NF-kB課題協(xié)同創(chuàng)作

來源：發(fā)布時間：2021-10-28

UCP1激動劑CL316243也得到了類似的結(jié)果。這些結(jié)果表明，UCP1參與了AKI中脂質(zhì)積累的調(diào)節(jié)。為了進(jìn)一步驗證這一調(diào)控關(guān)系，提高證據(jù)的可靠性，我們采用腎多點注射UCP1特異性過表達(dá)腺病毒的方法建立AKI過表達(dá)UCP1的動物模型(圖3C-D)。油紅O染色顯示，過表達(dá)UCP1可***緩解AKI動物模型中的脂質(zhì)積累(圖3E)。***，使用UCP1激動劑CL316243在AKI動物模型中誘導(dǎo)UCP1過表達(dá)，也觀察到了相同的結(jié)果(圖3F-H)。因此，所有證據(jù)表明，隨著UCP1表達(dá)的增加，AKI模型中的脂質(zhì)含量降低。提供整體課題外包實驗構(gòu)思。NF-kB課題協(xié)同創(chuàng)作

接下來，我們合成了野生型HuR蛋白(WT)和HuR蛋白的截短突變體（即分別為單獨HuR的RNA識別基序(RRM)1的突變體B1、單獨HuR RRM2的突變體B2和單獨HuR RRM3的突變體B3）（圖4 C）。同時，我們設(shè)計并合成了生物素標(biāo)記的或未標(biāo)記的探針，分別特異性靶向lnc-PMIF的中心-莖環(huán)和生物素標(biāo)記的或未標(biāo)記的探針，特異性靶向之前報道的與HuR蛋白相互作用的β-actin mRNA的序列。RNA電泳遷移率變動分析(EMSA)發(fā)現(xiàn)只有當(dāng)生物素標(biāo)記的lnc-PMIF探針與WT HuR或截短突變體B3共孵育時，才能檢測到lnc-PMIF-HuR復(fù)合物，這表明HuR的RRM3可介導(dǎo)HuR和lnc-PMIF之間的相互作用。lnc-PMIF與β-actin mRNA競爭與HuR相互作用。過表達(dá)HuR-RRM3后細(xì)胞中β-actin的mRNA和蛋白表達(dá)下降***上調(diào)，遷移活性增強(qiáng)。所有這些表明lnc-PMIF可與HuR的RRM3結(jié)合，中斷HuR-β-actin的相互作用，抑制β-actin的表達(dá)，抑制OPC的遷移。RNA PULLdown課題產(chǎn)學(xué)研合作使用motif和CHIP-seq預(yù)測影響基因簇表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子。

接著作者為了進(jìn)一步證明YTHDC2與LUAD的關(guān)系，與相鄰的*旁組織相比，在LUAD**中觀察到Y(jié)THDC2 mRNA和蛋白的***下調(diào)(圖1E-G)，組織芯片檢測(TMA)評估cohort #1中YTHDC2的表達(dá)，結(jié)果顯示51% (98/192) LUAD患者的YTHDC2表達(dá)下調(diào)(圖1H、I)。值得注意的是，YTHDC2表達(dá)下調(diào)與更大的**直徑和更晚期的分期相關(guān)(圖1J、K)。表明抑制YTHDC2可促進(jìn)LUAD的**進(jìn)展。

2.過表達(dá)YTHDC2抑制細(xì)胞活力和**發(fā)生

為了探索YTHDC2在體內(nèi)的m6A解讀器功能，作者構(gòu)建AAV5表達(dá)系統(tǒng)(KPYWT、KPYΔYTH和對照KPE)(圖2A)。與KPE小鼠***25周后的**相比，KPYWT和KPYΔYTH小鼠的**證實了YTHDC2持續(xù)上調(diào)(圖2B)，這表明AAV5表達(dá)系統(tǒng)具有持久的效率。雖然YTHDC2不能阻止**的發(fā)生，但**發(fā)生時間延遲，**負(fù)荷明顯受到抑制，KPYWT小鼠的生存時間比KPE小鼠和KPYΔYTH小鼠更長(圖2C-F)。

5）上調(diào)UCP1緩解AKI期間的脂質(zhì)積累，***抑制疾病進(jìn)展

為了在體內(nèi)驗證脂質(zhì)對AKI功能的影響，我們通過在腎臟多點注射過表達(dá)UCP1腺病毒，構(gòu)建過表達(dá)UCP1動物模型，以消除脂質(zhì)在AKI中的堆積。在UCP1過表達(dá)動物模型中，腎損傷指標(biāo)NGAL明顯降低(圖5A)。HE和PAS染色顯示腎臟形態(tài)有很大改善，腎小管損傷評分顯示，在UCP1介導(dǎo)的脂質(zhì)消耗增加后，腎小管損傷程度明顯降低(圖5B-C)。順鉑刺激后腎小管呈空泡變性，細(xì)胞扁平，管腔擴(kuò)張，而UCP1過表達(dá)明顯改善了病理改變。血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)這兩項腎臟損傷指標(biāo)也出現(xiàn)了類似的***下降(圖5D-E)。利用UCP1激動劑CL316243在AKI動物模型中緩解脂堆積，進(jìn)一步驗證了上述結(jié)果。***后NGAL***降低(圖5F)，腎臟形態(tài)、腎小管損傷評分、SCr、BUN均***改善(圖5G-J)。因此，在體內(nèi)，上調(diào)UCP1以緩解AKI脂質(zhì)積累可以抑制AKI進(jìn)展。動物建模模型實驗的整體服務(wù)。

5）上調(diào)UCP1緩解AKI期間的脂質(zhì)積累，***抑制疾病進(jìn)展

caspase-3抗體是一種***用于檢測凋亡細(xì)胞的標(biāo)志物。NF-kB課題協(xié)同創(chuàng)作

五、YTHDF1以m6a依賴的方式調(diào)控FZD7的表達(dá)

在GC-803和胃*細(xì)胞株基礎(chǔ)上，進(jìn)行m6A-qPCR和YTHDF1 RIP qPCR的基因特異性分析。確實，在FZD7 mRNA中觀察到兩個m6A峰，并且在MGC-803和HGC-27細(xì)胞中證實了與YTHDF1的關(guān)聯(lián)(圖5A和B)。標(biāo)記YTHDF1突變體(YTHDF1- mut)具有兩個關(guān)鍵氨基酸突變(K395A, Y397A)以消除其m6binding口袋(44)，將其轉(zhuǎn)染到MGC-803和HGC- 27細(xì)胞中(圖5C)。在YTHDF1野生型(YTHDF1- wt)轉(zhuǎn)染的胃*細(xì)胞中觀察到的FZD7表達(dá)上調(diào)在YTHDF1- mut中被消除，但在YTHDF1-WT和YTHDF1-MUT兩種細(xì)胞系中，F(xiàn)ZD7的mRNA水平相當(dāng)(圖5E)。RIP-qPCR分析顯示，F(xiàn)ZD7 mRNA與突變體YTHDF1的相互作用明顯受損(圖5F)。 NF-kB課題協(xié)同創(chuàng)作

公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進(jìn)度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。

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標(biāo)簽： tiRNA 技術(shù)服務(wù) 實驗服務(wù) 標(biāo)書服務(wù) 課題

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