3、tiRNA-Gly直接與RBM17相互作用，調(diào)控RBM17在PTC細胞中的表達
為了探究tiRNA-Gly在促*中分子機制，作者合成了生物素標記的tiRNA-Gly及其反義序列，進行RNApull-down實驗，進而挖掘K1細胞中與tiRNA-Gly相互作用的蛋白。結(jié)果發(fā)現(xiàn)了一個50KD左右大小的條帶，選擇經(jīng)質(zhì)譜測定肽數(shù)>3和獨特肽數(shù)>3的蛋白，獲得了5個可能的tiRNA-Gly相互作用蛋白，其中RBN17通過了WB驗證（圖2B）。RIP實驗也證實tiRNA-Gly在RBM17抗體組富集（圖3C）。進一步RIP實驗表明，tiRNA-Gly在RBM17全長序列中***富集，但在UHM截斷后的序列中富集度***下降，表明tiRNA-Gly和RBM17的相互作用依賴UHM（圖3D）。此外，與tiRNA-Gly的相互作用促進了K1細胞RBM17從細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到細胞核，雖然tiRNA-Gly主要定位于細胞質(zhì)，但同時導(dǎo)致K1細胞胞質(zhì)RBM17蛋白水平降低，核RBM17蛋白水平升高（圖3E-G）。因此，這些研究表明tiRNA-Gly與RBM17的UHM結(jié)合促進RBM17的核轉(zhuǎn)運。 課題CRO服務(wù)找上海英拜。貴州課題免費設(shè)計
此外，生存分析顯示，EV中CD44v6和C1QBP高表達的患者的生存結(jié)局明顯較差(圖7F)。循環(huán)外泌體的隨訪數(shù)據(jù)也顯示了一致的結(jié)果。PDAC患者中循環(huán)外泌體CD44v6和C1QBP的表達明顯高于健康對照組(圖7G)， PDAC伴有肝轉(zhuǎn)移的患者中循環(huán)外泌體CD44v6和C1QBP的表達明顯高于無肝轉(zhuǎn)移的患者(圖7G)。免疫電子顯微鏡顯示，CD44v6和C1QBP在PDAC患者的循環(huán)外泌體***表達(圖7H)。高循環(huán)外泌體表達CD44v6和C1QBP的患者比其他患者更容易發(fā)生肝轉(zhuǎn)移 (圖7I)。然而，高表達循環(huán)外泌體CD44v6和C1QBP的患者生存率明顯較差(圖7J)?？傊?，我們的研究結(jié)果證實了CD44v6和C1QBP在組織源性EV和循環(huán)外泌體中的表達可以預(yù)測PDAC患者的預(yù)后和肝轉(zhuǎn)移。
結(jié)論：我們揭示了原代PDAC細胞和HSCs之間通過PDAC來源的外泌體進行遠距離的細胞通信。此外，Pex通過促進肝纖維化微環(huán)境的形成來指示肝特異性轉(zhuǎn)移。更重要的是，我們發(fā)現(xiàn)外泌體CD44v6/C1QBP復(fù)合物傳遞到HSC的質(zhì)膜上誘導(dǎo)IGF-1信號通路的***。外泌體CD44v6和C1QBP可能是預(yù)測PDAC患者預(yù)后的有前途的生物標志物，也是***PDAC肝轉(zhuǎn)移的潛在靶點。 趨化因子了解客戶的研究方向以及所能提供的樣本類型和樣本量確定研究思路。
相反，miR-199a-5p抑制劑處理可提高WT小鼠脾CD4+T細胞中Sirt1的表達(圖5E)，并降低衰老標志物p21,p16和乙酰p53水平(圖5F)。***，與MRL/lpr相比，hUC-MSCs可增加miR-199a-5p的產(chǎn)生，表明hUC-MSCs是miR-199a-5p來源的關(guān)鍵調(diào)控因子(圖5G)。在transwell系統(tǒng)中，hUC-MSCs與MRL/lpr脾CD4+T細胞共培養(yǎng)48h后，細胞內(nèi)miR-199a-5p升高，Sirt1基因表達降低，CD4+T細胞中衰老標志物的表達水平恢復(fù)，而miR-199a-5p抑制劑處理后仍處于抑制狀態(tài)(圖5G-I)。總的來說，這些數(shù)據(jù)表明hUC-MSCs通過miR-199a-5p介導(dǎo)的Sirt1下調(diào)和隨后p53去乙?；臏p少，增加了脾臟CD4+T細胞的衰老。
