基礎(chǔ)分子實(shí)驗(yàn)課題代發(fā)服務(wù)

為了確定METTL3促進(jìn)**細(xì)胞增殖的機(jī)制，檢測(cè)了METTL3在ESCC細(xì)胞上轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)中的作用。METTL3缺失降低了KYSE180細(xì)胞中m6A的總豐度。甲基化RNA免疫沉淀（MeRIP）和m6A特異性抗體，然后進(jìn)行RNA測(cè)序（MeRIP-seq），發(fā)現(xiàn)KYSE180的mRNA中鑒定的m6A位點(diǎn)與RRACH序列一致。m6A信號(hào)在mRNAs的終止密碼子和3′-非翻譯區(qū)富集。在MeRIP-seq中METTL3缺失減少了1101個(gè)基因的mRNAs中1199個(gè)m6A峰。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序發(fā)現(xiàn)METTL3缺失調(diào)節(jié)2973個(gè)基因的表達(dá)。二者取交集發(fā)現(xiàn)共有93個(gè)基因重疊。MeRIP-seq中細(xì)胞成分（CC）項(xiàng)的基因本體（GO）富集分析表明，在METTL3缺失的KYSE180細(xì)胞中，β-連環(huán)蛋白降解復(fù)合物（的基因組（包括APC）中m6A水平***降低。英拜生物對(duì)整體實(shí)驗(yàn)實(shí)施的全局把控。基礎(chǔ)分子實(shí)驗(yàn)課題代發(fā)服務(wù)

8）SOCS6通過(guò)泛素化和降解p65抑制NF-κB信號(hào)通路

鑒于miR-155通過(guò)增強(qiáng)細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中p65的表達(dá)負(fù)調(diào)控SOCS6的表達(dá)，并***NF-κB信號(hào)通路，我們下一步研究SOCS6與p65之間潛在的相互作用。首先，我們?cè)赽End.3細(xì)胞中過(guò)表達(dá)或下調(diào)SOCS6。發(fā)現(xiàn)p65表達(dá)與SOCS6水平呈負(fù)相關(guān)(圖8A)。DiscoveryStudio?分析的3D對(duì)接也表明SOCS6可能與p65相互作用(圖8B)。此外，熒光共定位實(shí)驗(yàn)表明，SOCS6與p65在細(xì)胞質(zhì)***定位(圖8C和D)，Co-IP實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步揭示了SOCS6與p65的相互作用(圖8E)。值得注意的是蛋白酶體MG132可以部分逆轉(zhuǎn)SOCS6過(guò)表達(dá)對(duì)p65蛋白水平的抑制作用(圖8F)。同時(shí)，在環(huán)己酰亞胺的情況下，SOCS6的沉默***延緩了內(nèi)源性p65的降解速率，而過(guò)表達(dá)SOCS6則***加速了p65的降解(圖8G)。***，通過(guò)泛素化實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證SOCS6是否通過(guò)蛋白酶體降解誘導(dǎo)p65失穩(wěn)。我們發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)SOCS6增加了bEnd.3細(xì)胞中p65多聚泛素化。沉默SOCS6則相反(圖8H)。綜上所述，這些結(jié)果表明SOCS6可以與p65結(jié)合并誘導(dǎo)其多聚泛素化和蛋白酶體降解。 RNA PULLdown課題產(chǎn)學(xué)研合作ATM對(duì)PTEN的磷酸化導(dǎo)致PTEN在質(zhì)膜上重新分布。

上海英拜生物一直致力于醫(yī)學(xué)相關(guān)領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)和生物醫(yī)學(xué)課題的研究。為了廣大醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究者能夠在繁忙的工作中提供生物的科研設(shè)計(jì)咨詢及輔助實(shí)驗(yàn)，相關(guān)文獻(xiàn)查閱，實(shí)驗(yàn)可行性分析，實(shí)驗(yàn)流程設(shè)計(jì)，課題項(xiàng)目申請(qǐng)，整體實(shí)驗(yàn)事實(shí)，數(shù)據(jù)分析與處理，論文潤(rùn)色。

服務(wù)內(nèi)容：

1，課題設(shè)計(jì)階段交流：了解客戶的研究方向以及所能提供的樣本類型跟樣本量

2，查閱相關(guān)文獻(xiàn)：根據(jù)客戶的研究方向，查閱相關(guān)文獻(xiàn)

3，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)路線：根據(jù)客戶的要求和提供的樣本類型，樣本量設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)

4，實(shí)驗(yàn)操作：按照實(shí)驗(yàn)方案實(shí)施實(shí)驗(yàn)

5，整理實(shí)驗(yàn)結(jié)果：完成實(shí)驗(yàn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行整理

6，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析處理：對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行生物學(xué)分析

7，論文：按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)路線和實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行文章的構(gòu)思與潤(rùn)色。

另外，之前報(bào)道過(guò)hnRNPA1將miR-196a和miR-320加載到EVs中，本研究ELNAT1表現(xiàn)出的EVs-細(xì)胞比率與miR-196a和miR-320相當(dāng)（Figure 6 F）。hnRNPA1沉默***抑制了ELNAT1在BCa細(xì)胞分泌的EVs中的富集（Figure 6 G）。此外，缺失的ELNAT1（包含hnRNPA1結(jié)合位點(diǎn)的610-680 nt）主要保留在BCa細(xì)胞中（Figure 6 H），證實(shí)了ELNAT1通過(guò)與hnRNPA1的相互作用被加載到EVs中。

