為了驗(yàn)證tRFs&tiRNA-Seq數(shù)據(jù)，作者檢測(cè)了91對(duì)PTC組織和*旁組織中tRFs&tiRNA的表達(dá)，其中，tiRNA-Gly在人類PTC組織中的表達(dá)水平比較高，并***高于*旁組織（圖1F-G）。WB顯示，tiRNA-Gly在PTC**中蛋白表達(dá)***高于*旁，但是tRNA-Gly的表達(dá)在*和*旁中無(wú)***差異（圖1H）?？傊瑃iRNA-Gly可能在PTC的進(jìn)展中起致*作用。
在小鼠模型中，tiRNA-Gly調(diào)節(jié)PTC細(xì)胞的增殖和遷移，并影響**生長(zhǎng)
首先檢測(cè)了tiRNA-Gly在3株P(guān)TC細(xì)胞系中的表達(dá)，如圖2A所示，K1細(xì)胞系中tiRNA-Gly的表達(dá)***低于BCPAP和TPC-1細(xì)胞系。因此，對(duì)于功能獲得性實(shí)驗(yàn)，合成帶有5’磷酸末端的tiRNA-Gly轉(zhuǎn)染至K1細(xì)胞系（圖2B）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，tiRNA-Gly***促進(jìn)K1細(xì)胞的增殖和遷移（圖2C-D）。對(duì)于功能缺失實(shí)驗(yàn)，在BCPAP和TPC-1細(xì)胞系中轉(zhuǎn)染siRNA干擾tiRNA-Gly的表達(dá)，結(jié)果顯示細(xì)胞的增殖和遷移都***下降（圖2E-G）。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)得出了類似的結(jié)果，干擾tiRNA-Gly表達(dá)導(dǎo)致**體積減小，Ki67表達(dá)下降?？傊?，體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)都表明tiRNA-Gly是PTC的惡性因子。 細(xì)菌可能是導(dǎo)致小鼠腸道尿酸降低的主要原因。湖北科研技術(shù)指導(dǎo)
表達(dá)MCF-10A腺泡的Myc-INPP4BWT而不是Myc-INPP4BC842A(PI(3,4)P24-磷酸酶死亡)的腺泡(補(bǔ)充圖2k)顯示增殖細(xì)胞的百分比明顯高于病媒控制的腺泡(1.5倍)(圖2i,j)。在第7天，腺泡的大小沒(méi)有明顯變化(圖2k)。第14天，Myc-INPP4BWT而不是MycINPP4BC842A表達(dá)MCF-10A的細(xì)胞形成了更大的腺泡(1.8倍)，每個(gè)腺泡的細(xì)胞數(shù)量比載體對(duì)照增加了1.4倍(圖2ln)。過(guò)表達(dá)INPP4B促進(jìn)MCF-10A細(xì)胞增殖，但不影響細(xì)胞的尖基底極性和細(xì)胞凋亡。與此一致的是，過(guò)表達(dá)Myc-INPP4BWT而不是Myc-INPP4BC842A在血清剝奪后的單層培養(yǎng)中增強(qiáng)了MCF-10A細(xì)胞的增殖(1.7倍)(圖2o,p)。
總之，這一數(shù)據(jù)與INPP4B以PI(3,4)P2-磷酸酶依賴的方式促進(jìn)pik3a突變體ER+乳腺*和pik3a野生型乳腺上皮細(xì)胞增殖的解釋相一致。 湖南科研動(dòng)物模型構(gòu)建2108年俞立團(tuán)隊(duì)明確闡述了收集和檢測(cè)遷移體的實(shí)驗(yàn)方法。
APCmRNA上的METTL3依賴性m6A上調(diào)抑制APC表達(dá)
為了確定METTL3依賴的m6A調(diào)控對(duì)APC表達(dá)的影響，構(gòu)建了一個(gè)熒光素酶報(bào)告基因，熒光素酶分析顯示，METTL3缺失**增加了WTAPC的熒光素酶活性，而突變的APC提高了熒光素酶活性并使該活性抵抗METTL3缺失的調(diào)節(jié)。相反，METTL3過(guò)表達(dá)抑制了WT-APC的熒光素酶活性，但沒(méi)有突變的APC。這些結(jié)果表明METTL3介導(dǎo)的m6A水平的APCmRNA上調(diào)抑制了APC的表達(dá)。
與這一發(fā)現(xiàn)一致，METTL3缺失增加了APCmRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)（，并且這些增加被KYSE450細(xì)胞中rMETTL3的重組表達(dá)所消除。此外，METTL3的過(guò)表達(dá)降低了KYSE450細(xì)胞中APC的表達(dá)，四環(huán)素劑量依賴性增加的METTL3表達(dá)水平與APC水平呈負(fù)相關(guān)。相反，METTL3非活性突變體與WT對(duì)應(yīng)物不同，未能調(diào)節(jié)APC表達(dá)。值得注意的是，ESCC細(xì)胞中的METTL14缺失消除了METTL3的過(guò)度表達(dá)降低了APC的表達(dá)。這些結(jié)果表明，在ESCC細(xì)胞中，METTL3與METTL14共同介導(dǎo)的APCmRNAm6A上調(diào)抑制了APCmRNA和蛋白的表達(dá)。
