編碼PI3Kαp110α亞基的PIK3CA在多達40%的乳腺*中發(fā)生突變，**常見的是雌***受體陽性(ER+)**。突變的PIK3CA在校正ER陽性等有利風(fēng)險變量時并不是預(yù)后的**標記物，但它是改善晚期ER+乳腺*內(nèi)分泌和PI3K聯(lián)合***應(yīng)答的預(yù)測生物標記物。有趣的是，與PTEN等其他PI3K通路改變的**相比，pikca突變ER+乳腺*顯示出極少的AKT***和對AKT信號的依賴。
NPP4B抑制AKT信號，并在三陰性(ER/PR/HER2)和基底樣乳腺*中表現(xiàn)出**抑制活性。此外，INPP4B蛋白在黑色素瘤、卵巢*和前列腺*中表達減少。在小鼠模型中，Inpp4b消融與Tp53/Brca1缺失共同增加了乳腺**外顯率，并與Pten雜合子缺失共同促進體內(nèi)甲狀腺**的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。值得注意的是，INPP4B通過降解PI(3,4)P2，抑制早期核內(nèi)體的局部AKT2信號通路和EGFR降解。 FMT處理對脊髓損傷后小鼠腸道屏障通透性有影響。生物相關(guān)標書省自然科學(xué)基金
由于circMAPK1在GC細胞系中穩(wěn)定表達，我們推測circMAPK1可能是一種適合GC診斷或預(yù)后的標志物。qRT-PCR顯示circMAPK1在*組織中的表達低于匹配的非*組織(圖1m)。Kaplan-Meier生存分析顯示胃*組織中circMAPK1水平較高的患者總生存期***延長(圖1n)。綜上所述，circMAPK1是一種穩(wěn)定表達的circRNA，可作為有效的診斷和預(yù)后標志物，值得進一步研究。
2）CircMAPK1在體外抑制GC細胞的增殖和遷移
為了研究circMAPK1在GC中的生物學(xué)功能，我們進行了一系列細胞實驗。隨CCK8實驗(圖2a)、集落形成實驗(圖2b)和EdU實驗(圖2c)結(jié)果表明，沉默circMAPK1可***增強GC細胞的增殖能力。我們發(fā)現(xiàn)circMAPK1的減少增加了S期GC細胞的數(shù)量(圖2d)。Transwell(圖2e)試驗顯示circMAPK1的干擾促進了GC細胞的遷移。此外，過表達circMAPK1***削弱了GC細胞的增殖能力。同樣，過表達circMAPK1時，S期GC細胞的數(shù)量***減少，細胞遷移受到抑制。綜上所述，circMAPK1在GC細胞的增殖和遷移中起著重要作用。 cancer標書國家自然科學(xué)基金大量數(shù)據(jù)支持腸道微生物組在SCI中發(fā)揮重要作用。
為了探討UCP1與AKI之間的相關(guān)性，我們在體內(nèi)、體外檢測了UCP1在AKI模型中的表達。結(jié)果顯示，UCP1在AKI小鼠中***下調(diào)，更重要的是，隨著腎損傷的加重，其表達量逐漸降低(圖2E-F)。在體外，隨著順鉑刺激時間的延長，HK2細胞中UCP1的表達降低(圖2G)。這些結(jié)果表明UCP1與AKI的嚴重程度呈負相關(guān)。此外，隨著AKI腎細胞損傷程度的增加，脂質(zhì)的積累，UCP1的表達逐漸降低(圖2H)。這一結(jié)果表明，UCP1在AKI中的表達可能影響脂質(zhì)積累。
3）AKI中的脂質(zhì)積累與UCP1高度負相關(guān)在確定了UCP1與AKI中的脂質(zhì)積累負相關(guān)
后，我們試圖闡明其潛在的關(guān)系。首先，我們使用UCP1特異性過表達慢病毒載體和UCP1激動劑CL316243構(gòu)建UCP1上調(diào)的細胞模型(圖3A)。如圖3B所示，UCP1過表達***降低了順鉑暴露HK2的脂質(zhì)積累。
我們接下來試圖識別circPDE4B上游調(diào)節(jié)器。我們首先對circPDE4B側(cè)翼序列進行RNApull-down-MS檢測，發(fā)現(xiàn)兩個與RNA剪接相關(guān)的RBP，包括DExH-boxhelicase9和FUS(圖1G)。RT-qPCR結(jié)果顯示，F(xiàn)US敲除后，HCs中circPDE4B表達下調(diào)，而pPDE4B和mPDE4B沒有明顯變化(圖1H)。此外，***兩種FUSshRNA慢病毒只降低了circPDE4B的表達(圖1I)，而過表達FUS則上調(diào)了circPDE4B的表達(圖1I)。接下來，RIP分析顯示FUS與外顯子相鄰的位點結(jié)合，而其他遠端位點則可以忽略(圖1J，K)。我們還尋找了可能的FUS響應(yīng)元素，發(fā)現(xiàn)了兩個可能的motifs，A位于上游，B位于下游。我們進一步設(shè)計了兩個短的circPDE4B微基因，包括circPDE4B-s和circPDE4B-s-del(圖1L)。RIP顯示FUS與circPDE4B-s之間存在明顯的相互作用，但與circPDE4B-s-del之間沒有相互作用(圖1M)，表明FUS需要周圍內(nèi)含子中的假定位點來結(jié)合。我們接下來在表達circPDE4B-s/del的HCs中敲除FUS，發(fā)現(xiàn)與circPDE4B-del相比，circPDE4B-s***減少了FUS敲除的circPDE4B轉(zhuǎn)錄本(圖1N)。值得注意的是，在HCs中FUS被TNF-α下調(diào)(圖1O)。綜上所述，在OA中circPDE4B的下調(diào)至少部分是由FUS的抑制引起的。神經(jīng)絲(NF-200)是神經(jīng)元軸突中富含的細胞特異性蛋白。
