VD可修復(fù)高糖誘導(dǎo)的HK-2細胞自噬缺陷
我們探討了pari對體外DN細胞自噬和炎癥的影響。我們用高水平葡萄糖(HG)處理HK-2細胞。如圖4A所示，在高糖條件下，LC3-II和SQSTM1的表達增加，在自噬抑制劑氯喹(CQ)作用下，LC3-II和SQSTM1的表達進一步增加。此外，我們使用tf-LC3研究自溶酶體的成熟過程。在酸性溶酶體環(huán)境中，mCherry比GFP更穩(wěn)定，自溶酶體的正常成熟以增加*紅點為特征。與此相反，GFP和mCherry斑點共定位表明自噬通量中斷，呈現(xiàn)黃色斑點。高糖誘導(dǎo)mCherry和GFP共定位，CQ處理更明顯。這些結(jié)果進一步表明，高糖可損害自噬通量。另一方面，與HG組相比，paricalcitol降低了LC3-II和SQSTM1的表達，增加了*紅色的斑點。為了研究缺陷性自噬是否有助于高糖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，采用實RT-qPCR檢測促炎因子(CCL2,TNF,IL6)的mRNA水平。結(jié)果顯示CQ加重了高糖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，而paricalcitol降低了促炎因子的表達，說明HK-2細胞高糖誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)部分是由于自噬缺陷引起的，paricalcitol可以恢復(fù)自噬通量，減少炎癥反應(yīng)。 2108年俞立團隊明確闡述了收集和檢測遷移體的實驗方法。分組比較科研實驗外包
CircMYH9在氨基酸剝奪下被ROS-HIF1α通路***
*細胞可能會暫時或長久地進入非必需的營養(yǎng)缺陷狀態(tài)，檢測了氨基酸缺乏是否與CR細胞中的circMYH9過表達有關(guān)。我們在缺乏SG或缺乏谷氨酰胺的培養(yǎng)基中培養(yǎng)CRC細胞，并且circMYH9響應(yīng)于SG或Glu剝奪而上調(diào)。缺乏Glu或SG會導(dǎo)致ROS水平升高，從而導(dǎo)致HIF1α增加。使用ROS清除劑NAC來處理缺乏SG或Glu的細胞。正如預(yù)期的那樣，NAC在不含SG或不含Glu的培養(yǎng)基中逆轉(zhuǎn)了HIF1α和circMYH9的升高。HIF1α敲除消除了HCT116和LoVo細胞中Glu或SG剝奪誘導(dǎo)的circMYH9表達。表明SG或Glu剝奪誘導(dǎo)的細胞ROS積累增加了HIF1α水平，從而促進了circMYH9的表達。 神經(jīng)性疼痛和炎癥科研中標(biāo)率高英拜提供一年三節(jié)的購物卡津貼。
PTEN缺陷改變了多個細胞周期檢查點，可能留下更少的時間進行DNA損傷修復(fù)和/或染色體分離。細胞周期的進展需要幾個分子過程的完美執(zhí)行，以確保一個熟練的，無錯誤的，細胞分裂。這些事件發(fā)生的速度由周期蛋白依賴激酶(CDKs)的活性決定，CDKs磷酸化關(guān)鍵底物以促進DNA合成和有絲分裂進程。CDKs的催化活性受細胞周期檢查點的調(diào)控，這些檢查點監(jiān)測細胞周期中主要事件的有序執(zhí)行。檢查點**了故障安全機制，它確保只有在滿足的比較好情況下才允許細胞分裂。所有生物體都需要通過細胞分裂周期進行適當(dāng)?shù)幕蚪M維護，以確保正常生殖、發(fā)育和預(yù)防包括**在內(nèi)的各種疾病。DNA損傷可由內(nèi)源性過程引起，如DNA復(fù)制過程中偶爾引入的DNA不匹配，拓撲異構(gòu)酶I和拓撲異構(gòu)酶II活性失效導(dǎo)致的DNA鏈斷裂，或由正常代謝副產(chǎn)品產(chǎn)生的ROS攻擊DNA。外源性來源主要包括誘變化學(xué)品、紫外線和電離輻射(IR)。細胞周期檢查點能夠檢測DNA損傷，提示其存在，并***延緩細胞周期進程的通路，修復(fù)DNA損傷，或通過誘導(dǎo)細胞死亡來消除基因不穩(wěn)定細胞。
