6）M1-Exos通過傳遞miR-155上調(diào)ROS水平，損害bEnd.3細(xì)胞線粒體功能
我們研究了外泌體miR-155與bEnd.3細(xì)胞中線粒體功能的關(guān)系。我們發(fā)現(xiàn)，與miR-NCOE-Exos相比，miR-155OE-Exos處理上調(diào)了ROS水平(圖6A和B)，線粒體超氧化物水平(圖6C和D)和線粒體電位(圖6E)；然而，miR-155KD-Exos處理則顯示了相反的結(jié)果(圖6A-E)。此外，miR-155OE-Exos可使線粒體腫脹更大，形態(tài)更短，線粒體碎片細(xì)胞比例更高，而miR-155KD-Exos可減輕線粒體腫脹(圖6F和G)。miR-155OE-Exos處理后的OCR、基礎(chǔ)呼吸、ATP產(chǎn)生、呼吸能力和呼吸逆轉(zhuǎn)均明顯下降，而miR-155KD-Exos處理減輕了氧化呼吸功能障礙(圖6H和I)。這些結(jié)果表明，上調(diào)外泌體miR-155可導(dǎo)致過度ROS的產(chǎn)生和線粒體功能障礙。 soRNA測序的 整套服務(wù)。陜西課題整體服務(wù)
L-14c-胱氨酸攝取試驗(yàn)結(jié)果顯示，YTHDC2通過其YTH域抑制了H1299細(xì)胞產(chǎn)生的異種移植物、小鼠形成的LUAD和患者來源的LUAD細(xì)胞的胱氨酸攝取(圖3D-F)。圖3H證明了系統(tǒng)Xc功能受損與GSH水平降低相關(guān)。NAC和GSH給藥后發(fā)現(xiàn)，KPYWT小鼠的**負(fù)荷明顯高于給藥對照小鼠，且水平與KPE小鼠相似(圖3H、I)。與KPE小鼠相比，GSH和NAC給藥*導(dǎo)致KPYWT小鼠**中GSH/GSSG比值***增加。NAC和GSH的補(bǔ)充降低了KPYWT小鼠的脂質(zhì)過氧化并縮短了存活時間(圖3K、L)。浙江課題免費(fèi)設(shè)計(jì)提供***科研設(shè)計(jì)咨詢及輔助實(shí)驗(yàn)。
CD8+T細(xì)胞是**重要的**適應(yīng)性免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，通過直接殺死*細(xì)胞來介導(dǎo)抗**免疫。PD-1抑制***CD8+T細(xì)胞以增加T細(xì)胞***，從而導(dǎo)致**消退。因此，CD8+T細(xì)胞的***可能是通過免疫療法***LSCC的關(guān)鍵。這篇文章以生信分析開篇，篩選出關(guān)鍵基因后在動物模型與臨床樣本中進(jìn)行了簡單的驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)思路如下：
1.下載GEO數(shù)據(jù)并進(jìn)行數(shù)據(jù)篩選下載數(shù)據(jù)集GSE17710，選擇變異系數(shù)＞0.1的5000個基因進(jìn)行后續(xù)WGCNA分析2.CIBERSORT分析免疫浸潤分析獲得每個樣本中22種免疫細(xì)胞的豐度，選擇T細(xì)胞作為WGCNA分析的性狀**（其中，T細(xì)胞包括7中亞型）3.WGCNA構(gòu)建基因網(wǎng)絡(luò)使用R包“WGCNA”對5000個WGCNA分析，構(gòu)建LSCC基因共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)，軟閾值β=5（R2=0.9）構(gòu)建無標(biāo)度網(wǎng)絡(luò)。動態(tài)混合切割來建立分層聚類樹，樹枝**了一系列具有相似表達(dá)數(shù)據(jù)的基因，每個樹葉**了樹上的單個基因。生成了十八個模塊。
ESCRT-III復(fù)合物在ferroptosis期間被***，并拮抗細(xì)胞死亡在
壞死和焦亡過程中，依賴于ESCRT-III復(fù)合物作用的膜修復(fù)可以延緩細(xì)胞死亡。作者使用CHMP4B斑點(diǎn)形成作為代替ESCRT-III***。**初，CHMP4B主要表現(xiàn)為均勻的胞質(zhì)分布，然而，在RSL3處理后，該蛋白定位于不同的點(diǎn)狀結(jié)構(gòu)，隨著時間的推移，其數(shù)量和熒光強(qiáng)度都在增加(圖4A,B)。CHMP4B點(diǎn)的形成大致與胞質(zhì)Ca2+濃度的增加相一致(圖4C,E)。當(dāng)細(xì)胞修復(fù)機(jī)制**終被淹沒時，細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平持續(xù)升高、細(xì)胞圓化和ESCRT-III復(fù)合體***后，細(xì)胞膜**終破裂(圖4B,E,F)。PEG(2.7nm)處理也阻斷了CHMP4B斑點(diǎn)的形成(圖4G-J)。這些結(jié)果證明了ESCRT-III復(fù)合物以Ca2+依賴的方式被***來修復(fù)膜損傷。 阻斷atm依賴的磷酸化會損害DNA損傷后PTEN的亞細(xì)胞再分配
進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，膜損傷后形成了兩個不同的囊泡池。較大的囊泡較早從質(zhì)膜形成， Rab5、EEA1（早期內(nèi)吞作用）、肌動蛋白、Rab35 呈陽性， LC3 偶爾呈陽性。相比之下，后來形成的囊泡較小且 LC3 呈陽性，**終出現(xiàn)在靠近 Rab5 陽性囊泡的位置。
內(nèi)化囊泡通過滲透作用在細(xì)胞質(zhì)中收縮，與溶酶體融合GFP-Rab35、RFP-Rab5轉(zhuǎn)染MCF7，研究胞吞小體的“行動軌跡”。胞吞小體囊泡移動至細(xì)胞質(zhì)，在細(xì)胞質(zhì)中收縮成小囊泡，***與溶酶體融合。
巨胞飲由質(zhì)膜完整性觸發(fā)實(shí)驗(yàn)表明巨胞飲作用在損傷后被***，需要重組，從而保持質(zhì)膜的完整性。此外，LC3囊泡形成是響應(yīng)囊泡內(nèi)化而觸發(fā)。
Rubicon定位于胞吞小體的界膜，是LC3積累所必需的 生命科學(xué)領(lǐng)域內(nèi)的精細(xì)研究。河南課題整體服務(wù)
高通量測序后續(xù)的機(jī)制實(shí)驗(yàn)。陜西課題整體服務(wù)
2021年3月，劍橋大學(xué)血液學(xué)系A(chǔ)naCvejic教授團(tuán)隊(duì)?wèi)?yīng)用scRNA-seq和scATAC-seq技術(shù)對來自胚胎肝臟和骨髓的8,000多個免疫表型HSPCs進(jìn)行綜合分析，探索人類發(fā)育過程中造血功能的調(diào)節(jié)機(jī)制。該項(xiàng)工作以“Integrativesingle-cellRNA-seqandATAC-seqanalysisofhumandevelopmentalhematopoiesis”為題發(fā)表在CellStemCell上。在胚胎發(fā)育過程中，造血干細(xì)胞(HSCs)需要快速分化為成熟的血細(xì)胞。我們目前對胎兒造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞(HSPCs)的認(rèn)識主要是通過小鼠和體外模型系統(tǒng)取得的。已有研究表明，胎兒造血過程包括發(fā)育過程中不同***上罕見造血干細(xì)胞的分化、遷移和分化的幾個**波。陜西課題整體服務(wù)
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7.實(shí)時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)