再次從老年和年輕小鼠中分離BMSCs，Dil染色劑標(biāo)記后體外增殖，脛骨內(nèi)注射到另一批年輕小鼠中，三天后收獲脛骨對(duì)成骨標(biāo)志物Runx2進(jìn)行熒光免疫染色。發(fā)現(xiàn)老年BMSCs處理的小鼠中Dil標(biāo)記細(xì)胞降低，表明老化過(guò)程中OPCs向骨形成表面的遷移能力降低。大部分遷移到骨形成表面的Dil標(biāo)記細(xì)胞表達(dá)Runx2，表明OPCs遷移到骨形成表面發(fā)生成骨分化，有助于體內(nèi)骨形成。與年輕BMSCs相比，老年BMSCs的體外遷移能力明顯受損，Macf1***下調(diào)，從Macf1基因位點(diǎn)轉(zhuǎn)錄而來(lái)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA PMIF（即lnc-PMIF）表達(dá)***增高。上述提示，衰老過(guò)程中小鼠骨形成的減少伴隨著OPCs向骨形成表面遷移的減少和OPCs中l(wèi)nc-PMIF表達(dá)的升高。circSDHC通過(guò)充當(dāng)miR-127-3p的海綿促進(jìn)ccRCC的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移.推薦標(biāo)書(shū)實(shí)驗(yàn)外包
7.抑制NF-kB可抑制LPS和MCD誘導(dǎo)的Caspase-11表達(dá)
NF-kB已被證明在Caspase-11的表達(dá)和NASH發(fā)展中起重要作用。為了檢測(cè)NF-kB是否參與LPS和MCD誘導(dǎo)的Caspase-11表達(dá)，我們?cè)贚PS處理的原代肝細(xì)胞和MCD處理的小鼠中使用NF-kB抑制劑JSH-23。如圖7A所示，LPS處理促進(jìn)了Caspase-11mRNA的表達(dá)，而JSH-23則抑制了LPS誘導(dǎo)的caspase-11的上調(diào)。相應(yīng)的，我們檢測(cè)到LPS處理的原代肝細(xì)胞中pro-caspase-11蛋白水平***升高，而JSH-23/LPS處理的原代肝細(xì)胞中pro-caspase-11蛋白水平***降低(圖7B和C)。MCD處理誘導(dǎo)野生型小鼠肝臟中Caspase-11mRNA(圖7D)和蛋白(圖7E和F)的表達(dá)。相比之下，JSH-23***可抑制MCD誘導(dǎo)的Caspase-11的表達(dá)。 標(biāo)書(shū)歡迎咨詢(xún)短鏈脂肪酸在神經(jīng)退行性疾病中發(fā)揮***和神經(jīng)保護(hù)作用。
我們想知道這些 CCR2 +單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞是否可以在胰腺損傷后重新編程為 M2 樣巨噬細(xì)胞。在植入和誘導(dǎo) AP 8 周后，我們發(fā)現(xiàn)第 3 天的增殖巨噬細(xì)胞 (Ki67 + ) 主要來(lái)自 CCR2 WT小鼠。與來(lái)自 CCR2 KO小鼠的巨噬細(xì)胞相比，來(lái)自 CCR2 WT小鼠的巨噬細(xì)胞表現(xiàn)出更高的 CD206 和 IL4RA 表達(dá)水平。綜上所述，結(jié)果表明，ADM 階段的 M2 樣巨噬細(xì)胞主要來(lái)源于 CCR2 +單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞，這些細(xì)胞在 AP 早期募集.
