由于p65轉位到細胞核并促進其靶向基因的轉錄，假設NFκB/p65信號通路的***可通過p65的轉錄活性上調miR-934表達。在p65和miR-934啟動子之間發(fā)現(xiàn)了5個潛在的轉錄結合區(qū)域和2個特異性結合位點（Fig. 8d）。隨后，用miR-934啟動子中含有p65結合區(qū)域的載體轉染SW480和RKO細胞；ChIP實驗證明p65對miR-934的轉錄在-2002和-1500 bp（區(qū)域1）之間的區(qū)域內***增高，在其他四個結合區(qū)域中未觀察到明顯變化（Fig. 8e）。這些數(shù)據(jù)表明，區(qū)域1可能在調節(jié)CRC細胞中p65介導的miR-934轉錄誘導中起關鍵作用。熒光素酶報告基因檢測證實p65對SW480和RKO細胞中miR-934啟動子的轉錄影響（Fig. 8f）。作者發(fā)現(xiàn)只有突變結合位點1可以下調p65的熒光素酶報告基因活性，抑制miR-934的轉錄表達，這證明p65可以通過結合位點1正向直接調節(jié)miR-934的表達(Fig. 8f)。此外，作者證明了SW480和RKO細胞中的突變結合位點1可以消除CXCL13的促進作用和NFκB/p65信號對miR-934表達的抑制作用(Fig. 8g,h)。綜上所述，這些結果證明CXCL13/CXCR5/NFκB/p65信號通路促進CRC細胞中miR-934的轉錄，形成一個正反饋回路，參與持續(xù)的M2巨噬細胞極化和CRC細胞的侵襲和轉移。英拜是您身邊的科研小助手。湖北人神經(jīng)束膜細胞科研
CircCwc27下調可預防APP/PS1小鼠Aβ沉積及相關的神經(jīng)退行性影響行為測試后，進一步探索CircCwc27對AD病理的影響。研究中用抗Aβ抗體對APP/PS1小鼠的腦切片進行染色，結果顯示，注射LV-shCircCwc27的小鼠斑塊負荷明顯減輕，還發(fā)現(xiàn)注射LV-shCircCwc27后，皮質和海馬的可溶性和不可溶性aβ40和aβ42也持續(xù)減少。此外，APP/PS1小鼠中，CircCwc27的表達與Aβ40和aβ42的水平呈正向關。鑒于LV-sh-CircCwc27注射液對斑塊沉積的保護作用，我們通過LAMP1抗體免疫染色檢測了CircCwc27敲低是否影響軸突萎縮，因為在AD小鼠模型中，LAMP1陽性營養(yǎng)不良神經(jīng)突與Aβ斑塊密切相關。我們發(fā)現(xiàn)注射LV-sh-CircCwc27的小鼠海馬中Aβ與營養(yǎng)不良神經(jīng)突共定位的面積***減少。此外，還確定了CircCwc27對突觸完整性的，LV-sh-CircCwc27注射并不影響突觸相關蛋白的表達，而在APP/PS1小鼠中則***防止突觸相關蛋白降低。小鼠腦切片免疫熒光染色進一步證實了上述結果。神經(jīng)炎癥是AD的另一個重要病理標志。研究中注射LV-sh-CircCwc27***降低了APP/PS1小鼠小膠質細胞和星形膠質細胞的活性。以上結果表明，敲除CircCwc27在AD的神經(jīng)炎癥和神經(jīng)退行性影響中具有保護作用。湖北功能機制研究科研FOXO3A誘導的LINC00926限制乳腺瘤細胞的生長和轉移。
4.ELNAT1直接與hnRNPA1相互作用
由于lncRNA的分子功能與其亞細胞定位相關，通過FISH和亞細胞定位實驗發(fā)現(xiàn)ELNAT1在UM-UC-3和T24細胞的細胞質和細胞核均有表達（SupplementalFigure7A,B）。并且通過RNA-pulldown實驗，發(fā)現(xiàn)在分子量35~40kDa上有明顯的條帶（Figure4A）。對此，通過質譜（MS）和Westernblot分析顯示，hnRNPA1是**豐富的ELNAT1相互作用蛋白（Figure4B-D）。熒光染色和RNA免疫沉淀（RIP）證實了ELNAT1和hnRNPA1在UM-UC-3和T24細胞中的共定位，并且ELNAT1通過內源性hnRNPA1富集（Figure4E,F），進一步驗證了ELNAT1和hnRNPA1之間的相互作用。
