細胞周期蛋白依賴性激酶4和6(CDK4/6)的藥理學抑制劑是***受體陽性乳腺*的獲批***藥物，目前正在其他**類型的數(shù)百項臨床試驗中進行評價。這些抑制劑的臨床成功在很大程度上歸因于定義明確的**內(nèi)在細胞抑制機制，而其作為免疫調(diào)節(jié)劑的新作用知之甚少。本研究利用整合的表觀基因組、轉(zhuǎn)錄組學和蛋白質(zhì)組學分析，證明了CDK4/6抑制劑在促進免疫T細胞記憶的表型和功能獲得中的新作用。本文的機制見解拓寬了CDK4/6抑制劑作為增強抗**T細胞免疫的臨床工具的前瞻性效用。本研究于2 021年5月14日發(fā)表在《Cancer Discovery》IF:29.497期刊上。zVAD預處理也略微增加了IR后PTEN-398A細胞中未解決的DNA損傷灶的數(shù)量。糖尿病課題細胞實驗
一、scRNA-Seq和scATAC-Seq的整合
共嵌入的UMAP圖顯示，scRNA-seq和scATAC-seq數(shù)據(jù)集中分析的大部分細胞相互重疊，這表明在大多數(shù)細胞簇中，染色質(zhì)可及性和相應的基因轉(zhuǎn)錄表達的變化是一致的(圖2A)。整合結(jié)果顯示，兩個數(shù)據(jù)集中所有巨噬細胞簇幾乎完全重疊，表明我們的研究中確定的所有巨噬細胞簇沒有明確區(qū)分。scATAC-seq和scRNA-seq數(shù)據(jù)的單個UMAP圖顯示了各自的小區(qū)集群標識(圖2B和2C)。然后使用每個細胞簇中**個上調(diào)的基因生成熱圖(圖2D)。如圖2E所示，暴露于慢性d-流中的ec表現(xiàn)出許多與致***途徑相關(guān)的已知生物學過程的誘導。 貴州課題贈送提供技術(shù)路線可以上傳原始的fast文件。
6、MiR-199a-5p改善MRL/lpr小鼠疾病
接下來，在體內(nèi)評估了miR-199a-5p對MRL/lpr小鼠的影響。17周齡MRL/lpr小鼠每4天注射20nmolmiR-199a-5pagomir或?qū)φ?agomirnc)，共4周(圖6A)。末次注射后48h處死小鼠，分離脾臟CD4+T細胞。與對照組相比，miR-199a-5pagomir處理組顯示miR-199a-5p水平升高(圖6B)，Sirt1表達降低(圖6C)，衰老標志物p21和p16的表達***上調(diào)(圖6D)。這些數(shù)據(jù)表明hUC-MSCs通過miR-199a-5p增加MRL/lpr脾CD4+T細胞衰老。
接下來，研究系統(tǒng)給予miR-199a-5p agomir是否能挽救MRL/lpr小鼠的狼瘡表型。與agomir nc組相比，miR-199a-5p agomir處理組脾臟和淋巴結(jié)明顯縮小(圖7A-B)，血清中anti-dsDNA抗體、IgG水平下降(圖7D-E)。血清ANA水平有下降趨勢(圖7C)。miR-199a-5p agomir處理組的腎損傷，表現(xiàn)為尿蛋白下降（圖7F），腎小球增大和細胞增生減少(圖7G)，外周***袢中IgG沉積減少(圖7h)。綜上所述，這些數(shù)據(jù)表明hUC-MSCs移植通過miR -199a-5p介導的Sirt1信號下調(diào)從而增加脾CD4+ T細胞的衰老，改善MRL/lpr小鼠的疾病表型。
2）LINC00926通過抑制乳腺*細胞中PGK1的表達來抑制增殖、遷移和侵襲
為了研究LINC00926在乳腺*細胞中的生物學功能，我們用LINC00926***細胞，對其進行細胞生長、遷移和侵襲分析。細胞增殖和集落形成實驗顯示，過表達LINC00926可降低MDA-MB-231和MCF-7細胞的增殖(圖2A和2B)。在LINC00926轉(zhuǎn)染的細胞系中，PGK1的表達可逆轉(zhuǎn)上述作用。過表達LINC00926也顯示出遷移和侵襲能力下降(圖2C和2D)。同樣，PGK1在LINC00926轉(zhuǎn)染的細胞中重新表達逆轉(zhuǎn)了這些作用。此外，敲除PGK1還可以抑制LINC00926調(diào)控乳腺*細胞增殖、遷移和侵襲的能力(圖2E-2H)，表示LINC00926通過抑制PGK1的表達來抑制乳腺*細胞的增殖、遷移和侵襲。 阻斷atm依賴的磷酸化會損害DNA損傷后PTEN的亞細胞再分配。
1）circMAPK1的鑒定和circMAPK1的臨床特征
由于MAPK信號通路在**發(fā)生和進展中起著重要的病理作用，我們首先根據(jù)在線數(shù)據(jù)庫circBase中的circRNA測序數(shù)據(jù)分析了來自MAPK通路相關(guān)基因的circRNA。然后我們清點了MAPK通路相關(guān)的circRNAs，發(fā)現(xiàn)大部分細胞系可以表達數(shù)以百計的MAPK通路的circRNAs(圖1a)。在來源于MAPK1的circRNA中，circ-0006203、circ0004872和circ-0008870在超過三個**的測序數(shù)據(jù)集中被***檢測。我們利用qRT-PCR檢測了這三種circRNA在胃*患者的胃*組織和*旁組織中的表達水平(圖1b)。結(jié)果顯示circ-0004872的表達變化**為***。circ-0004872在*組織/細胞中的reads明顯低于正常組織/細胞(圖1c)。此外，GSE121445和GSE100170數(shù)據(jù)庫中也證實了GC中circMAPK1的下調(diào)(圖1d)。這些數(shù)據(jù)提示circ-0004872具有潛在的抑制作用，從而促使我們進一步研究其在胃*惡性**中的作用。 ***ATM對PTEN的磷酸化增加了DNA損傷后AKT和p27Kip1的***。代謝組學課題國家自然科學基金
soRNA測序的 整套服務(wù)。糖尿病課題細胞實驗
再生胰腺中胰腺巨噬細胞的動態(tài)轉(zhuǎn)錄組譜
為了進一步了解AP恢復過程中巨噬細胞的表型和功能，分離出胰腺巨噬細胞用于RNA-seq分析。顯著性差異表達基因繪制熱圖。為了評估這些基因簇的功能，使用網(wǎng)絡(luò)工具DAVIDGeneOntology(GO)進行了功能注釋分析。值得注意的是，在急性炎癥期（簇32，D1特征簇）高度表達的基因特別富集炎癥反應和CCR2依賴性趨化性。簇25和27包含在ADM階段（第3天）高表達的基因，具有不同的表達模式和功能，表明該階段的巨噬細胞異質(zhì)性。例如，與ECM-受體相互作用和PI3K-AKT信號通路相關(guān)的基因在簇27中富集，而與細胞周期相關(guān)的基因在簇25中富集。 糖尿病課題細胞實驗
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