caspase-3抗體是一種***用于檢測(cè)凋亡細(xì)胞的標(biāo)志物。確實(shí)，MMTVneu**的caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞比相應(yīng)的Pten+/+少;綜上所述，這些結(jié)果表明，PTEN不能被ATM磷酸化的細(xì)胞對(duì)基因毒性應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡具有抗性。為了評(píng)估表達(dá)PTEN-398A且DNA損傷未解決的細(xì)胞在輻照(圖2B,C和補(bǔ)充圖4B,C)后的持續(xù)存在是否是誘導(dǎo)凋亡反應(yīng)失敗的結(jié)果，我們?cè)贗R之前先用泛caspase抑制劑z-VAD-FMK(zVAD)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理。與DMSO處理相比，zVAD增加了PTEN-WT細(xì)胞中未解決的DNA損傷灶的數(shù)量，其水平與DMSO處理的PTEN-398A細(xì)胞相當(dāng)(補(bǔ)充圖5F)。然而，需要注意的是，zVAD預(yù)處理也略微增加了IR后PTEN-398A細(xì)胞中未解決的DNA損傷灶的數(shù)量。采用UPGMAPCoA和NMDS評(píng)估不同群體的腸道菌群β-多樣性.服務(wù)標(biāo)書地區(qū)科學(xué)基金
為了驗(yàn)證MAO-A缺乏是否直接有助于減輕Maoa KO巨噬細(xì)胞的免疫抑制極化，進(jìn)行拯救實(shí)驗(yàn)。構(gòu)建MIG-Maoa逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，利用該載體轉(zhuǎn)導(dǎo)Maoa KO BMDMs，并在這些巨噬細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)了MAO-A的過(guò)表達(dá)（圖3l-n）。MAO-A過(guò)表達(dá)***加劇了IL-4/ IL-13刺激的Maoa KO BMDMs的免疫抑制表型（圖3o-p）。綜上所述，這些結(jié)果表明，MAO-A作為一種自主因子，在***刺激下促進(jìn)巨噬細(xì)胞免疫抑制極化。
4、MAO-A通過(guò)ROS上調(diào)促進(jìn)巨噬細(xì)胞免疫抑制極化
接下來(lái)，研究調(diào)控MAO-A促進(jìn)巨噬細(xì)胞免疫抑制極化的分子機(jī)制。據(jù)報(bào)道，細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS；氧化應(yīng)激)會(huì)引起巨噬細(xì)胞的免疫抑制特征。MAO-A催化單胺的氧化脫氨，從而產(chǎn)生過(guò)氧化氫(H2O2)作為副產(chǎn)物，可以增加細(xì)胞內(nèi)ROS水平。因此，推測(cè)MAO-A可能通過(guò)上調(diào)TAM中的ROS水平，促進(jìn)TME中TAM的免疫抑制極化（圖4a）。為了驗(yàn)證這一假設(shè)，測(cè)量了從攜帶B16-OVA**的MaoaWT和KO小鼠中分離的TAMs中的ROS水平，并檢測(cè)到MaoaKOTAMs中ROS水平***降低（圖4b-c）。 臨床醫(yī)學(xué)標(biāo)書中標(biāo)率高為鑒定IGF2BPs泛素化的E3連接酶對(duì)RNA下拉沉淀物進(jìn)行質(zhì)譜分析。
1）SsD在AML中表現(xiàn)出抗增殖活性
為了闡明SsD在白血病中的藥理作用，我們?cè)?0個(gè)人白血病細(xì)胞系中探討了一系列SsD濃度的影響。我們發(fā)現(xiàn)SsD在大多數(shù)白血病細(xì)胞系中以劑量依賴的方式抑制細(xì)胞活力(圖1A)。為了進(jìn)一步研究SsD對(duì)白血病的抑制作用，我們?cè)?種白血病細(xì)胞系NB4、kas1、MV4-11和U937(SsD敏感性排名前4位的細(xì)胞)進(jìn)行了集落實(shí)驗(yàn)。與細(xì)胞活力結(jié)果相似，SsD***抑制了所測(cè)細(xì)胞系的集落數(shù)量和大小(圖1B-E)。有趣的是，SsD對(duì)細(xì)胞增殖和活力的抑制可能是由于細(xì)胞周期阻滯在G1期和NB4細(xì)胞凋亡增加(圖1F-G)。
七、急性腎損傷和慢性腎臟疾病患者PT_VCAM1的比例升高
