2021年5月，***一篇發(fā)表在cancer research（IF=12.7000）的文章（YTHDF1 Promotes Gastric Carcinogenesis by Controlling Translation of FZD7）。此研究分析了cBioPortal (cBio cancer Genomics Portal)630例原發(fā)性胃腺*數(shù)據(jù)集，發(fā)現(xiàn)YTHDF1（m6A讀取蛋白）的突變主要是基因擴增，導(dǎo)致其過表達(dá)。YTHDF1的高表達(dá)與更具侵襲性的**進(jìn)展和較差的總生存期相關(guān)。抑制YTHDF1在體內(nèi)外均可抑制胃*細(xì)胞增殖和**發(fā)生。在機制上，YTHDF1以m6依賴的方式促進(jìn)了Wnt關(guān)鍵受體frizzled7 (FZD7)的翻譯，突變的YTHDF1增強了FZD7的表達(dá)，導(dǎo)致Wnt/b-catenin通路的過度***，促進(jìn)了胃*的發(fā)生。我們的研究結(jié)果表明，YTHDF1及其m6a介導(dǎo)的Wnt/b-catenin信號通路在胃*中的致*作用，為靶向此類表觀遺傳調(diào)控因子提供了一種新的方法英拜生物擁有一支高精尖的技術(shù)豐富的技術(shù)團隊。cancer科研售后服務(wù)
總之，如Fig. 9，CRC來源的外泌體miR-934可通過下調(diào)PTEN表達(dá)和***PI3K/AKT信號通路誘導(dǎo)M2巨噬細(xì)胞極化。此外，外泌體miR-934極化的M2巨噬細(xì)胞可以通過CXCL13/CXCR5/NFκB/p65/miR934正反饋環(huán)促進(jìn)CRLM。因此，研究闡明了促進(jìn)**細(xì)胞和TAMs相互作用的CRLM的新分子機制，這將有助于開發(fā)CRLM的有效預(yù)防和***策略。更重要的是，血清外泌體中miR-934高表達(dá)與CRLM相關(guān)，提示其可能是未來液體活檢和預(yù)測CRLM風(fēng)險的一個有前景的生物標(biāo)志物。此外，靶向外泌體miR-934介導(dǎo)的**細(xì)胞與TAMs之間的串?dāng)_可能為CRLM的***提供新策略?？蒲屑?xì)胞實驗英拜提供分子生物學(xué)以及免疫病理相關(guān)實驗。
結(jié)果顯示，敲低Mettl3降低了HCT116細(xì)胞中p53前體mRNA水平，而Mettl3過表達(dá)增加了p53前體mRNA水平而不影響hnRNPA2B1的蛋白質(zhì)水平。使用針對p533'UTR和CDS區(qū)域的特異性引物進(jìn)行MeRIP-qPCR以檢測m6A水平，結(jié)果顯示沉默Mettl3導(dǎo)致3'UTR峰m6A甲基化水平降低，而過表達(dá)Mettl3具有相反的效果。接下來，RIP分析證實了hnRNPA2B1和p53前體mRNA之間的相互作用通過消耗Mettl3被抑制或通過過度表達(dá)Mettl3增強。
p533'UTR熒光素酶報告基因檢測發(fā)現(xiàn)hnRNPA2B1敲低降低了含有p533'UTR的熒光素酶構(gòu)建體的活性，而Mettl3過表達(dá)增加了由hnRNPA2B1敲低誘導(dǎo)的熒光素酶活性降低。建立了p533'UTRmut熒光素酶測定。發(fā)現(xiàn)p533'UTRmut的螢光素酶活性對hnRNPA2B1敲低或Mettl3過表達(dá)沒有反應(yīng)。數(shù)據(jù)表明，p53前體mRNA的表達(dá)受hnRNPA2B1與p533'UTR上m6A位點的結(jié)合控制。
2.Tempol能中度改善DHEA誘導(dǎo)的PCOS大鼠的糖耐量
由于多囊卵巢綜合征與代謝紊亂密切相關(guān)，評估了不同組的胰島素敏感性和葡萄糖穩(wěn)態(tài)。DHEA+PBS組大鼠的空腹血糖水平雖然沒有明顯差異，但其空腹血清胰島素水平和HOMA-IR值均高于油+PBS組。Tempol***降低了空腹胰島素水平，而對PCOS大鼠的空腹血糖水平和HOMA-IR值無***影響(圖2A-C)。OGTTs顯示PCOS大鼠葡萄糖***延遲和曲線下面積增加，這表明DHEA處理降低了葡萄糖排泄能力。經(jīng)tempol***后，糖耐量受損情況得到改善(圖2D)。ITTs證明，三組大鼠對胰島素的反應(yīng)相同(圖2E)。 英拜提供可靠的技術(shù)咨詢。
如圖5所示，E8中的d-flow改變了白細(xì)胞流量和炎癥標(biāo)志物(Il1β、Il6、Ccl2和Ccl3);ECM調(diào)節(jié)(Adamts4, Lamb1, Timp3，和Timp4);血管調(diào)節(jié)(Nos3, Ptgs2，和Edn1);和脂質(zhì)代謝(Tm6sf2、Lsr和Mgll)，并與E2的s-flow進(jìn)行比較(圖5A-5D)。這些結(jié)果表明，d-flow***了致***的內(nèi)皮反應(yīng)，同時通過改變轉(zhuǎn)錄和染色質(zhì)可及性水平上的基因表達(dá)來抑制抗***通路。
三、體內(nèi)血流依賴TF結(jié)合基序的鑒定
使用Signac和ChromVar軟件包通過我們的scATAC-seq數(shù)據(jù)集來識別流敏感的TF結(jié)合基序(圖6)。在每個內(nèi)皮聚類(E1- E8)中識別出前20個TF結(jié)合基序，并繪制成熱圖(圖6A)。圖6B和6C顯示了TF結(jié)合基序和它們被發(fā)現(xiàn)的各自的細(xì)胞簇。 英拜注重客戶的隱私。代謝科研省自然科學(xué)基金
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4）CircMAPK1編碼109個氨基酸的新蛋白MAPK1-109aa
根據(jù)在線數(shù)據(jù)庫circRNADb的預(yù)測結(jié)果，circMAPK1序列中包含一個開放閱讀框，起始密碼子為ATG，IRES位于274-327nt。這一觀察結(jié)果表明circMAPK1具有編碼109aa蛋白的潛能，本研究將其命名為MAPK1-109aa(圖4a)。為了驗證預(yù)測的IRES在circMAPK1中的活性，我們進(jìn)行了雙熒光素酶檢測，結(jié)果顯示野生型IRES報告基因的熒光素酶活性明顯高于突變型IRES報告基因的熒光素酶活性(圖4b)。為了進(jìn)一步證實MAPK1-109aa的存在，我們將circMAPK1IRES突變質(zhì)粒和circMAPK1過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入HEK293T細(xì)胞。銀染色結(jié)果顯示，在分子量為13kDa時存在明顯的蛋白帶，與MAPK-109aa的預(yù)測大小一致。MS檢測到AMEIMLNSKLCL序列，與MAPK1-109aa含有特定C端序列LCL的氨基酸序列一致(圖4c)。 cancer科研售后服務(wù)
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4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實驗