METTL3增強(qiáng)APCmRNA的m6A和隨后的YTHDF結(jié)合抑制APC表達(dá)YTHDF1-3介導(dǎo)mRNA降解，針對(duì)YTHDF1的抗體進(jìn)行RIP分析，實(shí)時(shí)定量PCR分析顯示，在KYSE180中，與APCmRNA結(jié)合的YTHDF2的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于YTHDF1和YTHDF3的數(shù)量，并且由于METTL3缺失而減少。這些結(jié)果表明METTL3增加了APCmRNA的m6A，在很大程度上促進(jìn)了YTHDF2與APCmRNA的結(jié)合。為了研究YTHDF2與APCmRNA結(jié)合在APC表達(dá)中的作用，我們?nèi)コ薡THDF2，這增加了KYSE450細(xì)胞中APC的mRNA（圖5d和補(bǔ)充圖5e）和蛋白質(zhì)表達(dá)。YTHDF1–3的聯(lián)合缺失進(jìn)一步增加了這些細(xì)胞中APC的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)。此外，還進(jìn)行了熒光素酶報(bào)告子分析，結(jié)果表明，缺失YTHDF2增強(qiáng)了由含m6A的WTAPCCDS序列驅(qū)動(dòng)的熒光素酶活性，而突變的APC增強(qiáng)了熒光素酶活性，并使該活性抵抗了YTHDF2缺失的調(diào)節(jié)。此外，METTL3過(guò)表達(dá)抑制由WTAPCCDS序列驅(qū)動(dòng)的熒光素酶活性通過(guò)YTHDF2耗竭恢復(fù)，其不影響突變的APC增強(qiáng)的熒光素酶活性。這些結(jié)果表明METTL3增加了APCmRNA的m6A，隨后的YTHDF結(jié)合抑制了APC的表達(dá)。巨噬細(xì)胞表型協(xié)調(diào)急性胰腺炎損傷后的炎癥和修復(fù)再生。
1.FBW7促進(jìn)胰腺*細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化作者以分析在SW1990轉(zhuǎn)染pCMV-FBW7或空載體(GEO:accessionnumbersGSE76443)的高通量基因表達(dá)譜陣列研究FBW7在胰腺*中的作用。以谷胱甘肽代謝和脂肪酸代謝相關(guān)的氨基酸為重點(diǎn)，結(jié)果顯示，F(xiàn)BW7WT和FBW7T205A下調(diào)絲氨酸、蛋氨酸、甘氨酸和胱氨酸，而FBW7R465H對(duì)絲氨酸、蛋氨酸、甘氨酸和胱氨酸無(wú)影響。這些氨基酸可被催化生成谷胱甘肽。作者檢測(cè)了PANC-1和SW1990穩(wěn)定細(xì)胞系異位表達(dá)空載體FBW7WT或FBW7T205A的GSH/GSSG比值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)FBW7WT和FBW7T205A導(dǎo)致GSH/GSSG比值增加。接著采用BODIPY581/591C11探針檢測(cè)氧化性脂質(zhì)，并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)和共聚焦顯微鏡進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)當(dāng)脂質(zhì)過(guò)氧化發(fā)生時(shí)，熒光由紅色變?yōu)榫G色，顯示FBW7WT和FBW7T205A導(dǎo)致脂質(zhì)過(guò)氧化水平升高。這些結(jié)果表明FBW7WT和FBW7T205A促進(jìn)胰腺*細(xì)胞的ROS和脂質(zhì)過(guò)氧化。大黃酸可以改變腸道菌群組成?；A(chǔ)醫(yī)學(xué)科研創(chuàng)新服務(wù)
鑒定的前列腺瘤細(xì)胞內(nèi)源性雄***受體網(wǎng)絡(luò)。湖北科研技術(shù)指導(dǎo)
轉(zhuǎn)座酶染色質(zhì)可及性單核測(cè)序(snATAC-seq)也是一種單細(xì)胞表觀遺傳組測(cè)序技術(shù)。單細(xì)胞核測(cè)序，能夠獲得組織的細(xì)胞圖譜，解決細(xì)胞異質(zhì)性的問(wèn)題。單細(xì)胞或細(xì)胞核RNA測(cè)序(scRNA-seq或snRNAseq)促進(jìn)了對(duì)定義腎臟細(xì)胞特性的基因和途徑的更深入的理解。成熟的人類和小鼠腎臟的多個(gè)scRNAseq圖譜已經(jīng)確定了轉(zhuǎn)錄如何有助于細(xì)胞類型的特異性。**近的方法已經(jīng)將這種方法擴(kuò)展到單細(xì)胞染色質(zhì)可及性分析。單核染色質(zhì)轉(zhuǎn)置可及性測(cè)序試驗(yàn)(snATACseq)是ATAC-seq的擴(kuò)展，該試劑盒利用Tn5轉(zhuǎn)置酶在數(shù)千個(gè)單個(gè)細(xì)胞中測(cè)量染色質(zhì)可及性。湖北科研技術(shù)指導(dǎo)
公司特色是以各式高通量二代測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過(guò)英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫(xiě)SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開(kāi)發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開(kāi)放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
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