1、白樺素作為SREBP加工特異性抑制劑的鑒定
構(gòu)建了一個(gè)由含SRE啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的熒光素酶報(bào)告基因，并從人肝*細(xì)胞系Huh-7中生成了穩(wěn)定表達(dá)該報(bào)告基因的細(xì)胞系(命名為Huh-7/SRE-Luc)。然后將該細(xì)胞與不同化合物孵育，并進(jìn)行熒光素酶活性測定。有趣的是，只有白樺素[lup-20(29)-ene-3b,28-diol]有效降低了熒光素酶的活性。白樺素是一種天然存在的五環(huán)三萜，可以很容易地從樺樹皮中提取出來(比較高可達(dá)干重的30%)。
作者直接檢測了白樺素對SREBP加工的影響和特異性，并與25-HC進(jìn)行比較。25-HC有三個(gè)主要作用：通過抑制SREBP-2的切割降低n-SREBP-2(圖1A)；***LXR，進(jìn)而上調(diào)SREBP-1的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致n-SREBP-1的增加(圖1A)；促進(jìn)HMG-CoA還原酶(HMGCR)的降解，HMGCR是膽固醇生物合成中的限速酶(圖1B)。另一方面，白樺素有效降低了內(nèi)源性的n-SREBP-1和n-SREBP-2(圖1A)，表明白樺素在不***LXR的情況下抑制了SREBP的加工。 也是***PDAC肝轉(zhuǎn)移的潛在靶點(diǎn)?；A(chǔ)分子實(shí)驗(yàn)課題協(xié)同創(chuàng)作
5.NAS1和PTBP1共同增強(qiáng)NR2F1-5'UTR的IRES活性為了進(jìn)一步研究NAS1如何調(diào)控NR2F1的表達(dá)，作者對NAS1進(jìn)行RNA下拉實(shí)驗(yàn)，并進(jìn)行質(zhì)譜分析。將PTBP1作為結(jié)合蛋白，通過WB實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PTBP1能拉下NAS1。RNA免疫沉淀法也檢測到PTBP1的免疫沉淀中含有NAS1，RNA(RIP)分析，進(jìn)一步證明NAS1與PTBP1的結(jié)合。接下來，作者分析了PTBP1在NR2F1表達(dá)中的作用。在MCF10AT中，過表達(dá)PTBP1可上調(diào)NR2F1，而在MCF10CA1h中，對PTBP1進(jìn)行干擾可明顯降低NR2F1的蛋白水平，提示PTBP1參與了NAS1對NR2F1的調(diào)控。事實(shí)上，在MCF10AT中，敲除PTBP1以及過表達(dá)NAS1完全阻斷了NR2F1通過NAS1表達(dá)；而在CA1h-P2中，PTBP1與NAS1敲除后，NR2F1蛋白水平恢復(fù)，證實(shí)了PTBP1介導(dǎo)了NAS1在NR2F1調(diào)控中的作用。纖維化課題整體服務(wù)完善的實(shí)驗(yàn)平臺提供可視化的建模服務(wù)。
5）DRD2通過阻斷TAK1的磷酸化來限制NF-κB信號的***
NF-κB信號的***對于觸發(fā)炎癥小體組裝和隨后的焦亡是必不可少的。IF染色顯示DRD2幾乎阻斷了p-p65的核易位(圖5A)，但這種抑制被Mφ所抵消(圖5B)。核和細(xì)胞質(zhì)提取物也顯示DRD2抑制了p-p65的核易位(圖5C)。如WB結(jié)果所示，在LPS刺激下，DRD2抑制IKKα/β、IκBα和p65的磷酸化(圖5D)。異位DRD2表達(dá)也***抑制了Mφ誘導(dǎo)的p65磷酸化和IKKα/β的上游***(圖5E)。WB結(jié)果顯示DRD2下調(diào)NF-κB的下游靶點(diǎn)ICAM-1。然而，這種下調(diào)被Mφ所抵消(圖5E)。抑制IKKα/β磷酸化提示DRD2負(fù)向介導(dǎo)IKK復(fù)合物上游。TAK1在催化IKKα和IKKβ中起關(guān)鍵作用。TAK1的磷酸化被異位DRD2表達(dá)***抑制(圖5D-E)。因此，DRD2通過阻斷上游激酶TAK1來抑制NF-κB信號通路的***。
我們接下來試圖識別circPDE4B上游調(diào)節(jié)器。我們首先對circPDE4B側(cè)翼序列進(jìn)行RNA pull-down-MS檢測，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)與RNA剪接相關(guān)的RBP，包括DExH-box helicase 9和FUS(圖1G)。RT-qPCR結(jié)果顯示，F(xiàn)US敲除后，HCs中circPDE4B表達(dá)下調(diào)，而pPDE4B和mPDE4B沒有明顯變化(圖1H)。此外，***兩種FUS shRNA慢病毒只降低了circPDE4B的表達(dá)(圖1I)，而過表達(dá)FUS則上調(diào)了circPDE4B的表達(dá)(圖1I)。