5’-Trf-GlyGCC的表達隨著CRC進展而增加。此外，5’-tRF-GlyGCC在I/II期CRC患者中的豐度明顯低于III/IV期患者。轉(zhuǎn)移組患者血漿5’-tRF-GlyGCC水平明顯高于無轉(zhuǎn)移組。CEA≥5ng/ml組的5’-tRF-GlyGCC水平明顯高于CEA<5ng/ml。CRC患者CA199≥37IU/ml的5’-tRF-GlyGCC水平明顯高于CA199<37IU/ml。結(jié)果顯示，CRC患者血漿中5’-tRF-GlyGCC水平與CEA和CA199水平***正相關(guān)。5’-tRF-GlyGCC在結(jié)直腸*患者血漿中上調(diào)，并隨著結(jié)直腸*的進展和轉(zhuǎn)移而升高。收集16對**組織和血漿樣本，驗證5’-tRF-GlyGCC在CRC組織和相同患者血漿中的表達是否存在相關(guān)性。結(jié)果顯示5’-tRF-GlyGCC在血漿中的表達與配對CRC組織中的表達***相關(guān)。提示血漿中5’-tRF-GlyGCC水平較高的患者在結(jié)直腸*組織中5’-tRF-GlyGCC水平也較高。TRF測序課題整體服務(wù)。
關(guān)聯(lián)研究已將血液來源的microRNA(miRNA)的改變與結(jié)直腸*(CRC)聯(lián)系起來。miRNA譜可能在CRC進展過程中多樣化，并在血液中反映CRC進展水平。但是，尚無研究評估不同CRC階段血液中miRNA的變化。本研究對來自不同階段的健康供體、結(jié)直腸腺瘤、結(jié)直腸憩室炎和CRC患者（UICCstagesI/II,III,andIV）的80份血液樣本中的2,549種miRNA的譜進行了基于微陣列的比較。接下來通過RT-PCR進行確認，并對另外36份血液樣本中miRNA進行驗證。與健康對照相比，有179個CRC相關(guān)miRNA的豐度差異。只有三個（miR-1225-5p、miR-1207-5p和miR-4459）在所有CRC階段表現(xiàn)出增加的水平。對3個miRNA進行通路分析，發(fā)現(xiàn)了miRNAs以各種方式對幾種**相關(guān)通路起作用。這項研究為改進CRC篩查的生物標志物發(fā)現(xiàn)提供了線索，是***項提供CRC血液表達譜的研究，******評估了不同CRC不同階段血液中miRNA的變化。這也為其他疾病biomarker的研究提供了新的思路。公共比較毒理基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫?？贵w芯片
我們使用抗體陣列評估了表達PTEN- wt或PTEN- 398a的MCF10A細胞裂解液的應(yīng)激反應(yīng)和凋亡通路的活性。貴州課題免費設(shè)計
進一步研究發(fā)現(xiàn)，膜損傷后形成了兩個不同的囊泡池。較大的囊泡較早從質(zhì)膜形成， Rab5、EEA1（早期內(nèi)吞作用）、肌動蛋白、Rab35 呈陽性， LC3 偶爾呈陽性。相比之下，后來形成的囊泡較小且 LC3 呈陽性，**終出現(xiàn)在靠近 Rab5 陽性囊泡的位置。
內(nèi)化囊泡通過滲透作用在細胞質(zhì)中收縮，與溶酶體融合GFP-Rab35、RFP-Rab5轉(zhuǎn)染MCF7，研究胞吞小體的“行動軌跡”。胞吞小體囊泡移動至細胞質(zhì)，在細胞質(zhì)中收縮成小囊泡，***與溶酶體融合。
巨胞飲由質(zhì)膜完整性觸發(fā)實驗表明巨胞飲作用在損傷后被***，需要重組，從而保持質(zhì)膜的完整性。此外，LC3囊泡形成是響應(yīng)囊泡內(nèi)化而觸發(fā)。
Rubicon定位于胞吞小體的界膜，是LC3積累所必需的 貴州課題免費設(shè)計
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5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
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7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學(xué)實驗