LCAT3與FUBP1發(fā)生物理作用，F(xiàn)UBP1在LUAD中也過表達(dá)
為了闡明LCAT3在肺*細(xì)胞中作用的潛在分子機(jī)制，我們進(jìn)行了RNA下拉試驗(yàn)來鑒定LCAT3結(jié)合蛋白。從凝膠中剪切LCAT3義和反義之間的明顯波段用于質(zhì)譜分析。FUBP1因其與LCAT3的特異性結(jié)合而被選擇進(jìn)行進(jìn)一步研究。此外，采用抗FUBP1抗體進(jìn)行RIP檢測(cè)，進(jìn)一步證明FUBP1與LCAT3之間的相互作用。與FUBP1結(jié)合的**序列為L(zhǎng)CAT3的208-342nt，形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)。因此，我們使用LCAT3的208-342nt片段進(jìn)行RNA拉下分析。結(jié)果證實(shí)該莖環(huán)區(qū)(208-342nt)確實(shí)負(fù)責(zé)LCAT3和FUBP1之間的結(jié)合。前人研究表明，F(xiàn)UBP1可以分為三個(gè)結(jié)構(gòu)域，分別是抑制結(jié)構(gòu)域、DNA和RNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域和轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)域。因此，我們構(gòu)建了flag標(biāo)記的全長(zhǎng)野生型FUBP1突變體的類型和三個(gè)缺失域突變體。RIP實(shí)驗(yàn)顯示，LCAT3主要結(jié)合于DNA和RNA結(jié)合區(qū)域(100-447aa)。綜上所述，這些數(shù)據(jù)表明LCAT3與FUBP1發(fā)生物理作用，LCAT3的莖環(huán)區(qū)(208-342nt)和FUBP1的DNA和RNA結(jié)合域(100-447aa)是LCAT3與FUBP1結(jié)合所必需的。此外，我們發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)UBP1的mRNA和蛋白水平在LUAD中均***上調(diào)，且在肺*患者中，F(xiàn)UBP1的高表達(dá)與較短的生存時(shí)間相關(guān)。 大黃酸導(dǎo)致嘌呤代謝正?；湍c道尿酸水平的降低。天津科研贈(zèng)送提供技術(shù)路線
四、在體內(nèi)和體外，NUPs的上調(diào)導(dǎo)致TDP-43/TBPH定位錯(cuò)誤和聚集
為了檢測(cè)Nup上調(diào)對(duì)Tbph (Drosophila TDP-43)病理的影響，我們建立了一個(gè)位點(diǎn)特異性Nup62過表達(dá)(Nup62 OE)蠅線，并對(duì)內(nèi)源性Tbph進(jìn)行染色。在eGFP對(duì)照(以下稱為對(duì)照)表達(dá)的果蠅幼蟲VNC中，Tbph的分布以細(xì)胞核為主，而Nup62 OE幼蟲VNC***改變了Tbph的定位，出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)聚集(圖4A)。定量分析顯示，與對(duì)照組相比，Nup62 OE果蠅幼蟲或成年大腦中斑點(diǎn)Tbph***增加(圖4B）。與對(duì)照組相比，Nup62 OE vnc的核Tbph強(qiáng)度***降低(圖4C)。此外，核細(xì)胞質(zhì)(N/C)分割進(jìn)一步證實(shí)，與對(duì)照組相比，Nup62 OE動(dòng)物的Tbph N/C比值***降低(圖4D和E)，表明Nup62的上調(diào)改變了Tbph在體內(nèi)的亞細(xì)胞定位。Nup62表達(dá)引起的Tbph的錯(cuò)位和聚集也讓我們檢測(cè)了Nup62表達(dá)是否影響Tbph的溶解度。 生物相關(guān)科研推薦咨詢增加乳酸桿菌水平導(dǎo)致尿酸水平下降。
circMAPK14在CRC細(xì)胞和組織中的特征
作者首先從circRNADb數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選到了4個(gè)來源于MAPK14分子的circRNAs，結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有(hsa_circ_24603在72對(duì)CRC組織中***上調(diào)，將其命名為circMAPK14，其低表達(dá)與CRC**不良預(yù)后相關(guān)，且在多個(gè)CRC細(xì)胞系中***下調(diào)表達(dá)。研究顯示circMAPK14來源與MAPK14的外顯子4至10的片段背向剪切而成，全長(zhǎng)536nt，并主要定位在細(xì)胞質(zhì)中。
circMAPK14抑制CRC的增殖和遷移