接下來，RIP分析顯示FUS與外顯子相鄰的位點(diǎn)結(jié)合，而其他遠(yuǎn)端位點(diǎn)則可以忽略(圖1J，K)。我們還尋找了可能的FUS響應(yīng)元素，發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)可能的motifs，A位于上游，B位于下游。我們進(jìn)一步設(shè)計(jì)了兩個(gè)短的circPDE4B微基因，包括circPDE4B-s和circPDE4B-s-del(圖1L)。RIP顯示FUS與circPDE4B-s之間存在明顯的相互作用，但與circPDE4B-s-del之間沒有相互作用(圖1M)，表明FUS需要周圍內(nèi)含子中的假定位點(diǎn)來結(jié)合。我們接下來在表達(dá)circPDE4B-s/del的HCs中敲除FUS，發(fā)現(xiàn)與circPDE4B-del相比，circPDE4B-s***減少了FUS敲除的circPDE4B轉(zhuǎn)錄本(圖1N)。值得注意的是，在HCs中FUS被TNF-α下調(diào)(圖1O)。綜上所述，在OA中circPDE4B的下調(diào)至少部分是由FUS的抑制引起的。ATM對PTEN的磷酸化驅(qū)動(dòng)細(xì)胞周期進(jìn)程。
奧沙利鉑耐藥是結(jié)直腸*(CRC)患者***中的一個(gè)挑戰(zhàn)。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)以其免疫抑制作用而聞名，靶向Treg是提高化療敏感性的有效途徑。Treg是一種提高化學(xué)敏感性的有效方法。外泌體遞送的miRNA被用作預(yù)測化療敏感性的潛在生物標(biāo)志物。然而，Treg和外泌體miRNAs之間的關(guān)系仍然很大程度上是未知的。本研究結(jié)果表明，**分泌的miR-208b通過靶向PDCD4促進(jìn)Treg擴(kuò)增，這可能與CRC中奧沙利鉑化療敏感性的降低有關(guān)本。這些發(fā)現(xiàn)突出了外泌體miR-208b作為奧沙利鉑***反應(yīng)的預(yù)測生物標(biāo)志物的潛在作用，并且它們是免疫***的新靶點(diǎn)。本研究于2021年4月發(fā)表于《Molecular Therapy》IF: 8.986期刊上。小鼠正常胰腺(Npex)和小鼠PDAC細(xì)胞分離的外泌體呈現(xiàn)典型的外泌體結(jié)構(gòu)。納米顆粒課題實(shí)驗(yàn)外包
解決了對確定因果調(diào)節(jié)機(jī)制網(wǎng)絡(luò)的方法的關(guān)鍵需求?；A(chǔ)分子實(shí)驗(yàn)課題協(xié)同創(chuàng)作
7、CFL1/PLD1軸介導(dǎo)低氧誘導(dǎo)的HCC細(xì)胞中AKT途徑的***之前的一項(xiàng)研究表明，PLD1***AKT及其下游mTOR通路促進(jìn)HCC細(xì)胞增殖、侵襲。與此一致，作者觀察到CFL1敲除降低了p-AKT水平，在HCCLM3細(xì)胞中通過PLD1恢復(fù)增強(qiáng)了p-AKT水平（圖7A，C）。此外，PLD1沉默逆轉(zhuǎn)了CFL1誘導(dǎo)的Hep3B細(xì)胞中AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化（圖7B，D）。值得注意的是，CFL1或PLD1敲除抑制了肝*細(xì)胞中缺氧誘導(dǎo)的AKT通路***和EMT過程（圖7E，F(xiàn)）。之后，進(jìn)行拯救實(shí)驗(yàn)探討HIF-1α-CFL1-PLD1軸中PLD1的功能。在HCCLM3細(xì)胞中過表達(dá)的PLD1可以逆轉(zhuǎn)低氧條件下CFL1-shRNA引起的對AKT磷酸化或EMT過程的抑制（圖7G，H）?？偟膩碚f，證實(shí)CFL1/PLD1軸在缺氧誘導(dǎo)的HCC進(jìn)展中起重要作用。
總之，該研究表明HCC中過表達(dá)CFL1與較差的臨床病理學(xué)參數(shù)呈正相關(guān)。體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)CFL1是HCC**生長和轉(zhuǎn)移的驅(qū)動(dòng)因素。PDL1/AKT通路介導(dǎo)CFL1的致*功能。此外，CFL1是一個(gè)缺氧反應(yīng)基因，通過***PLD1/AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)參與缺氧誘導(dǎo)的HCC進(jìn)展（圖8）。綜上所述，該研究表明CFL1是低氧微環(huán)境與HCC進(jìn)展之間的一種新的連接體。 基礎(chǔ)分子實(shí)驗(yàn)課題協(xié)同創(chuàng)作
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