tRFs和tiRNAs作為sncRNA執(zhí)行多種生物學(xué)功能。它們能夠作為miRNA行使RNA干擾;替換與mRNA結(jié)合的翻譯起始因子elF4G,直接抑制蛋白的翻譯過程;結(jié)合某些蛋白因子,例如YBX1,影響mRNA的穩(wěn)定性;與細胞色素C相互作用,調(diào)控細胞凋亡-6;在應(yīng)激條件下促進應(yīng)激顆粒(StressGranules,SGs)的組裝;敏化細胞氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的p53***以及p53依賴的細胞死亡7;作為父**觀遺傳因子,改變子代基因轉(zhuǎn)錄級聯(lián)過程。tRFs具有許多microRNA的功能特性,例如,Dicer依賴的生物發(fā)生,與Argonaute蛋白形成RISC復(fù)合體以及RNA沉默。某些收錄的miRNA直接與tRFs匹配。tRNA上存在大量的轉(zhuǎn)錄后修飾,而且tRNA需與氨基酸形成氨?;鵷RNA方可參與蛋白翻譯。新疆tiRNA國家自然科學(xué)基金
對下一代測序數(shù)據(jù)的深入分析揭示了許多具有不同功能的小分子非編碼RNA。近年來,來源于tRNA衍生的小分子RNA(ransfer-RNAderivedsmallRNAs,tsRNAs)引起***關(guān)注。其主要有2種類型,即tRNA源性應(yīng)激誘導(dǎo)RNA(tRNA-derivedstress-inducedRNA,tiRNA)和tRNA源性片段(tRNA-derivedfragment,tRF)。它們根據(jù)在前體或成熟tRNA轉(zhuǎn)錄物的切割位置不同而產(chǎn)生。這些tRF&tiRNA分子的核苷酸組成、生物發(fā)生和功能上具有異質(zhì)性。新的研究表明,tRF&tiRNA分子不僅是tRNA降解的碎片,而且在許多特定的生理和病理過程中起著調(diào)節(jié)作用。本文綜述了tRF&tiRNA分子的類型,提出了tRF&tiRNA分子的生物學(xué)功能和作用機制的新概念,重點介紹了tRF&tiRNA分子在人類疾病中的潛在應(yīng)用,并提出了目前存在的問題和未來的研究方向。tiRNA贈送提供技術(shù)路線因此為了準(zhǔn)確檢測tRFs&tiRNAs,這些修飾必須被有效的去除.
隨著RNA高通量測序技術(shù)的應(yīng)用和發(fā)展,越來越多的tiRNA和tFs被發(fā)現(xiàn)。高通量測序方法能夠檢測更多類型的RNA,例如+RNA、rRNA、snoRNA和ScaRNA。由于TRFs和tiRNAs很小(14-50nt),如何區(qū)分真正的tRFs和隨機降解片段是首先需要認真考慮的問題。通過設(shè)計特異性擴增引物,可以利用定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)特異性地檢測TRFs和tiRNAsoNorthernblo也可以檢測到TRFs和tiRNAs的表達。**近亦有一種用于在短RNA-seq數(shù)據(jù)集中快速、確定和詳盡地識別TRF的方法和軟件包,線粒體和核TRF作圖(MINTmap),被開發(fā)出來。除了識別TRF之外,MINTmap還能夠明確地計算和報告所發(fā)現(xiàn)的TRF的原始豐度和標(biāo)準(zhǔn)化豐度。
tRFs長度約16-28nt,來源于成熟tRNA或前體tRNA,根據(jù)其在tRNA上的對應(yīng)位置可進一步分為:(i) tRF-5,對應(yīng)成熟tRNA的5’端,切割發(fā)生在D-loop;(ii) tRF-3,對應(yīng)成熟tRNA的3’端,包含CCA部分,切割發(fā)生在T-loop;(iii) tRF-1,源自前體tRNA的3’尾部序列,3’末端含有多聚U序列;(iv) i-tRF,不屬于tRF-5,tRF-3或tRF-1,主要來自成熟tRNA的中間區(qū)域。tRF-1產(chǎn)生于前體tRNA的3’尾端序列。tRF-5,i-tRF和tRF-3分別起源自成熟tRNA的5’、內(nèi)部、和3’端。當(dāng)切割發(fā)生在成熟tRNA反密碼子環(huán),將產(chǎn)生兩個半分子,tiRNAs,包括5’-tRFs和3’-tRFs。tiRNA測序采用tiRNA和tRF數(shù)據(jù)庫進行分析,并額外附送miRNA表達譜分析。
tRF&tiRNA實時定量PCR
實時熒光定量PCR技術(shù)是在普通PCR反應(yīng)體系中加入熒光試劑,利用熒光信號實時檢測PCR進程,***通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR能夠?qū)R弧㈧`敏、快速、高重復(fù)性地精確定量起始模板濃度。tRF & tiRNA是由tRNA切割產(chǎn)生,長度約15-45個核苷酸的小RNA。由于tRF & tiRNA長度太短,且與tRNA序列完全重疊,不能通過傳統(tǒng)的實時定量PCR進行檢測。本公司通過在tRF & tiRNA兩端引入人工合成序列(adaptor),設(shè)計特殊的跨連接位點的定量PCR引物,可以精確檢測微量樣品中tRF & tiRNA表達水平。 此外,某些tRFs&tiRNAs的內(nèi)部修飾比如m1A,m1G與m3C會嚴(yán)重阻礙反轉(zhuǎn)錄過程。內(nèi)蒙古tiRNA實驗可參觀
tRFs&tiRNAs的組成和數(shù)量高度依賴于細胞類型和疾病狀態(tài)。新疆tiRNA國家自然科學(xué)基金
tRNA衍生片段(tRNA-derivedfragments,tRF&tiRNA)為近年來新發(fā)現(xiàn)的一類非編碼RNA(non-codingRNA.ncRNA),其在外周血循環(huán)中表達穩(wěn)定.tRF&tiRNA通過調(diào)控基因表達與基因沉默調(diào)節(jié)細胞增殖與凋亡,調(diào)節(jié)翻譯等方式在人類**中發(fā)揮重要作用.tRF&tiRNA組織特異性,高度豐富且穩(wěn)定***存在的特征使其在**領(lǐng)域的研究中具有明顯優(yōu)勢,tRF&tiRNA的異常表達可能為**中潛在的診斷預(yù)后判斷的生物標(biāo)志物或***靶點本文通過總結(jié)tRF&tiRNA不同亞型的來源結(jié)構(gòu),生物學(xué)特征及功能,探討其與**的潛在關(guān)系及作用機制以期為**的早期診斷及靶向***提供新思路.新疆tiRNA國家自然科學(xué)基金
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ),利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段,通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺,提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū),實驗平臺開放參觀,客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度,保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù):RNA甲基化研究專題,外泌體研究專題,wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究,設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性,為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請:提供標(biāo)書課題設(shè)計、撰寫,標(biāo)書部分基礎(chǔ)實驗的開展,設(shè)計的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c,中標(biāo)率很高。
3.提供熱點**文獻技術(shù)支持,探討科研前沿?zé)狳c研究:trfRNA,DNA/RNA甲基化,外泌體,自噬,WNT等相關(guān)研究
4.二代測序:轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片:信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗:DNA甲基化實驗(BSP,MSP,焦磷酸測序),RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR(mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA),WB,RNA功能驗證實驗(靶基因驗證,過表達,干擾),基因突變及SNP檢測,F(xiàn)ISH,RNA-PULLdown,rip,chip實驗以及細胞增殖,凋亡,流式等細胞功能學(xué)實驗