4、hnRNPA2B1在外泌體miR-934向巨噬細胞轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用
據(jù)報道，外泌體RNA的分泌需要一種特定的RNA結(jié)合蛋白來轉(zhuǎn)運。通過RNApull-down分析和質(zhì)譜分析，鑒定了三種可能參與miR-934轉(zhuǎn)運的RNA結(jié)合蛋白，并發(fā)現(xiàn)敲除hnRNPA2B1可以降低外泌體miR-934的表達（Fig.4a,b）。hnRNPA2B1是一種RNA結(jié)合蛋白，通過與特定基序GGAG/CCCU結(jié)合，參與miRNAs的運輸和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。特別是，由于miR-934序列中有兩個GGAG基序，我們推測hnRNPA2B1可能通過與GGAG序列結(jié)合，介導(dǎo)miR-934包裝成外泌體的過程。此外，miRNApull-down分析顯示，在細胞質(zhì)和外泌體中，miR-934和hnRNPA2B1之間存在***的結(jié)合關(guān)系，然而，突變miR-934的結(jié)合序列(GGAG)可削弱這種結(jié)合（Fig.4c）。RNA免疫沉淀分析進一步證明，無論是在CRC細胞及其外泌體裂解物中，miR-934在anti-hnrnpa2b1抗體組中比在anti-IgG抗體組中更***富集（Fig.4d）。此外，敲除hnRNPA2B1可以抑制外泌體miR-934從HCT8和LoVo細胞轉(zhuǎn)移到巨噬細胞的過程（Fig.4e）。因此，這些結(jié)果證實hnRNPA2B1可以通過與miR-934的GGAG序列結(jié)合，介導(dǎo)miR-934包裝到CRC細胞外泌體中，并將外泌體miR-934轉(zhuǎn)移到巨噬細胞中。 circNDUFB2與IGF2BPs相互作用促進泛素/蛋白酶體介導(dǎo)的IGF2BPs降解.生物相關(guān)標書技術(shù)指導(dǎo)
DHEA處理的大鼠給予200 mg/kg水蘇糖12天.生物相關(guān)標書省自然科學(xué)基金
抑制MIR210HG和miR-337-3p/137過表達抑制**生長測定了MIR210HG和miR-337-3p/137在體內(nèi)**模型中的功能。裸鼠實驗，每組小鼠3只。結(jié)果與對照組相比，轉(zhuǎn)染sh-MIR210HG并過表達miR-337-3p和miR-137降低了**體積(圖8A)。轉(zhuǎn)染shMIR210HG并同時過表達miR-337-3p和miR-137的組**體積**小。免疫組化分析，與單獨轉(zhuǎn)染agomir-337-3p/137和sh-MIR210HG組相比，共轉(zhuǎn)染組HMGA2和Ki-67的表達較低(圖8B)。抑制MIR210HG和miR-337-3p/137過表達抑制**生長我們測定了MIR210HG和miR-337-3p/137在體內(nèi)**模型中的功能。裸鼠實驗中，每組實驗小鼠3只。結(jié)果表明與對照組相比，轉(zhuǎn)染sh-MIR210HG并過表達miR-337-3p和miR-137降低了**體積(圖8A)。轉(zhuǎn)染shMIR210HG并同時過表達miR-337-3p和miR-137的組**體積**小。免疫組化分析顯示，與單獨轉(zhuǎn)染agomir-337-3p/137和sh-MIR210HG組相比，共轉(zhuǎn)染組HMGA2和Ki-67的表達較低(圖8B)。結(jié)論：MIR210HG在子宮內(nèi)膜*患者中是一個**的預(yù)后因素，干擾MIR210HG的體內(nèi)外表達可抑制子宮內(nèi)膜*細胞的惡性表型。MIR210HG-miR-337-3p/137被發(fā)現(xiàn)介導(dǎo)HMGA2調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜*細胞惡性行為的能力。MIR210HG-miR-337-3p/137-HMGA2軸是新的子宮內(nèi)膜*分子預(yù)后標志物和潛在的***靶點。 生物相關(guān)標書省自然科學(xué)基金
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標書奠定較好的基礎(chǔ)
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5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學(xué)實驗