造血干細(xì)胞早期命運(yùn)決定的機(jī)制在很大程度上尚不清楚。據(jù)推測(cè)，譜系特異性轉(zhuǎn)錄因子(TFs)在噪聲閾值以上的隨機(jī)表達(dá)可以鎖定一個(gè)細(xì)胞進(jìn)入一個(gè)獨(dú)特的細(xì)胞命運(yùn)。與此相一致的是，在多能造血細(xì)胞中觀察到與拮抗譜系相關(guān)的基因的共表達(dá)，包括關(guān)鍵的TFs，這表明在多能細(xì)胞室中存在一些細(xì)胞亞群，這些亞群允許細(xì)胞在譜系承諾之前的命運(yùn)相反，這一現(xiàn)象被稱為啟動(dòng)。**近，人類hspc的單細(xì)胞RNA測(cè)序(scRNA-seq)引入了一個(gè)不同的啟動(dòng)概念。對(duì)成人骨髓和胎兒肝臟造血的研究已經(jīng)確定了造血干細(xì)胞和多能祖細(xì)胞(MPPs)的亞群，這些亞群具有協(xié)調(diào)表達(dá)的標(biāo)記基因，特異于不同的單胎分化程序，并沿著所有分化分支逐漸增加。有一些跡象表明，星狀細(xì)胞間室的譜系啟動(dòng)可能不僅發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平，也發(fā)生在表觀遺傳水平。來(lái)自成人骨髓表型hspc的轉(zhuǎn)座酶可及染色質(zhì)測(cè)序(scATAC-seq)的單細(xì)胞分析數(shù)據(jù)顯示，表型MPPs在染色質(zhì)可及性方面存在差異。circNDUFB2可通過(guò)破壞CARDs與其解旋酶結(jié)構(gòu)域之間的分子內(nèi)相互作用。重慶RNA PULLdown標(biāo)書
與對(duì)照組相比，乳腺*來(lái)源的外泌體miR-138-5p降低了M1相關(guān)表型，相反，M2標(biāo)志物增加并伴隨著CD163陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)的增加（圖6G-I）。用從乳腺*細(xì)胞中分離出來(lái)的外泌體處理THP-1細(xì)胞導(dǎo)致了M2極化，抑制miR-138-5p的表達(dá)可挽救這種極化（圖4J-L）?？傊?，這些結(jié)果表明外泌體miR-138-5p通過(guò)抑制KDM6B表達(dá)調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞極化。
5、KDM6B去甲基化酶活性增加了M1相關(guān)基因的表達(dá)
抑制KDM6B的組蛋白去甲基化酶活性可抑制其靶基因的轉(zhuǎn)錄。因此，使用雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)來(lái)分析M1靶基因的啟動(dòng)子活性。KDM6B的過(guò)表達(dá)特異性地刺激了促炎因子IL-6、IL-1β和TNF-α編碼基因的啟動(dòng)子活性（圖5A）。相反，沉默KDM6B活性則導(dǎo)致他們的啟動(dòng)子活性抑制，而過(guò)表達(dá)KDM6B降低了H3K27me3的水平（圖5B）。ChIP檢測(cè)顯示，與對(duì)照相比，THP-1細(xì)胞中KDM6B的過(guò)表達(dá)或敲除***增加或減少了KDM6B啟動(dòng)子在不同區(qū)域的占用(圖5C-D)。與此結(jié)果一致，啟動(dòng)子區(qū)域H3K27me3的募**降低或增加當(dāng)KDM6B過(guò)表達(dá)或沉默時(shí)（圖5E-F）?？傊?，下調(diào)KDM6B可提高H3K27me3水平和促炎因子編碼基因的轉(zhuǎn)錄活性，導(dǎo)致抑制M1極化。 成都纖維化標(biāo)書TRIM25是介導(dǎo)IGF2BPs泛素化的E3連接酶。
4）circPDE4B促進(jìn)了RIC8A和MID1之間的三元配合物的形成，促進(jìn)了RIC8A的降解
我們?cè)噲D鑒定參與RIC8A蛋白酶體降解的E3連接酶。有趣的是，MS結(jié)果顯示circPDE4B也結(jié)合了兩個(gè)E3連接酶，包括RNF2和MID1。然而，由于RNF2定位于細(xì)胞核內(nèi)，我們選擇MID1進(jìn)行進(jìn)一步研究。實(shí)際上，通過(guò)免疫沉淀分析，MID1被發(fā)現(xiàn)與RIC8A結(jié)合(圖4A)。RIC8A和MID1的免疫熒光染色也證實(shí)了它們?cè)贖Cs***定位(圖4B)。IP結(jié)果表明，MID1敲低有效地削弱了RIC8A和MID1過(guò)表達(dá)的泛素化作用，增加了RIC8A泛素化作用(圖4C)。Co-IP實(shí)驗(yàn)也顯示，與對(duì)照組相比，circPDE4B敲低細(xì)胞中RIC8A和MID1的結(jié)合減少，而過(guò)表達(dá)circPDE4B則有相反的作用(圖4D)。
5.Caspase-11缺乏抑制小鼠肝細(xì)胞焦亡
