1.熒光素酶報(bào)告基因載體①螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因載體pGL3LuciferaseReporterVector具有螢火蟲熒光素酶報(bào)告基因，但該報(bào)告基因不含啟動(dòng)子，不能表達(dá)螢火蟲熒光素酶。在該報(bào)告基因前導(dǎo)入外來啟動(dòng)子，相應(yīng)轉(zhuǎn)錄因子與外來啟動(dòng)子結(jié)合，影響熒光素酶報(bào)告基因的表達(dá)。我們首先根據(jù)需要檢測的轉(zhuǎn)錄因子(TF，transcriptionfactor)，選擇與之對應(yīng)的promotor/TRE(transcriptionresponseelement)，并將這個(gè)promotor/TRE的啟動(dòng)序列克隆到載體上（位置與報(bào)告基因相鄰），然后將載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細(xì)胞，如果細(xì)胞內(nèi)TF具有活性，TF與promotor/TRE結(jié)合，熒光素酶報(bào)告基因得到表達(dá)，熒光強(qiáng)度發(fā)生變化；反之，如果細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的TF沒有活性，熒光素酶報(bào)告基因在細(xì)胞內(nèi)不表達(dá)。我們利用靈敏的Bethord公司的LumatLB9507熒光檢測儀來檢測細(xì)胞內(nèi)報(bào)告基因的熒光強(qiáng)度，從而對轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行活性分析。②海腎熒光素酶報(bào)告基因載體phRL-SV40Vector具有海腎熒光素酶報(bào)告基因，該報(bào)告基因含SV40的啟動(dòng)子及增強(qiáng)子，能高水平表達(dá)海腎熒光素酶基因?？勺鳛闄z測轉(zhuǎn)染頻率的內(nèi)對照，使實(shí)驗(yàn)值可以規(guī)一化。細(xì)胞轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備將含目的microRNA靶基因的報(bào)告基因載體、內(nèi)參質(zhì)粒和microRNAmimics或|共轉(zhuǎn)染293T或Hela細(xì)胞。臨床醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)
人原代細(xì)胞分離技術(shù)：***系統(tǒng)的組織是由2類細(xì)胞組成,可大致分為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。神經(jīng)元是大腦的解剖、功能和營養(yǎng)單元。盡管大小和形狀有很大的變化,所有的神經(jīng)元有著共同的形態(tài)特征,是一個(gè)高度復(fù)雜通信網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵組分。作為神經(jīng)系統(tǒng)的主要信號單元,神經(jīng)元是動(dòng)態(tài)極化的細(xì)胞。人類大腦中包含約1x1011神經(jīng)元,每個(gè)神經(jīng)元可以接觸至少10000個(gè)其他神經(jīng)元。HN-mb分離自人的中腦，原代凍存，冰凍運(yùn)輸。每管細(xì)胞密度超過5x105/ml。細(xì)胞經(jīng)neurofilament.MAP2和B-tubulinIl的免疫熒光鑒定。本細(xì)胞經(jīng)檢測不含HNV-1.HBV.HCV.支原體、細(xì)菌、酵母菌和***。HN-mb不推薦長期培養(yǎng)或增值培養(yǎng)。自噬醫(yī)學(xué)相關(guān)技術(shù)服務(wù)整體服務(wù)b。用甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳。檢測RNA純度和完整性。
原位雜交（insituhybridization,ISH）是用標(biāo)記的DNA或RNA為探針，根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則，在原位檢測組織細(xì)胞內(nèi)特定核酸序列的方法。根據(jù)探針的標(biāo)記物是否直接被檢測，原位雜交可分為直接法和間接法。直接法主要用放射性同位素、熒光及某些酶標(biāo)記的探針與靶核酸進(jìn)行雜交，通過放射自顯影、熒光顯微鏡術(shù)或成色酶促反應(yīng)直接顯示。間接法用半抗原標(biāo)記探針，通過免疫組織化學(xué)法對半抗原定位，間接顯示探針與靶核酸形成的雜交體。非放射性標(biāo)記的原位雜交具有安全、經(jīng)濟(jì)、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，因而生物素標(biāo)記探針digaoxin標(biāo)記探針迅速發(fā)展。標(biāo)記探針迅速發(fā)展。
