、外泌體S100A4通過STAT3磷酸化***OPN轉(zhuǎn)錄
接下來探究了S100A4的作用機(jī)制，首先選擇了21個(gè)**干性相關(guān)基因，然后下載了GEO數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果顯示S100A4主要和11個(gè)基因正相關(guān)（圖4a）。隨后檢測了不同HCC細(xì)胞系中敲除和過表達(dá)S100A4后11個(gè)基因的表達(dá)水平的改變，結(jié)果顯示只有OPN是S100A4的下游基因，其表達(dá)受到S100A4的調(diào)控（圖4b-f）。OPN是促進(jìn)HCC轉(zhuǎn)移和干性的關(guān)鍵因子，但外泌體S100A4調(diào)節(jié)OPN的機(jī)制仍不清楚。 高通量測序后續(xù)的機(jī)制實(shí)驗(yàn)。標(biāo)書課題
英拜生物致力于分子生物行業(yè)十余年。lncRNA
兩個(gè)組在年齡、核型和白細(xì)胞計(jì)數(shù)等臨床病理參數(shù)方面沒有差異(卡方檢驗(yàn)假發(fā)現(xiàn)率[FDR] >5%;補(bǔ)充表2 5)。確定關(guān)鍵驅(qū)動突變在原始和committed亞型中的分布(圖1C，補(bǔ)充討論中的亞型和突變部分和補(bǔ)充表6 17)。盡管亞型中富含某些突變(原始組的FLT3-ITD和承諾組的DNMT3A)，驅(qū)動突變的遺傳改變對原始和committed亞型的預(yù)測較差(補(bǔ)充圖3 16和補(bǔ)充討論)，基因突變和亞型之間的Matthews相關(guān)系數(shù)(MCC)較低(FLT3-ITD的MCC = 0.32, DNMT3A的MCC = 0.16;在precision-recall曲線(AUPRC = 0.62)值下，突變與亞型之間的多變量分析得到一個(gè)薄弱區(qū)域(Supplementary Fig. 7)。lncRNA
公司特色是以各式高通量二代測序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺開放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
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4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
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7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)