肝脂肪變性課題分子生物學(xué)

RIT1M90I***降低了MAD2-CDC20和BubR1-CDC20的相互作用(圖4E和4F)；表明致病RIT1蛋白水平阻礙MCC的完整性，符合RIT1從CDC20中隔離MAD2并促進(jìn)MCC拆卸的模型。用重組RIT1補(bǔ)充這些提取物增加了CyclinB1和Securin的泛素化和降解，表明APC/C活性增加，可能是由于MCC抑制緩解(圖4G)。RIT1缺失細(xì)胞顯示CyclinB1降解延遲(圖4H)。此外，RIT1M90I的表達(dá)加速了正常細(xì)胞生長(zhǎng)下CyclinB1的降解(圖4I);然而，其對(duì)CyclinB1降解的影響在藥理學(xué)誘導(dǎo)的有絲分裂阻滯下被消除(圖S4M)，這表明致病性水平的RIT1不能抑制過(guò)度活躍的SAC反應(yīng)。soRNA測(cè)序的 整套服務(wù)。肝脂肪變性課題分子生物學(xué)

為了使細(xì)胞在G1/S檢查點(diǎn)同步，我們對(duì)它們施加雙胸腺嘧啶脈沖。這種處理有效地抑制了PTEN-WT和PTEN-398A細(xì)胞在G1/S邊界(圖4B)。然后在正常生長(zhǎng)培養(yǎng)基中釋放細(xì)胞，在S期進(jìn)展期間用IR處理，6小時(shí)后收集細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期分布(實(shí)驗(yàn)方案見(jiàn)補(bǔ)充圖7A)。大部分PTEN-WT細(xì)胞被阻滯在s期，而PTEN-398A細(xì)胞未能阻滯細(xì)胞周期，而是發(fā)展到G2/M期(圖4C)。通過(guò)測(cè)定表達(dá)磷酸化組蛋白H3(Ser10)的細(xì)胞比例，證實(shí)了這一觀察結(jié)果。磷酸化組蛋白H3(Ser10)標(biāo)志著細(xì)胞處于有絲分裂階段。(圖4d)。TBI課題設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)使用motif和CHIP-seq預(yù)測(cè)影響基因簇表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子。

驗(yàn)證LIR基序突變影響自噬

在HEK293T細(xì)胞中進(jìn)行co-IP，結(jié)果表明STBD1LIR基序W203C是影響基因互作的重要結(jié)構(gòu)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，STBD中W203C突變影響其與GABARAPL1的結(jié)合，進(jìn)而影響自噬指標(biāo)的表達(dá)。

5.  在臨床樣本中檢測(cè)STBD1的表達(dá)

在*組織、*旁中檢測(cè)STBD1的表達(dá)水平，結(jié)果表明STBD1在*組織中***下調(diào)，與之前的預(yù)測(cè)結(jié)果一致。

6.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究STBD1的功能

在多種*細(xì)胞中進(jìn)行細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)，STBD1抑制*細(xì)胞生長(zhǎng)，突變W203C會(huì)部分回復(fù)STBD1的抑制作用。

7.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證STBD1的功能

裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)表明，STBD1抑制**生長(zhǎng)。

8.轉(zhuǎn)錄組、代謝組分析

在細(xì)胞中干擾STBD1，然后進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，分析表達(dá)水平***改變的基因，并進(jìn)行通路富集分析。分析發(fā)現(xiàn)，STBD1抑制**生長(zhǎng)可能是通過(guò)改變基因轉(zhuǎn)錄和重塑糖酵解/糖異生途徑。

為了進(jìn)一步驗(yàn)證STBD1是否重塑代謝，進(jìn)行代謝組分析。結(jié)果表明，STBD1敲除后糖酵解增強(qiáng)。

9.構(gòu)建LIRCP調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)

將LAMs對(duì)應(yīng)蛋白、自噬相關(guān)基因按照生物學(xué)功能聚類(lèi)，構(gòu)建調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，將自噬與**聯(lián)系起來(lái)。