對snATAC-seq數(shù)據(jù)集使用97%置信閾值對細胞類型分配進行過濾，以去除異型雙重體。通過標簽轉移獲得的snATAC-seq細胞類型預測(圖1d)與無監(jiān)督簇的編輯注釋(圖1e, f)的比較表明，所有主要的細胞類型都存在于這兩個數(shù)據(jù)集中，并且在檢測和分配細胞身份方面，snATAC-seq與snRNA-seq具有可比性(補充圖3)。使用基于基因活性的細胞類型分配進行下游分析，這是通過對snatc -seq數(shù)據(jù)集的無監(jiān)督聚類獲得的。有趣的是，snATAC-seq能夠檢測到近端小管簇內的兩個亞群，這可能**近端曲小管(圖1e, PCT)和近端直小管(圖1e, PST)。PCT顯示編碼SGLT2的SLC5A2具有更強的染色質可及性;而PST在編碼SGLT1的SLC5A1(圖1f，補充圖4)中表現(xiàn)出更強的可達性。SGLT2在近端小管S1和S2段重新吸收葡萄糖，SGLT1位于S3。英拜提供生命科學內的一體化服務。
在確定了UCP1與AKI中的脂質積累負相關后，我們試圖闡明其潛在的關系。首先，我們使用UCP1特異性過表達慢病毒載體和UCP1激動劑CL316243構建UCP1上調的細胞模型(圖3A)。如圖3B所示，UCP1過表達***降低了順鉑暴露HK2的脂質積累。UCP1激動劑CL316243也得到了類似的結果。這些結果表明，UCP1參與了AKI中脂質積累的調節(jié)。為了進一步驗證這一調控關系，提高證據(jù)的可靠性，我們采用腎多點注射UCP1特異性過表達腺病毒的方法建立AKI過表達UCP1的動物模型(圖3C-D)。油紅O染色顯示，過表達UCP1可***緩解AKI動物模型中的脂質積累(圖3E)。***，使用UCP1激動劑CL316243在AKI動物模型中誘導UCP1過表達，也觀察到了相同的結果(圖3F-H)。因此，所有證據(jù)表明，隨著UCP1表達的增加，AKI模型中的脂質含量降低。增加乳酸桿菌水平導致尿酸水平下降。CAR-T科研服務兩年
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miR-144在鼻咽*細胞釋放的EVs中高度富集
接下來，為了確定**分泌的miR-144是否具有通過EVs細胞外通信影響**-微環(huán)境串擾的能力，我們首先從C666-1、SUNE1和NP69細胞中分離EVs。透射電子顯微鏡(TEM)觀察發(fā)現(xiàn)，納米顆粒的直徑為30~100nm，每個囊泡呈杯狀(圖2A)。免疫印跡顯示，與相應的細胞裂解液相比，這些來自C666-1、SUNE1和NP69細胞的納米顆粒中存在常見的EVs特異性標記物，包括CD9、CD63和TSG101，而內質網(wǎng)膜蛋白calnexin明顯缺失(圖2B)。納米顆粒示蹤分析(NTA)進一步顯示EV的平均直徑為94.1nm(C666-1細胞)、90.5nm(SUNE1細胞)和68.5nm(NP69細胞)(圖2C)。此外，我們檢測了C666-1、SUNE1和NP69細胞衍生EVs的表面電荷(圖2D)。添加RNase對這三種細胞系的EVs中miR-144的表達沒有影響，而TritonX-100處理的細胞中miR-144的表達明顯降低，說明細胞膜對miR-144的表達具有保護作用(圖2E)。結果表明，這三種細胞系的EVs具有穩(wěn)定的膜態(tài)，對RNA具有保護作用。通過qRT-PCR檢測EVs中miR-144的表達，結果顯示miR-144在鼻咽*細胞EVs中表達高水平(圖2F)。這些發(fā)現(xiàn)為miR-144在npc細胞來源的ev中上調提供了證據(jù)。 湖北人神經(jīng)束膜細胞科研
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