驗(yàn)證SUMOylation是否有助于hnRNPA1介導(dǎo)的EVs包裹ELNAT1。在BCa細(xì)胞中，hnRNPA1中K113位點(diǎn)突變使BCa細(xì)胞分泌的EVs中ELNAT1表達(dá)降低，沉默UBC9降低了BCa細(xì)胞分泌的EVs中ELNAT1的富集（Figure 6 I, J）。與hnRNPA1 WT沉默相比，hnRNPA1沉默后，轉(zhuǎn)染hnRNPA1K113R并不能恢復(fù)EVs介導(dǎo)的ELNAT1下調(diào)（Figure 6 K）。共聚焦顯微鏡顯示，在UBC9沉默或hnRNPA1K113R突變后，ELNAT1在CD36標(biāo)志的多囊泡（MVBs）中的積累明顯下降（Figure 6 L），表明ELNAT1進(jìn)入EVs受hnRNPA1的SUMO化調(diào)控。 表達(dá)PTEN- 398A的細(xì)胞中上調(diào)的基因與G1/S檢查點(diǎn)的***有關(guān)。

    盡管轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)在過(guò)去幾十年中發(fā)展迅速，但由于芯片和RNA-seq之間固有的可變性差異，對(duì)混合數(shù)據(jù)的綜合分析仍然具有挑戰(zhàn)性。本文提出了Rank-In（/rank-in/）來(lái)糾正兩種技術(shù)之間的非生物效應(yīng)，從而能夠自由混合數(shù)據(jù)以進(jìn)行整合分析。網(wǎng)站首頁(yè)如下，支持上傳用戶自己的芯片、轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)。該網(wǎng)頁(yè)**終會(huì)給出調(diào)整后的矩陣、差異基因列表以及聚類結(jié)果圖第一步：上傳表達(dá)文件表達(dá)文件格式如下，需上傳***行為樣本名、***列為基因名的表達(dá)矩陣轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)表達(dá)量可以使用FPKM、TPM或TMM；芯片數(shù)據(jù)使用基因表達(dá)強(qiáng)度；如果下載GEO數(shù)據(jù)，需要對(duì)探針注釋為基因，然后上傳注釋后的表達(dá)文件。第二步：上傳分組文件分組文件***列文樣本名，第二列為分組。“1”表示來(lái)自正常組織的樣本，“2”表示**亞型1的樣本，“3”表示**亞型2的樣本，依此類推 提供生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域內(nèi)的課題思路設(shè)計(jì)。凋亡課題一站式

根客戶的研究方向查閱相關(guān)文獻(xiàn)?；A(chǔ)分子實(shí)驗(yàn)課題代發(fā)服務(wù)

CircACTN4 直接與 FUBP1 相互作用并*** MYC 的轉(zhuǎn)錄

為了探索circACTN4的分子機(jī)制，首先進(jìn)行了pull down和質(zhì)譜分析circACTN4結(jié)合蛋白，發(fā)現(xiàn)FUBP1在circACTN4上顯著富集。RIP 檢測(cè)進(jìn)一步證實(shí) FUBP1 可以通過(guò)qRT-PCR與BC細(xì)胞中的內(nèi)源性circACTN4 特異性結(jié)合。FISH-IF 分析顯示 circACTN4和FUBP1共定位于細(xì)胞核中。但是circACTN4 的上調(diào)和敲低并沒(méi)有改變 FUBP1的表達(dá)水平，表明circACTN4不參與FUBP1的翻譯后調(diào)控。ChIP-PCR測(cè)定證實(shí)FUBP1與BC細(xì)胞中MYC啟動(dòng)子結(jié)合。構(gòu)建了 FUBP1 和 FIR 過(guò)表達(dá)和敲低質(zhì)粒。通過(guò)qRT-PCR和蛋白質(zhì)印跡確定轉(zhuǎn)染效率。qRT-PCR和WB的結(jié)果表明，F(xiàn)UBP1的上調(diào)或下調(diào)分別顯著增加或降低了BC細(xì)胞中MYC的表達(dá)水平。此外， qRT-PCR發(fā)現(xiàn)FUBP1在BC組織中的表達(dá)明顯高于鄰近正常組織中的表達(dá)。Pearson相關(guān)分析表明circACTN4的水平與BC組織中FUBP1的表達(dá)呈正相關(guān)。 基礎(chǔ)分子實(shí)驗(yàn)課題代發(fā)服務(wù)

公司特色是以各式高通量二代測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過(guò)英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫(xiě)SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開(kāi)發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開(kāi)放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。

1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書(shū)奠定較好的基礎(chǔ)

2.標(biāo)書(shū)申請(qǐng)：提供標(biāo)書(shū)課題設(shè)計(jì)、撰寫(xiě)，標(biāo)書(shū)部分基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的開(kāi)展，設(shè)計(jì)的標(biāo)書(shū)均符合科研前沿?zé)狳c(diǎn)，中標(biāo)率很高。

3.提供熱點(diǎn)**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c(diǎn)研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究

4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序

5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片

6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)

7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過(guò)表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)