鼻咽*通路此前尚未被認(rèn)為與創(chuàng)傷介導(dǎo)的神經(jīng)退行性變有關(guān)，但據(jù)報道，在ALS/FTD、AD、HD和其他神經(jīng)退行性疾病中，鼻咽*通路被破壞。因此，我們決定進一步研究鼻咽*改變介導(dǎo)TDP-43在TBI中的病理變化。蛋白質(zhì)組學(xué)分析顯示，一些Nups在腦損傷時被上調(diào)(圖1D和E)。對這些Nups的定量逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)分析證實，TBI***上調(diào)Nup93-2、Nup54、Nup62、Nup44A，和Nup214 mRNA水平的果蠅幼蟲(圖1F I和圖1圖Supplement 1G)和成年大腦(圖1J L)。此外，核輸出基因Emb (Exportin)的mRNA水平在tbi后***增加(圖1M)，而與對照組相比，微管相關(guān)蛋白Futsch的mRNA水平?jīng)]有變化(圖1圖Supplement 1H)，這與蛋白質(zhì)組學(xué)分析一致。Western blotting進一步證實了tbi依賴性的果蠅幼蟲腦內(nèi)Nup214蛋白水平的升高(圖1N和O)。Western blot分析了損傷后幼蟲(0、2、4和6小時)和成蟲(0、2、4、24和72小時)的時間過程，以評估Nup214蛋白的水平。在檢測的時間點上，不管是幼蟲還是成人的大腦中，Nup214蛋白的水平都是上調(diào)的(圖1P,Q,R,S)，這表明創(chuàng)傷可能會破壞Nup214的水平和體內(nèi)的轉(zhuǎn)換。TRF測序課題整體服務(wù)。江西課題中標(biāo)率高
HOXBLINC的缺失擾亂了NPM1c+介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄程序和白血病發(fā)生
隨后鑒定了NPM1c+AML和NPM1cWTAML病人中的差異表達基因，與WT相比，有871個下調(diào)基因和980個上調(diào)基因，包括HoxBlinc和NPM1c+的特征基因HoxB2-5，HoxA7,9-11，Meis1，Runx1（圖1c）。然后，通過RNA-seq分析比較了對照組和HOXBLINCi細胞的全基因組轉(zhuǎn)錄組變化。一致地，NPM1c+細胞表現(xiàn)出HOXBLINClncRNA和常見的NPM1c+AML標(biāo)記基因的高表達(圖1d)。有趣的是，在OCI-AML3細胞中抑制HOXBLINC***抑制了許多NPM1c+標(biāo)志性基因的轉(zhuǎn)錄，如HOXB2-5、HOXA9-11、RUNX1和MEIS1(圖1d)。 重慶課題推薦咨詢阻斷atm依賴的磷酸化會損害DNA損傷后PTEN的亞細胞再分配。
5）M1-Exos通過傳遞miR-155加重了EndoMT
為了研究外泌體miR-155在SCI后M1-Exos介導(dǎo)的BSCB破壞惡化中的作用，構(gòu)建miR-155過表達(miR-155OE)和敲低(miR-155KD)BMDMs，然后分離外泌體并處理bEnd.3細胞。如圖5A和B所示，miR-155OE-Exos組TEER值***降低，通透性***增加，而miR-155KD-Exos組則相反。加入miR-155OE-Exos后，ZO-1和Occludin的熒光強度明顯降低，而miR-155KD-Exos處理后，ZO-1和Occludin的表達***增強(圖5C和D)。此外，westernblot檢測TJs蛋白的表達，結(jié)果與上述討論的結(jié)果相似(圖5E)。miR-155OE-Exos可促進細胞形態(tài)轉(zhuǎn)化，其分支更少，體細胞更長。miR-155KD-Exos處理后的結(jié)果則相反(圖5F)。miR-155OE-Exos暴露后，I型膠原蛋白、III型膠原蛋白和α-SMA蛋白水平上調(diào)，CD31蛋白水平下調(diào)，而miR-155KD-Exos作用相反(圖5G)。以上結(jié)果表明，外泌體miR-155在促進bEnd.3細胞的EndoMT中起著至關(guān)重要的作用。