已有研究表明，甘氨酸結(jié)構(gòu)域和Pur-α中的PUR重復(fù)結(jié)構(gòu)域可能負責(zé)招募RNA分子，因此作者構(gòu)建了Pur-α全長和截斷質(zhì)粒。RIP檢測結(jié)果表明PUR重復(fù)域(66-246aa)與CircCwc27直接結(jié)合。作者進一步研究了CircCwc27對Pur-α的調(diào)節(jié)作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，CircCwc27的下調(diào)并不影響總Pur-αmRNA和蛋白水平，但CircCwc27引起的Pur-α沉淀的水平***上調(diào)。與野生型小鼠相比，APP/PS1和APP/PS1-lv-sh-Circon小鼠中CircCwc27沉淀的Pur-α***上調(diào)。在APP/PS1小鼠中敲低CircCwc27，CircCwc27和Pur-α的結(jié)合***降低。RIP測定也得到了類似的結(jié)果。由于CircCwc27主要定位于細胞質(zhì)中，并且在AD中上調(diào)，我們探討了增強CircCwc27和Pur-α之間的結(jié)合是否影響了Pur-α的分布。免疫印跡結(jié)果顯示，APP/PS1小鼠中Pur-α在細胞核中的表達明顯減少，而在細胞質(zhì)中的表達明顯增加。注射LV-shCircCwc27可***促進Pur-α的分布。神經(jīng)元中FTH的敲除抵消了褪黑素對創(chuàng)傷性腦損傷鐵死亡的保護作用。
此外，circPDE4B不影響MID1水平(圖4E)。RPD和序列IP分析都顯示circPDE4B促進了RIC8A和MID1的結(jié)合(圖4F，G)。與這一發(fā)現(xiàn)相一致的是，體外結(jié)合試驗表明，circPDE4B增加了重組RIC8A和MID1蛋白之間的關(guān)聯(lián)(圖4H)。通過co-IP，MID1與RIC8A在N端調(diào)控域結(jié)合(圖4I)。此外，我們檢測了RIC8A的功能位點。在HCs中免疫沉淀RIC8A并進行MS分析，證實了RIC8A中氨基酸殘基的泛素化(圖4J)。在RIC8A、K143和K187中鑒定出10個泛素化位點，并且在人類和小鼠之間并不保守(圖4J)。因此，我們將保守的RIC8A位點從賴氨酸(K)突變?yōu)榫彼?R)，以排除泛素化。IP結(jié)果表明，與WT相比，K415的取代**降低了RIC8A的泛素化位點(圖4K)。有趣的是，K415在哺乳動物中高度保守(圖4L，M)。此外，在K415突變后，circPDE4B過表達或抑制不再調(diào)節(jié)RIC8A的泛素化水平(圖4N)。這些結(jié)果表明circPDE4B可以作為促進RIC8A和MID1之間聯(lián)系的支架。乳酸菌是益生菌在嘌呤代謝中發(fā)揮關(guān)鍵作用。蛋白質(zhì)科研省自然科學(xué)基金
英拜跟客戶形成產(chǎn)學(xué)研合作模式。分組比較科研實驗外包
一、NPM1突變的AML聚集成兩個不同的組
為了在391個npm1突變的AML樣本中定義一致的分子亞型，我們使用CoINcIDE12框架應(yīng)用元聚類方法。我們的元聚類分析顯示在我們的數(shù)據(jù)概要中有兩個穩(wěn)健的亞型(圖1A和補充圖1和2)。接下來，我們使用PERT算法13來闡明每個聚類中AML樣本的細胞組成。我們發(fā)現(xiàn)有一簇干細胞***富集，因此被標(biāo)記為原始。與此相反，另一簇與髓系和造血分化相關(guān)的基因表達豐富，因此我們將其標(biāo)記為committed亞型(圖1B)。兩個組在年齡、核型和白細胞計數(shù)等臨床病理參數(shù)方面沒有差異(卡方檢驗假發(fā)現(xiàn)率[FDR] >5%;補充表2 5)。 分組比較科研實驗外包
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請：提供標(biāo)書課題設(shè)計、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實驗的開展，設(shè)計的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點**文獻技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學(xué)實驗