我們?cè)u(píng)估了Caspase-11缺乏對(duì)MCD處理后小鼠焦亡活化的影響。我們檢測(cè)了Gsdmd和IL-1β的***，這是焦亡的兩個(gè)關(guān)鍵因素。我們?cè)谖刺幚淼囊吧秃虲aspase-11缺陷小鼠肝臟中檢測(cè)到類似的Gsdmd(圖5A和B)、Gsdmd-N(圖5A和C)和pro-IL-1β(圖5A和D)蛋白水平。此外，我們?cè)谝吧秃虲aspase-11缺陷小鼠的肝臟中均未檢測(cè)到成熟的IL-1β蛋白(圖5A和E)。MCD處理誘導(dǎo)了野生型小鼠肝臟中pro-Gsdmd(圖5A和B)、Gsdmd-N(圖5A和C)、pro-IL-1β(圖5A和D)和成熟IL-β(圖5A和E)的表達(dá)，表明MCD誘導(dǎo)了Gsdmd和IL-1β的***。相比之下，與MCD處理的野生型相比，MCD處理的Caspase-11缺陷小鼠肝臟中pro-Gsdmd(圖5A和B)、Gsdmd-N(圖5A和C)、pro-IL-1β(圖5A和D)和成熟IL-β(圖5A和E)的蛋白水平***降低。野生型小鼠和Caspase11缺陷小鼠肝臟中pro-caspase-1(圖5A和F)和cleavedcaspase-1(圖5A和G)的蛋白水平相似。
與未接受FMT***的受傷小鼠相比接受FMT***的小鼠表現(xiàn)出相對(duì)更大的運(yùn)動(dòng)恢復(fù)。
二、腸道微生物群落動(dòng)態(tài)變化
確定每個(gè)個(gè)體部位12個(gè)**豐富的科。HSCT后，在腸內(nèi)第II期Lachnospiraceae的豐度減少，從檢查前的13%減少到第1周的4.7%，然后在第III期開始的第3個(gè)月恢復(fù)到27.5%(圖2A)。同時(shí)，腸球菌科在II期的擴(kuò)張(檢查前:6.1%;第1周:22.8%)和第二階段的乳酸菌科(預(yù)檢:2%;第3個(gè)月后，第三階段分別減少到0.2%和0.6%(圖2A)。LDA在腸道中顯示了19個(gè)支系(共102個(gè)ASVs)，這些支系在時(shí)間點(diǎn)上對(duì)樣品的分離效果比較好(圖2B)。兩個(gè)相當(dāng)有鑒別能力且LDA系數(shù)為正的進(jìn)化支系包括腸球菌科(Enterococcaceae)和乳酸桿菌科(Lactobacillaceae)的ASVs(圖2B)。從第3個(gè)月開始，它們的豐度再次下降到與預(yù)處理時(shí)間相當(dāng)?shù)乃?圖2C)。其中，ASV78的數(shù)量**多，觀察頻率比較高(圖2D)，其16SrRNA部分基因序列與wexlerae序列相似性較高。另一項(xiàng)PCA分析也支持這些發(fā)現(xiàn)(圖2E)。腸球菌科(Enterococcaceae)在II期樣品中更為豐富，Lachnospiraceae和Ruminococcaceae在I期和III期樣品中更為豐富(圖2E)。 circSDHC通過(guò)充當(dāng)miR-127-3p的海綿促進(jìn)ccRCC的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移.深圳凋亡標(biāo)書
circRNAs在**的發(fā)展和進(jìn)展中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用.重慶RNA PULLdown標(biāo)書
這可能部分解釋了第3天巨噬細(xì)胞的增加。此外，流式細(xì)胞術(shù)數(shù)據(jù)顯示M2樣巨噬細(xì)胞(CD206+IL4RA+)的百分比在第1天（急性炎癥期）下降并從第3天開始增加（ADM階段），而這些M2樣巨噬細(xì)胞的數(shù)量在第3天達(dá)到峰值，然后迅速減少。此外，流式細(xì)胞術(shù)數(shù)據(jù)與免疫熒光分析一致，其中F4/80+CD206+細(xì)胞在第3天**豐富。
接下來(lái)，我們想知道這些CCR2+單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞是否可以在胰腺損傷后重新編程為M2樣巨噬細(xì)胞。在植入和誘導(dǎo)AP8周后，我們發(fā)現(xiàn)第3天的增殖巨噬細(xì)胞(Ki67+)主要來(lái)自CCR2WT小鼠。與來(lái)自CCR2KO小鼠的巨噬細(xì)胞相比，來(lái)自CCR2WT小鼠的巨噬細(xì)胞表現(xiàn)出更高的CD206和IL4RA表達(dá)水平。綜上所述，結(jié)果表明，ADM階段的M2樣巨噬細(xì)胞主要來(lái)源于CCR2+單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞，這些細(xì)胞在AP早期募集。 重慶RNA PULLdown標(biāo)書
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6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
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