一、Pten398A加速M(fèi)MTVneu驅(qū)動(dòng)的乳腺**發(fā)生
為了研究ATM磷酸化PTEN的體內(nèi)功能，我們?cè)谛∈笾性O(shè)計(jì)了一個(gè)敲入等位基因，其中398位絲氨酸取代了丙氨酸(Pten398A)。Pten398A/+和Pten398A/398A小鼠存活，發(fā)育明顯正常。為了研究atm依賴的PTEN磷酸化在乳腺*中的可能作用，我們?cè)谛∈笕橄?*病毒(MMTV)啟動(dòng)子/增強(qiáng)子轉(zhuǎn)錄控制下表達(dá)滅活neu (Erbb2)融合基因的小鼠背景下培養(yǎng)了Pten398A等位基因。在這個(gè)成熟的模型中，MMTVneu基因在正常乳腺上皮中低水平表達(dá)，導(dǎo)致乳腺**的發(fā)展，據(jù)報(bào)道中位發(fā)生率為205天。Pten+/+;MMTVneu小鼠發(fā)生了預(yù)期潛伏期的乳腺**，顯示了233天的中位生存期(圖1A)。相比之下，Pten398A/398A;MMTVneu小鼠**發(fā)展加快，中位生存期縮短至199天(圖1A)。對(duì)Pten+/+;MMTVneu和Pten398A/398A;MMTVneu小鼠的石蠟包埋**標(biāo)本進(jìn)行免疫組化檢測(cè)γH2AX。 乳酸菌是益生菌在嘌呤代謝中發(fā)揮關(guān)鍵作用。黃褐斑鼠模型科研服務(wù)兩年
腸道菌群與結(jié)直腸* (CRC) 之間的關(guān)聯(lián)已被***研究。然而，用于多個(gè)人群的早期診斷標(biāo)記仍然難以捉摸。本研究對(duì)1056例糞便樣本進(jìn)行了綜合分析，以確定與CRC相關(guān)的微生物作為早期檢測(cè)CRC的標(biāo)志物。
對(duì)來自4項(xiàng)研究的16srRNA測(cè)序進(jìn)行分析，評(píng)估隨著CRC進(jìn)展（無(wú)疾病-腺瘤-結(jié)直腸*）腸道微生物的變化，并鑒定出針對(duì)腺瘤的為微生物標(biāo)志物。
2.構(gòu)建腺瘤微生物模型
除了使用差異ASV作為關(guān)鍵指標(biāo)，模型構(gòu)建中還包括α多樣性指數(shù)（Shannon指數(shù)，Simpson指數(shù)和ObservedASV）以及三個(gè)患者臨床指標(biāo)（年齡，性別和體重指數(shù)（BMI））。**終構(gòu)建了包括八個(gè)差異性ASV（作為生物標(biāo)記物）以及年齡，性別和BMI為**的模型，可區(qū)分對(duì)照對(duì)象與腺瘤患者（準(zhǔn)確度：0.73，敏感性：0.82，特異性：0.62，精度：0.73，F(xiàn)1得分：0.77）。其中，用ASV區(qū)分腺瘤和**的RF模型達(dá)到了0.89的AUC（精度：0.80，靈敏度：0.66，特異性：0.90，精度：0.83和F1得分：0.72）。 上海陽(yáng)性染色科研m6A表達(dá)水平較高的**患者淋巴轉(zhuǎn)移***增加。
為了確定s-flow和d-flow在體內(nèi)單細(xì)胞分辨率下對(duì)ECs基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)和染色質(zhì)可及性譜的全基因組影響，我們使用小鼠PCL模型進(jìn)行了scRNA-seq和scATAC-seq。將C57BL/6小鼠部分結(jié)扎，以暴露于血流的對(duì)側(cè)RCA作為對(duì)照，在LCA中誘導(dǎo)d-血流。部分結(jié)扎后2天(2D)和2周(2W)， rca (2D- r和2W- r)和lca (2D- l和2W- l)用膠原酶酶解獲得單個(gè)細(xì)胞和單個(gè)核，分別用于scRNA-seq和scATAC-seq。
在標(biāo)準(zhǔn)化之后，一個(gè)基于無(wú)監(jiān)督圖的聚類將細(xì)胞劃分成組，通過統(tǒng)前列形近似和投影(UMAP)圖可視化(圖1A)。我們的UMAP分析確定了16個(gè)獨(dú)特的細(xì)胞簇以流和時(shí)間依賴的方式分布(圖1A和1B)。每個(gè)細(xì)胞簇都是用確定的標(biāo)記基因進(jìn)行鑒定(1C).發(fā)現(xiàn)8個(gè)EC簇(E1E8)、血管平滑肌細(xì)胞(SMCs)、成纖維細(xì)胞(Fibro)、4個(gè)單核/巨噬細(xì)胞(macrophages14)、樹突狀細(xì)胞(DCs)和T細(xì)胞。通過Pecam1、Icam2、Cdh5和Tie1的表達(dá)來鑒定EC簇。smc特異性標(biāo)記為Cnn1、Myl9和Speg。同樣，Medag、Dpep1和Lum作為纖維的標(biāo)記物;巨噬細(xì)胞C1qa,C1qb,C1qc,C5ar1;DCs的Ccr7和Mmp25;T細(xì)胞的Itk(圖1C)。
2）M1-BMDMs來源的外泌體加重了bEnd.3細(xì)胞的EndoMT