英拜為您提供的實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成；主要實(shí)驗(yàn)步驟如下：1.設(shè)計(jì)并合成RealtimePCR引物。2.引物溶解后使用Promega的TaqDNA聚合酶進(jìn)行含SG（SYBR®Green）的PCR反應(yīng)的優(yōu)化。3.客戶樣品RNA抽提4.RNA質(zhì)量檢測a．紫外吸收測定法測定RNA在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，以計(jì)算其濃度并評估RNA純度。b．使用甲醛電泳試劑（ambion）進(jìn)行變性瓊脂糖凝膠電泳，檢測RNA純度及完整性。5.按照逆轉(zhuǎn)錄酶（Invitrogen或Promega）使用說明將樣品RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。6.制備標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品：進(jìn)行相對定量，需要先將樣品的目的基因以及管家基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其產(chǎn)物進(jìn)行梯度稀釋用于做標(biāo)準(zhǔn)曲線。7.標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品和待測樣品分別加入到含SG的RealTimePCR反應(yīng)液中（其中TaqBeadTM熱啟動(dòng)聚合酶來自Promega公司），進(jìn)行RealTimePCR擴(kuò)增和檢測。8.檢測結(jié)果進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線分析，以對待測樣品的目的基因進(jìn)行定量。相對定量實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)一步用樣品的目的基因測得值除以管家基因測得值以校正誤差，所得結(jié)果**某樣品的目的基因相對含量。9.提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方法及實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果及相關(guān)圖表。2)進(jìn)行多重LDR(MultiplexLDR)進(jìn)行特異性分型檢測。3)通過測序儀電泳讀取檢測結(jié)果。
人原代細(xì)胞分離技術(shù)：神經(jīng)元是大腦的解剖、功能和營養(yǎng)單元。盡管大小和形狀有很大的變化,所有的神經(jīng)元有著共同的形態(tài)特征，是一個(gè)高度復(fù)雜通信網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵組分。作為神經(jīng)系統(tǒng)的主要信號單元,神經(jīng)元是動(dòng)態(tài)極化的細(xì)胞。人類大腦中包含約1x1011神經(jīng)元，每個(gè)神經(jīng)元可以接觸至少10000個(gè)其他神經(jīng)元。腦干神經(jīng)元主要通過調(diào)節(jié)心率、呼吸、睡眠循環(huán)、意識、意識等功能,提供主要的運(yùn)動(dòng)和感覺神經(jīng)支配和綜合功能。分離出的不同腦區(qū)的神經(jīng)元作為區(qū)域特定的疾病和變性研究的***模型,可用于神經(jīng)毒理學(xué)和大腦發(fā)育研究HN-bs分離自人的腦干,原代凍存,冰凍運(yùn)輸。每管細(xì)胞密度超過5x105/ml.細(xì)胞經(jīng)neurofilament.MAP2和B-tubulinIl的免疫熒光鑒定。本細(xì)胞經(jīng)檢測不含HIV-1.HBV.HCV.支原體、細(xì)菌、酵母菌和***。HN-bs不推薦長期培養(yǎng)或增值培養(yǎng)。每管細(xì)胞密度超過1x106/ml.細(xì)胞經(jīng)neurofilament.MAP2和-ulinlI的兔疫熒光鑒定。河南技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)可參觀
免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry，IHC），即免疫組化，是利用免疫學(xué)中抗原抗體特異性結(jié)合的原理。臨床醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)
microRNA靶點(diǎn)的預(yù)測利用Targetscan,miRanda,PicTar軟件得到目的microRNA的預(yù)測靶點(diǎn)序列(客戶提供)。獲得microRNA靶點(diǎn)序列根據(jù)提供的靶序列，合成兩條互補(bǔ)的單鏈DNA模板。或者,設(shè)計(jì)引物PCR打增目的microRNA靶基因3"UTR序列。microRNA靶序列克隆將合成的兩條單鏈退火成雙鏈(具有粘性末端),或?qū)CR產(chǎn)物雙酶切,后連入經(jīng)過同樣雙酶切的miR-reporter載體中,連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a。陽性克隆鑒定。挑選轉(zhuǎn)化的菌落,PCR篩選含有插入片段的陽性克隆,測序驗(yàn)證克隆的序列和目的microRNA靶序列一致。
臨床醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)
公司特色是以各式高通量二代測序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺開放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請：提供標(biāo)書課題設(shè)計(jì)、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的開展，設(shè)計(jì)的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c(diǎn)，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點(diǎn)**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c(diǎn)研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)