為了進一步鑒定IGF2BPs泛素化的E3連接酶，RNA pulldown質(zhì)譜結果中在156種潛在的相互作用蛋白中發(fā)現(xiàn)了兩種E3連接酶TRIM25和HECTD3。 使用WB分析， TRIM25與circNDUFB2特異性相關。 RIP分析進一步證實了circNDUFB2與TRIM25的關聯(lián)。RNA FISH免疫熒光分析表明circNDUFB2與TRIM25在細胞質(zhì)***定位。進行Co-IP結果顯示TRIM25與所有三個IGF2BP結合。免疫熒光分析表明TRIM25與所有三個IGF2BP蛋白共定位在細胞質(zhì)中。IGF2BPs的mRNA水平不受TRIM25的影響，但是在TRIM25敲低時，IGF2BPs的蛋白水平顯著增加，而在TRIM25的過表達中，IGF2BPs的蛋白水平分別降低。在TRIM25過表達的A549細胞中，IGF2BP的泛素化水平顯著增加。這些結果表明，TRIM25是E3泛素連接酶，可與IGF2BP蛋白相互作用，并通過泛素-蛋白酶體途徑降解NSCLC細胞。文章使用FMT(糞微生態(tài)移植)來確定大黃酸改變的腸道菌群是否對結腸炎有療效。成都ampk信號通路芯片科研
miR-101-3p抑制**細胞通過靶向TBLR1
生物信息學預測分析顯示miR-101-3p在TBLR1的3’UTR區(qū)域存在3個結合位點（圖3A）。作者此前的研究結果表明TBLR1是一個肝*和宮頸*的原*基因，也有證據(jù)顯示其也是肺*中的原*基因。因此，探討了miR-101-3p和TBLR1的表達相關性，結果顯示在32例LC樣本中它們的表達負相關。熒光素酶實驗結果顯示miR-101-3pmimics和TBLR1野生型共轉染時熒光素酶活性***下降，而和TBLR1突變型共轉染時沒有***改變，表明miR-101-3p和TBLR1之間存在結合關系。進一步地，WB結果顯示，過表達miR-101-3p后TBLR1的表達***下降，抑制miR-101-3p的表達則促進TBLR1的表達。這些結果表明，miR-101-3p可能通過結合TBLR1的3'UTR區(qū)域直接控制TBLR1的表達水平。 mTOR信號通路芯片科研文章檢測了小鼠腸系膜淋巴結(MLN)中的Th17細胞（與結腸炎癥密切相關）。
此外，流式細胞儀分析證實，第 7 天胰腺中CD11b + F4/80 + CD206 +巨噬細胞顯著減少，這與免疫熒光數(shù)據(jù)一致。在總 CD11b +單核細胞/巨噬細胞中，成熟巨噬細胞 (F4/80 + MHCII hi ) 減少，而未成熟巨噬細胞 (F4/80 mid MHCII - ) 在第 7 天增加，此時胰腺巨噬細胞在 ADM 階段（第 3 天）短暫消耗。F4/80 mid MHCII -巨噬細胞表達更高水平的 CCR2 和 TNFα，表明它們與炎癥單核細胞（CD11b + Ly6C hi CCR2 +）分化并可能導致組織損傷。上述結果表明，ADM期胰腺巨噬細胞的耗竭（以M2樣表型為主），將觸發(fā)炎性單核細胞再次流入胰腺，從而在第7天造成組織損傷。
6）M1-Exos通過傳遞miR-155上調(diào)ROS水平，損害bEnd.3細胞線粒體功能
我們研究了外泌體miR-155與bEnd.3細胞中線粒體功能的關系。我們發(fā)現(xiàn)，與miR-NCOE-Exos相比，miR-155OE-Exos處理上調(diào)了ROS水平(圖6A和B)，線粒體超氧化物水平(圖6C和D)和線粒體電位(圖6E)；然而，miR-155KD-Exos處理則顯示了相反的結果(圖6A-E)。此外，miR-155OE-Exos可使線粒體腫脹更大，形態(tài)更短，線粒體碎片細胞比例更高，而miR-155KD-Exos可減輕線粒體腫脹(圖6F和G)。miR-155OE-Exos處理后的OCR、基礎呼吸、ATP產(chǎn)生、呼吸能力和呼吸逆轉均明顯下降，而miR-155KD-Exos處理減輕了氧化呼吸功能障礙(圖6H和I)。這些結果表明，上調(diào)外泌體miR-155可導致過度ROS的產(chǎn)生和線粒體功能障礙。 大黃酸導致嘌呤代謝正?；湍c道尿酸水平的降低。
為了確定METTL3促進**細胞增殖的機制，檢測了METTL3在ESCC細胞上轉錄調(diào)節(jié)中的作用。METTL3缺失降低了KYSE180細胞中m6A的總豐度。甲基化RNA免疫沉淀（MeRIP）和m6A特異性抗體，然后進行RNA測序（MeRIP-seq），發(fā)現(xiàn)KYSE180的mRNA中鑒定的m6A位點與RRACH序列一致。m6A信號在mRNAs的終止密碼子和3′-非翻譯區(qū)富集。在MeRIP-seq中METTL3缺失減少了1101個基因的mRNAs中1199個m6A峰。轉錄組測序發(fā)現(xiàn)METTL3缺失調(diào)節(jié)2973個基因的表達。二者取交集發(fā)現(xiàn)共有93個基因重疊。MeRIP-seq中細胞成分（CC）項的基因本體（GO）富集分析表明，在METTL3缺失的KYSE180細胞中，β-連環(huán)蛋白降解復合物（的基因組（包括APC）中m6A水平***降低。發(fā)現(xiàn)乳酸菌上清液降低了尿酸濃度。浙江功能機制研究科研
英拜潤色的標書的中標率**提高。成都ampk信號通路芯片科研
6）circPde4b和RIC8A影響小鼠OA發(fā)病機制
為了證實上述發(fā)現(xiàn)，我們進一步評估了circPde4b對小鼠OA的影響。圖6A為四組不同AAV***后circPde4b和RIC8A的RNA表達情況。從軟骨中提取的ECM相關蛋白的RT-qPCR和westernblot分析也提示在內(nèi)側半月板不穩(wěn)(DMM)+vector組和DMM+circPde4b+RIC8A組中OA更嚴重(圖6B，C)。SafraninOfastgreen染色(圖6D)發(fā)現(xiàn)，與SHAM+載體組和DMM+circPde4b+RIC8A組相比，DMM+載體組和DMM+circPde4b+RIC8A組的蛋白多糖明顯丟失，表明circPde4bAAV可以挽救由DMM引起的OA進展，而RIC8AAAV可以逆轉這種挽救。 成都ampk信號通路芯片科研
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7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