4）SsD通過直接抑制FTOm6A去甲基化活性來誘導(dǎo)m6A修飾
為了檢測m6A在RNA上的變化，我們在SsD處理的白血病細胞中進行了m6A點印跡實驗。如圖4A所示，SsD***增加了m6A在轉(zhuǎn)錄組中的豐度。此外，HPLC-MS/MS定量證實了SsD處理的NB4和Kas-1細胞mRNA中細胞m6A的增加(圖4B)。接下來，我們檢測了FTO的兩個直接靶點MYC和RARA在SsD處理的細胞中的表達。SsD在mRNA和蛋白水平***下調(diào)了NB4和Kas-1細胞的MYC，而上調(diào)了RARA(圖4C-D)。有趣的是，SsD依賴的MYC和RARA的減少是由于FTO過表達細胞中mRNA和蛋白穩(wěn)定性的降低(圖4E-4H)。綜上所述，這些結(jié)果證明了FTO及其下游靶點(如MYC,RARA)是FTO過表達白血病細胞中SsD的主要效應(yīng)因子。 進一步了解阻斷atm依賴的PTEN磷酸化如何影響細胞對基因毒性損傷的反應(yīng)。
為了檢測補充NAD + 是否可以糾正IFNα刺激的下游效應(yīng)，用1 mM β-煙酰胺單核苷酸(NMN)培養(yǎng)CD8 + T細胞以恢復(fù)NAD +/NADH比值（圖6e）。然后，評估了用抗CD3/CD28再刺激后的氧化反應(yīng)和細胞活力。補充NMN的NAD + 增加了OCR（圖6f），但未增加ECAR，表明線粒體能力增加。重要的是，通過NMN處理恢復(fù)NAD + 的可用性改善了IFNα延長和TCR刺激后的細胞活力（圖6 g），表明NAD途徑調(diào)節(jié)這些活化的人CD8 + T細胞中的線粒體適應(yīng)性和細胞存活率?？傊@些數(shù)據(jù)表明，在人TCR刺激的CD8 + T細胞中，延長IFNα暴露增加了NAD + 的消耗，并降低了NAD +/NADH比值。這導(dǎo)致再刺激后線粒體呼吸缺陷和細胞活力降低。NAD + 前體NMN糾正了這些代謝變化，提高了CD8 + T細胞活力。了解客戶的研究方向以及所能提供的樣本類型和樣本量確定研究思路。內(nèi)蒙古課題詢問報價
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六、多組學(xué)方法分析表征近端小管細胞子集
Cicero研究了從PT到PT_VCAM1轉(zhuǎn)變過程中染色質(zhì)可及性的變化。VCAM1和TPM1轉(zhuǎn)錄增加(圖6a)與VCAM1基因體和啟動子區(qū)域染色質(zhì)可及性增加相關(guān)(圖6b,c)。同樣，SLC5A12和SLC4A4轉(zhuǎn)錄降低(圖6c)與染色質(zhì)可及性降低相關(guān)(圖6c，補充圖15)。通過評估chromVAR轉(zhuǎn)錄因子的活性，我們發(fā)現(xiàn)了可能調(diào)節(jié)近端小管和PT_VCAM1之間過渡的轉(zhuǎn)錄因子。有趣的是，近端小管顯示出強大的HNF4A活性，該活性在PT_VCAM1簇中降低，并與增加的REL和RELA活性相一致(圖6d)。我們在PT_VCAM1細胞核中驗證了減少的HNF4A蛋白表達(圖6e)。我們從VCAM1基因體中鑒定出一個約60kb的開放染色質(zhì)區(qū)域，該區(qū)域包含一個與VCAM1啟動子相互作用的RELA基序(通過ciscoaccessibilitynetwork)。實際上，ChIP-qPCR擴增了該位點，使其能夠與RELA結(jié)合(圖6f，補充圖17b)，為該細胞類型中RELA調(diào)控VCAM1表達提供了實驗證據(jù)。 江西課題中標(biāo)率高
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