接下來作者研究了circMAPK14的生物學(xué)功能，結(jié)果顯示過表達(dá)circMAPK14會(huì)***抑制CRC細(xì)胞系的增殖，集落形成，遷移和侵襲，同時(shí)促進(jìn)*細(xì)胞凋亡。
m6A生物學(xué)功能
越來越多的證據(jù)表明m6A修飾在哺乳動(dòng)物中發(fā)揮重要的生物功能。例如，在轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)控RNA的穩(wěn)定性[11]、定位[12]、運(yùn)輸、剪切[13]和翻譯[14]。Claudio R. 等發(fā)現(xiàn)依賴METTL3的pri-miRNA甲基化，會(huì)促進(jìn)DGCR8識(shí)別和加工，從而促進(jìn)microRNA的成熟[15]。此外，m6A識(shí)別蛋白 HNRNPA2B1促進(jìn) pri-miRNA 加工成 pre-miRNA[16]。另外，環(huán)狀RNA上m6A的修飾能促進(jìn)環(huán)狀RNA的翻譯[17]。m6A修飾在基因表達(dá)調(diào)控中起著重要的作用，其調(diào)控機(jī)制的異常可能與人類疾病或**相關(guān)。目前發(fā)現(xiàn)m6A可能會(huì)影響精子發(fā)育（ALKBH5，METTL3，Ythdc2）、發(fā)育（METTL3、FTO、ALKBH5）、免疫（METTL3）、UV誘導(dǎo)的DNA損傷反應(yīng)（METTL3，F(xiàn)TO）、**生成（YTHDF2）或轉(zhuǎn)移（METTL14）、干細(xì)胞更新（METTL14）、脂肪分化（FTO）、生物節(jié)律、細(xì)胞發(fā)育分化、細(xì)胞分裂及其它的一些生命過程。例如，ALKBH5敲除的雄性小鼠增加了mRNA中的m(6)A修飾，其特點(diǎn)是凋亡影響減數(shù)分裂中期的精子細(xì)胞，引起生育能力受損[7]。 文章使用FMT(糞微生態(tài)移植)來確定大黃酸改變的腸道菌群是否對(duì)結(jié)腸炎有療效。
另外，之前報(bào)道過hnRNPA1將miR-196a和miR-320加載到EVs中，本研究ELNAT1表現(xiàn)出的EVs-細(xì)胞比率與miR-196a和miR-320相當(dāng)（Figure6F）。hnRNPA1沉默***抑制了ELNAT1在BCa細(xì)胞分泌的EVs中的富集（Figure6G）。此外，缺失的ELNAT1（包含hnRNPA1結(jié)合位點(diǎn)的610-680nt）主要保留在BCa細(xì)胞中（Figure6H），證實(shí)了ELNAT1通過與hnRNPA1的相互作用被加載到EVs中。
驗(yàn)證SUMOylation是否有助于hnRNPA1介導(dǎo)的EVs包裹ELNAT1。在BCa細(xì)胞中，hnRNPA1中K113位點(diǎn)突變使BCa細(xì)胞分泌的EVs中ELNAT1表達(dá)降低，沉默UBC9降低了BCa細(xì)胞分泌的EVs中ELNAT1的富集（Figure6I,J）。與hnRNPA1WT沉默相比，hnRNPA1沉默后，轉(zhuǎn)染hnRNPA1K113R并不能恢復(fù)EVs介導(dǎo)的ELNAT1下調(diào)（Figure6K）。共聚焦顯微鏡顯示，在UBC9沉默或hnRNPA1K113R突變后，ELNAT1在CD36標(biāo)志的多囊泡（MVBs）中的積累明顯下降（Figure6L），表明ELNAT1進(jìn)入EVs受hnRNPA1的SUMO化調(diào)控。 m6A表達(dá)水平較高的**患者淋巴轉(zhuǎn)移***增加。泌尿科研免費(fèi)設(shè)計(jì)
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LC3陽(yáng)性囊泡在質(zhì)膜損傷后在修復(fù)部位積聚用激光照射*細(xì)胞MCF7，致使細(xì)胞膜上形成小孔。使用膜不可滲透的FM1-43染料測(cè)量膜完整性，發(fā)現(xiàn)在Ca2+存在下，細(xì)胞能夠在20到30s內(nèi)修復(fù)它們的質(zhì)膜(Fig.1,AandB,left)；在缺乏Ca2+的培養(yǎng)基中受損的細(xì)胞無法修復(fù)并繼續(xù)吸收細(xì)胞不可滲透的染料(Fig.1B,right)。使用穩(wěn)定表達(dá)融合蛋白增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(eGFP)-LC3的MCF7細(xì)胞研究激光照射后自噬是否參與該過程，結(jié)果顯示，LC3陽(yáng)性點(diǎn)在損傷后大約8-10min開始在修復(fù)部位形成（Fig.1C）；在未損傷區(qū)域中LC3陽(yáng)性點(diǎn)未增加（Fig.1D）；LC3依賴于ATG7（Fig.1E-H）。天津科研贈(zèng)送提供技術(shù)路線
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