對(duì)小鼠缺血再灌注損傷(IRI)實(shí)驗(yàn)中獲得的大量RNA-seq進(jìn)行反卷積，以確定PT_VCAM1的比例是否與急性腎損傷有關(guān)。BisqueRNA使用基于scRNA-seq參考的反褶積方法從整體RNA-seq中估算細(xì)胞類型的豐度。PT_VCAM1估計(jì)比例在iri后24h***增加，并持續(xù)至少7天;與正常近端小管細(xì)胞比例下降相對(duì)應(yīng)(圖7a)。有趣的是，未手術(shù)控制小鼠腎臟中PT_VCAM1的估計(jì)比例在老齡小鼠中增加(圖7b)。用BisqueRNA對(duì)非**腎樣本進(jìn)行反卷積，估計(jì)PT_VCAM1細(xì)胞的比例為2.6%(圖7d)，這與我們的snRNA-seq和snatc-seq估計(jì)一致。接下來(lái)，我們分析了來(lái)自2型糖尿病患者腎臟活檢的大量RNA-seq。與對(duì)照組和早期糖尿病腎病患者相比，晚期糖尿病腎病患者PT_VCAM1的比例明顯更高(圖7e)，提示PT_VCAM1和小管損傷可能與糖尿病腎病的疾病進(jìn)展有關(guān)。從小鼠IRI到人類的細(xì)胞類型標(biāo)記轉(zhuǎn)移表明，大部分PT_VCAM1與我們**近在小鼠中發(fā)現(xiàn)的修復(fù)失敗的近端小管細(xì)胞(FR-PTC)群體有關(guān)(圖7c)。 轉(zhuǎn)座酶染色質(zhì)可及性單核測(cè)序(snATAC-seq)也是一種單細(xì)胞表觀遺傳組測(cè)序技術(shù)。
2、miR-208b由結(jié)腸*細(xì)胞以外泌體的方式分泌
隨后，作者探究了miR-208b的存在方式是否由外泌體介導(dǎo)。分離鑒定了3株CRC細(xì)胞系的外泌體，并檢測(cè)了其中miR-208b的表達(dá)。外泌體中miR-208b的表達(dá)模式和在細(xì)胞中的模式一致，在SW480-OXA***高于SW480***高于NCM460。這些結(jié)果表明CRC中miR-208b的是以外泌體的模式分泌，這可能和順鉑化療敏感性有關(guān)。
3、SW480細(xì)胞分泌的外泌體miR-208b促進(jìn)Treg擴(kuò)增
前人研究表明順鉑會(huì)影響**免疫微環(huán)境。MiRNA可能通過(guò)促進(jìn)Treg擴(kuò)增誘導(dǎo)免疫侵襲。因此，作者探究了CRC分泌外泌體miR-208b對(duì)T細(xì)胞分化的影響。使用siRNA去除miR-208b，然后收集外泌體，將含有不同水平miR-208b的外泌體與原代CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)（圖4A-B）。6h后，受體CD4+T細(xì)胞中miR-208b***增加，尤其是SW480-OXA組，而外泌體miR-208b缺失組則沒(méi)有***改變，表明CD4+T細(xì)胞中miR-208b是由外泌體傳輸（圖4C-D）。此外，SW480和SW480-OXA來(lái)源外泌體處理組的CD4+CD25highFoxp3+Tregs細(xì)胞數(shù)***增加，而外泌體miR-208b缺失對(duì)其陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)則沒(méi)有明顯影響。表明外泌體miR-208b促進(jìn)Treg擴(kuò)增。 在786-O和A498細(xì)胞中CDKN3敲除后的western blot分析證實(shí)了這一關(guān)系.推廣標(biāo)書省自然科學(xué)基金
circRNAs在**的發(fā)展和進(jìn)展中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用.服務(wù)標(biāo)書地區(qū)科學(xué)基金
4）CircMAPK1編碼109個(gè)氨基酸的新蛋白MAPK1-109aa
根據(jù)在線數(shù)據(jù)庫(kù)circRNADb的預(yù)測(cè)結(jié)果，circMAPK1序列中包含一個(gè)開(kāi)放閱讀框，起始密碼子為ATG，IRES位于274-327nt。這一觀察結(jié)果表明circMAPK1具有編碼109aa蛋白的潛能，本研究將其命名為MAPK1-109aa(圖4a)。為了驗(yàn)證預(yù)測(cè)的IRES在circMAPK1中的活性，我們進(jìn)行了雙熒光素酶檢測(cè)，結(jié)果顯示野生型IRES報(bào)告基因的熒光素酶活性明顯高于突變型IRES報(bào)告基因的熒光素酶活性(圖4b)。為了進(jìn)一步證實(shí)MAPK1-109aa的存在，我們將circMAPK1IRES突變質(zhì)粒和circMAPK1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入HEK293T細(xì)胞。銀染色結(jié)果顯示，在分子量為13kDa時(shí)存在明顯的蛋白帶，與MAPK-109aa的預(yù)測(cè)大小一致。MS檢測(cè)到AMEIMLNSKLCL序列，與MAPK1-109aa含有特定C端序列LCL的氨基酸序列一致(圖4c)。為了檢測(cè)該多肽產(chǎn)物，我們使用了一種識(shí)別MAPK1中間部分的抗體(圖4d)。WesternBlot檢測(cè)40對(duì)胃*組織(圖4e)和細(xì)胞系(圖4f)中MAPK1-109aa和MAPK1的水平。 服務(wù)標(biāo)書地區(qū)科學(xué)基金
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