我們?cè)u(píng)估了M1-BMDMs對(duì)bEnd.3細(xì)胞的影響。結(jié)果表明，M1-BMDMs條件培養(yǎng)基(M1-CM)***降低了bEnd.3細(xì)胞TEER值(圖2A)，并增加通透性(圖2B)。此外，TJs蛋白熒光染色顯示，M1-CM處理***降低了bEnd.3細(xì)胞膜ZO-1和Occludin的表達(dá)(圖2C和D)。為了進(jìn)一步研究M1-BMDMs是否通過外泌體破壞血管內(nèi)皮細(xì)胞的TJs，我們使用外泌體分泌抑制劑GW4869預(yù)處理M1-BMDMs。我們發(fā)現(xiàn)，加入GW4869部分逆轉(zhuǎn)了M1-CM誘導(dǎo)的TEER值的下降(圖2A)，滲透率增加(圖2B)；GW4869也逆轉(zhuǎn)了TJs蛋白熒光強(qiáng)度下降的趨勢(shì)(圖2C和D)。相應(yīng)的，TJs蛋白表達(dá)水平也出現(xiàn)了類似的結(jié)果(圖2E)。有趣的是，通過對(duì)脊髓切片中的α-SMA和CD31進(jìn)行共染色，我們發(fā)現(xiàn)損傷部位的共定位比未損傷部位更多(圖2F和G)。M1-CM***改變bEnd.3細(xì)胞形態(tài)，分枝減少，胞體拉長(zhǎng)(圖2H)。此外，M1-CM暴露***降低了CD31的表達(dá)，并強(qiáng)烈增強(qiáng)了EndoMT標(biāo)記物膠原I、III和α-SMA在bEnd.3細(xì)胞中的表達(dá)(圖2I)。然而，GW4869可以部分扭轉(zhuǎn)這些影響。綜上所述，外泌體可能介導(dǎo)巨噬細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的相互作用，并可能是巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞EndoMT的原因。 英拜有一支高精尖的團(tuán)隊(duì)。
胰腺*在美國(guó)**死亡原因中排第四名。手術(shù)切除是胰腺****的***機(jī)會(huì)，但由于診斷較晚，大多數(shù)患者失去了手術(shù)切除的機(jī)會(huì)，并且，胰腺*對(duì)大多數(shù)化療藥物的反應(yīng)很差。FBW7 (F-box and WD repeat domain-containing 7)是Skp1-Cul1-F-box (SCF)泛素連接酶復(fù)合物的底物識(shí)別成分，以多種*蛋白為降解目標(biāo)，也是人類**中**常見的突變基因之一，參與調(diào)節(jié)脂質(zhì)過氧化。鐵死亡是一種依賴鐵的非凋亡細(xì)胞死亡形式，其特征是脂質(zhì)過氧化，在*****方面表現(xiàn)出巨大的潛力。目前有作者研究了FBW7對(duì)胰腺*患者鐵死亡的影響，該研究發(fā)表在《Redox Biology》，IF：9.986。上海英拜生物提供可視化實(shí)驗(yàn)過程參觀。神經(jīng)科研地區(qū)科學(xué)基金
英拜提供春節(jié)回家探親車費(fèi)補(bǔ)貼。黃褐斑鼠模型科研服務(wù)兩年
環(huán)狀RNA因參與多種生物的生物進(jìn)程、涉及多種疾病近年來被***關(guān)注，雖然阿爾茨海默病(AD)中CircRNA的差異表達(dá)譜已經(jīng)建立，但在基因表達(dá)和疾病相關(guān)認(rèn)知中，與AD直接相關(guān)的關(guān)鍵CircRNA的特征和功能尚不清楚。本文中，作者篩選并鑒定出AD相關(guān)的新CircRNA，CircCwc27，并探索其分子機(jī)制。本文于2021年9月發(fā)表在《FEBS Journal》上，IF=10.7。
CircCwc27在阿爾茲海默癥（AD）患者中上調(diào)表達(dá)異常的CircRNA可能直接導(dǎo)致疾病的發(fā)生，篩選AD早期相關(guān)的CircRNA，作者對(duì)6個(gè)月的APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠和WT對(duì)照小鼠的海馬進(jìn)行了深度CircRNA測(cè)序，發(fā)現(xiàn)131個(gè)表達(dá)異常的CircRNA，其中上調(diào)，下調(diào)*****的15個(gè)CircRNA在熱圖中顯示，與野生型小鼠相比，其中有4個(gè)***上調(diào)和4個(gè)***下調(diào)的CircRNA在APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠的海馬體中表達(dá)。接下來對(duì)這8種CircRNA在AD患者的血漿和顳葉皮層中的水平進(jìn)行檢測(cè)，并比較了其在海馬體中的相對(duì)豐度。結(jié)果顯示，在AD患者的顳葉皮層和血漿中可以檢測(cè)到CircCwc27表達(dá)量較高，與在APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠中觀察到的一致，而且CircCwc27在海馬體區(qū)表達(dá)上升*****。但線性Cwc27在皮層和海馬體中的表達(dá)均未發(fā)生變化。因此，將CircCwc27在AD中的功能特性作為研究的重點(diǎn)。 黃褐斑鼠模型科研服務(wù)兩年
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4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)