SouthernBlot是檢測(cè)基因組樣本中特定DNA序列的一種方法。主要原理是根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，具有一定同源性的兩條核酸單鏈在適宜環(huán)境中可雜交形成雙鏈。
通過(guò)凝膠電泳分離經(jīng)限制性?xún)?nèi)切酶消化的待檢DNA分子，轉(zhuǎn)移至尼龍膜或其他固相支撐物上，固定后與標(biāo)記好的探針進(jìn)行雜交，利用放射自顯影或酶反應(yīng)顯色,從而檢測(cè)特定DNA分子的含量。
SouthernBlot實(shí)驗(yàn)流程基因組提取:基因組要求完整性好,純度高基因組酶切電泳分離酶切好的DNA樣品:20~40ug/泳道,25-30V穩(wěn)壓電泳12-24h。轉(zhuǎn)膜.探針制備.預(yù)雜交.雜交.檢測(cè). 每管細(xì)胞密度超過(guò)1x106/ml.細(xì)胞經(jīng)neurofilament.MAP2和-ulinlI的兔疫熒光鑒定。代謝技術(shù)服務(wù)中標(biāo)率高
circRNA測(cè)序分析內(nèi)容：n測(cè)序數(shù)據(jù)質(zhì)量控制.nMapping統(tǒng)計(jì)分析.nReads基因結(jié)構(gòu)統(tǒng)計(jì)分析.nReads染色體上分布統(tǒng)計(jì).ncircRNA預(yù)測(cè)及注釋.ncircRNA/lncRNA/mRNA表達(dá)分析ncircRNA/lncRNA/mRNA差異表達(dá)分析.n差異基因功能富集分析.nGOTree網(wǎng)絡(luò)分析.nPathway網(wǎng)絡(luò)分析.ncircRNA關(guān)聯(lián)基因功能富集分析.nmiRNA-circRNA靶基因分析.ncircRNA-miRNA-mRNA聯(lián)合分析.
circRNA測(cè)序流程:總RNA，RNA樣本質(zhì)檢，去除核糖體，RN**段化，cDNA雙鏈，二端加測(cè)序接頭，PCR擴(kuò)增，Hiseq上機(jī)測(cè)序 安徽技術(shù)服務(wù)技術(shù)指導(dǎo)共轉(zhuǎn)染細(xì)胞24-72h后,進(jìn)行雙熒光素酶檢測(cè),進(jìn)-步驗(yàn)確定目的microRNA的靶基因。
服務(wù)流程:構(gòu)建過(guò)表達(dá)microRNA載體以及對(duì)照載體或客戶提供人工合成壽核苷酸-~轉(zhuǎn)染細(xì)胞系--qRT-PCR檢測(cè)目的MicroRNA前體的表達(dá)情況--分析目的MicroRNA與細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞侵襲、細(xì)胞遷移之間的調(diào)控關(guān)系--出具書(shū)面報(bào)告,qRT-PCR分析的原始數(shù)據(jù)客戶提供:MicroRNA前體(Ambion公司)或mimic與壽核苷酸(即對(duì)照前體或controlmimic)及細(xì)胞系。公司提供:MicroRNA表達(dá)載體的質(zhì)粒、質(zhì)粒測(cè)序圖、qRT-PCR分析的原始數(shù)據(jù)、結(jié)果分析的書(shū)面報(bào)告。
英拜生物microRNA實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)服務(wù)流程如下:引物設(shè)計(jì)、合成設(shè)計(jì)并合成目的microRNA的莖環(huán)RT引物、PCR引物。樣品RNA抽提a.組織樣品:取適量(50~100mg)新鮮組織或正確保存的組織樣品,勻漿后抽提RNA。b.細(xì)胞樣品:取1x106~1x107細(xì)胞,吸去培養(yǎng)液后用TRIZOL試劑抽提RNA。RNA質(zhì)量檢測(cè)a.紫外吸收測(cè)定法測(cè)定RNA在波長(zhǎng)260nm和280nm的吸收值,獲得RNA的濃度并通過(guò)A260/280及A260/230的吸收比值判斷RNA的純度。b。用甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳。檢測(cè)RNA純度和完整性構(gòu)建的MicroRNA與基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)通過(guò)構(gòu)建MicroRNA與基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。