5.腸道微生物群和循環(huán)代謝產(chǎn)物之間的聯(lián)系

采用非靶向代謝組學(xué)方法測(cè)量三組血清代謝產(chǎn)物，并研究腸道微生物組和宿主循環(huán)代謝產(chǎn)物之間的關(guān)系。主成分分析(PCA)顯示，三組間主要代謝成分差異***(圖6A)。OP***A的監(jiān)督正交投影評(píng)分圖也顯示出PCOS大鼠與對(duì)照組、DHEA+PBS組與DHEA+tempol組之間的明顯區(qū)別(圖6B)。圖6C列出了三組52種血清代謝物(包括26種脂類(lèi)及類(lèi)脂分子)的相對(duì)豐度，說(shuō)明PCOS大鼠大部分血清代謝物的豐度與對(duì)照組大鼠完全不同，說(shuō)明DHEA***對(duì)血清代謝有深遠(yuǎn)的影響。PCOS大鼠服用Tempol后，血清代謝產(chǎn)物的豐度也發(fā)生了***變化，引起28種血清代謝物豐度的變化在tempol作用下部分減弱(圖6C)。 我們接下來(lái)研究了Pex對(duì)HSCs生物學(xué)行為的影響。

上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)促進(jìn)**發(fā)生和轉(zhuǎn)移，增加**對(duì)***干預(yù)的耐受性。TGF-b和Wnt通路的異常***誘導(dǎo)EMT。lncRNAs***影響EMT調(diào)控。2021年6月發(fā)表于Molecular Therapy-Nucleic Acids（IF=8.886）的文章“l(fā)ncRNA MIR210HG promotes the progression of endometrial cancer by spongingmiR-337-3p/137 via the HMGA2-TGF-b/Wnt pathway”對(duì)此展開(kāi)了研究。在此，我們發(fā)現(xiàn)MIR210HG在子宮內(nèi)膜*組織中過(guò)表達(dá)，與不良預(yù)后相關(guān)。MIR210HG的沉默在體外***抑制了細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和EMT表型的形成以及在體內(nèi)的**發(fā)生。生物信息學(xué)分析、RIP分析和熒光素酶分析表明，MIR210HG作為miR-337-3p和miR-137的分子海綿，調(diào)節(jié)HMGA2的表達(dá)。此外，MIR210HG過(guò)表達(dá)***增強(qiáng)了Wnt/b-catenin和TGF-b/Smad3信號(hào)通路基因，而MIR210HG或HMGA2下調(diào)抑制了Wnt/b-catenin和TGF-b/Smad3信號(hào)通路基因。我們?cè)贛IR210HG-miR-337-3p/137-HMGA2軸上的發(fā)現(xiàn)說(shuō)明了其作為子宮內(nèi)膜****發(fā)展的靶點(diǎn)的潛力。英拜生物對(duì)整體實(shí)驗(yàn)實(shí)施的全局把控。細(xì)胞功能課題CRO

促*分泌體通過(guò)外泌體傳遞和運(yùn)輸是轉(zhuǎn)移前微環(huán)境形成和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵。肝脂肪變性課題分子生物學(xué)

我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，MCD處理的Caspase-11缺陷小鼠顯示更低的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平(圖2D)、血清天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平(圖2E)和肝臟甘油三酯水平(圖2F)。總之，我們的結(jié)果表明Caspase-11缺陷減輕了MCD誘導(dǎo)的小鼠肝臟脂肪變性。

3.Caspase-11缺乏減弱NASH小鼠的肝纖維化

通過(guò)測(cè)量纖維化相關(guān)因子的表達(dá)我們?cè)u(píng)估Caspase-11缺失對(duì)MCD誘導(dǎo)的肝纖維化的影響。在正常條件下，野生型和Caspase-11缺陷小鼠的TGF-β(圖3A)、α-Sma(圖3B)和Col1a1(圖3C)表達(dá)相似。MCD處理的野生型小鼠中TGF-β、α-Sma和Col1a1的表達(dá)***上調(diào)。相比之下，MCD處理的Caspase-11缺陷小鼠TGF-β、α-Sma和Col1a1的mRNA水平***降低。這些結(jié)果表明，Caspase-11缺乏可減少M(fèi)CD處理小鼠的肝纖維化。 肝脂肪變性課題分子生物學(xué)

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