巨噬細(xì)胞在AP恢復(fù)不同階段的不同作用鑒于AP恢復(fù)過(guò)程中巨噬細(xì)胞的表型變化，接下來(lái)試圖通過(guò)用脂質(zhì)體***巨噬細(xì)胞來(lái)檢查巨噬細(xì)胞在不同修復(fù)/再生階段的作用。首先，我們?cè)诩毙匝装Y反應(yīng)后（從第1天到第2天）立即消耗了胰腺巨噬細(xì)胞，并在第3天檢查了胰腺。如圖所示，第3天之前巨噬細(xì)胞的消耗可以在很大程度上減少導(dǎo)管樣結(jié)構(gòu)，這表明巨噬細(xì)胞在ADM的形成。AP損傷后第3天巨噬細(xì)胞的消耗顯著延遲了胰腺修復(fù)。Ki67+細(xì)胞在第3天達(dá)到峰值，并隨著胰腺恢復(fù)逐漸下降。與組織學(xué)結(jié)果一致，發(fā)現(xiàn)CN處理組的Ki67+細(xì)胞從第5天到第7天大幅下降，但在CL處理組中沒(méi)有，表明CL處理小鼠的修復(fù)過(guò)程受損。
MIR210HG與子宮內(nèi)膜*患者的低生存率相關(guān)
為了識(shí)別子宮內(nèi)膜*組中異常表達(dá)的lncRNA，我們分析了來(lái)自TCGA的數(shù)據(jù)。表達(dá)陣列分析顯示332個(gè)lncRNA的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。7個(gè)lncRNA表達(dá)上調(diào)(圖1A和1B)。然后，我們分析了GEO數(shù)據(jù)集，發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜*GSE17025隊(duì)列中MIR210HG的表達(dá)也上調(diào)(圖1C)。qPCR顯示MIR210HG在子宮內(nèi)膜*中的表達(dá)明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織(圖1D)。此外，我們分析了MIR210HG的表達(dá)與子宮內(nèi)膜*患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)MIR210HG在從I、II期到III、IV期的進(jìn)展過(guò)程中增加。MIR210HG的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移***相關(guān)(圖1E)。原位雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，MIR210HG在子宮內(nèi)膜*中的表達(dá)水平高于正常子宮內(nèi)膜組織(圖1F)。MIR210HG高表達(dá)的子宮內(nèi)膜*患者生存率較低(圖1G)。 TRIM25是介導(dǎo)IGF2BPs泛素化的E3連接酶。
APC是促進(jìn)β-連環(huán)蛋白降解調(diào)節(jié)因子。m6A峰位于APC末端密碼子區(qū)域附近的***一個(gè)外顯子，METTL3缺失降低了APCmRNA的m6A水平。分析顯示，有三個(gè)腺苷堿基甲基化，并且在METTL3缺失導(dǎo)致的APCmRNAm6A峰值下降范圍內(nèi)。這些結(jié)果表明METTL3調(diào)節(jié)apcmrna的m6A水平，這種水平在許多類(lèi)型的*細(xì)胞中都很高。
m6A-RIP和實(shí)時(shí)定量PCR分析表明，在KYSE180細(xì)胞中，METTL3缺失后，APCmRNA中的m6A水平***降低。相反，METTL3過(guò)表達(dá)增加了KYSE180細(xì)胞中APCmRNA的m6A水平，并且這種增加被METTL14缺失所消除。此外，帶有抗METTL3的RIP顯示METTL3與KYSE180和KYSE450細(xì)胞中的APCmRNA結(jié)合。這些結(jié)果表明METTL3與apcmrna結(jié)合并以METTL14依賴(lài)的方式增強(qiáng)其m6A水平。 circSDHC來(lái)源于第1染色體上的SDHC基因.泌尿標(biāo)書(shū)國(guó)家自然科學(xué)基金
PCOS大鼠大部分血清代謝物的豐度與對(duì)照組大鼠完全不同.推薦標(biāo)書(shū)實(shí)驗(yàn)外包
4）miR-337-3p/miR-137在子宮內(nèi)膜*組織中表達(dá)較低，miR-337-3p/miR-137是MIR210HG的靶點(diǎn)
qPCR結(jié)果顯示，**組織中miR-337-3p和miR-137的表達(dá)明顯下調(diào)(圖4A)。此外，采用Pearson等級(jí)相關(guān)法分析miR-337-3p、miR-137與MIR210HG表達(dá)的相關(guān)性(圖4B)。隨后，我們分析了HMGA2與miR-337-3p/137表達(dá)的關(guān)系(圖4C)。我們進(jìn)行了熒光素酶實(shí)驗(yàn)，以確定MIR210HG是否可以直接靶向miR-337-3p和miR-137在預(yù)測(cè)的結(jié)合位點(diǎn)(圖4D)。為了確定MIR210HG是否與miRNA核糖**白復(fù)合物結(jié)合，我們使用抗AGO2抗體進(jìn)行RIP實(shí)驗(yàn)。與對(duì)照免疫球蛋白G免疫沉淀相比，lncRNAMIR210HG和miR-337-3p/miR-137在含AGO2的免疫沉淀中***富集(圖4E)。當(dāng)MIR210HG在Ishikawa和HEC-1A細(xì)胞中過(guò)表達(dá)時(shí)，miR-337-3p和miR-137表達(dá)水平降低。相比之下，轉(zhuǎn)染sh-MIR210HG后，細(xì)胞中miR-337-3p和miR-137的表達(dá)水平***升高，說(shuō)明MIR210HG可以調(diào)控miR-337-3p和miR-137的表達(dá)(圖4F)。隨后，我們研究了miR-337-3p和miR-137是否負(fù)調(diào)控MIR210HG的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá)miR-337-3p/137會(huì)下調(diào)MIR210HG的表達(dá)，而敲除miR-337-3p/137會(huì)上調(diào)MIR210HG的表達(dá)(圖4G)。 推薦標(biāo)書(shū)實(shí)驗(yàn)外包
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4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過(guò)表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)