英拜公司雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)系統(tǒng)采用熒火蟲(chóng)熒光素酶和海腎熒光素酶組成雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)中，一個(gè)報(bào)告基因（熒火蟲(chóng)熒光素酶）活力的改變，與基因表達(dá)的特定實(shí)驗(yàn)條件相關(guān)，而第二個(gè)報(bào)告基因（海腎熒光素酶）的組成性活力提供了內(nèi)對(duì)照，使實(shí)驗(yàn)值可以規(guī)一化。我們?cè)趩喂苤袦y(cè)試兩個(gè)熒光素酶報(bào)告基因，此兩個(gè)熒光素酶報(bào)告基因具有兼容的化學(xué)特性、操作條件、速度、靈敏度、線性范圍和對(duì)儀器參數(shù)的要求。熒火蟲(chóng)熒光素酶和海腎熒光素酶測(cè)試的組合，提供了雙遺傳報(bào)告基因應(yīng)用的理想測(cè)試系統(tǒng)。我們選用的使螢火蟲(chóng)和海腎熒光素酶具有**適測(cè)試的靈敏度和穩(wěn)定性。附mir-reporter載體的說(shuō)明書(shū),以及實(shí)驗(yàn)報(bào)告,包括載體構(gòu)建過(guò)程,鑒定記錄,測(cè)序報(bào)告,細(xì)胞轉(zhuǎn)染,熒光檢測(cè)。貴州技術(shù)服務(wù)國(guó)家自然科學(xué)基金
tRNAhalves是由ANG在多種應(yīng)激條件下在成熟tRNA的反密碼子環(huán)處特異性切割產(chǎn)生的5-和3-tRNA半分子。代謝技術(shù)服務(wù)中標(biāo)率高
當(dāng)前,microRNA對(duì)靶基因的功能研究+分熱門(mén)。利用熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)尋找或驗(yàn)證microRNA對(duì)靶點(diǎn)作用性是不可或缺的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。英拜生物可為您提供microRNA報(bào)告基因載體構(gòu)建服務(wù),并可進(jìn)一步為您提供熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)。您只需要提供目的microRNA靶位點(diǎn)序列。本公司專(zhuān)業(yè)技術(shù)服務(wù)人員就可替您完成載體構(gòu)建。為您節(jié)省大量的時(shí)間和精力。.下圖為microRNA-reporter載體表達(dá)框架示意圖,具有多克隆位點(diǎn),方便插入目的靶點(diǎn)序列。psiCHECK-2載體用于終點(diǎn)法的細(xì)胞裂解物檢測(cè),包含螢火蟲(chóng)熒光素酶基因,使海腎熒光素酶的表達(dá)水平歸一化，令該系統(tǒng)更可靠、重現(xiàn)性更好。使用psiCHECK-2載體時(shí),無(wú)須通過(guò)共轉(zhuǎn)染進(jìn)行歸一化。代謝技術(shù)服務(wù)中標(biāo)率高
公司特色是以各式高通量二代測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過(guò)英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫(xiě)SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開(kāi)發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開(kāi)放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專(zhuān)題，外泌體研究專(zhuān)題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書(shū)奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書(shū)申請(qǐng)：提供標(biāo)書(shū)課題設(shè)計(jì)、撰寫(xiě)，標(biāo)書(shū)部分基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的開(kāi)展，設(shè)計(jì)的標(biāo)書(shū)均符合科研前沿?zé)狳c(diǎn)，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點(diǎn)**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c(diǎn)研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過(guò)表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)