CRC細(xì)胞外泌體的表征
作者分離從CRC細(xì)胞表面脫落的各種囊泡，通過(guò)電子顯微鏡、納米顆粒大小電位分析和蛋白質(zhì)印跡鑒定外泌體。為了確定外泌體是否可以被CRC細(xì)胞內(nèi)化，用熒光染料PKH67標(biāo)記外泌體，然后將它們與SW480細(xì)胞共培養(yǎng)，結(jié)果顯示SW480細(xì)胞表現(xiàn)出高吸收效率。與PKH67標(biāo)記的外泌體孵育24小時(shí)后，超過(guò)90%的SW480細(xì)胞對(duì)PKH67熒光呈陽(yáng)性，表明外泌體被SW480細(xì)胞內(nèi)化。
轉(zhuǎn)移性CRCSW620細(xì)胞分泌的外泌體促進(jìn)CRC細(xì)胞的遷移、侵襲和EMT
作者使用細(xì)胞系SW480和SW620作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，通過(guò)CCK-8在24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)測(cè)定細(xì)胞活力。結(jié)果表明，SW480-exo或SW620-exo細(xì)胞對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)沒(méi)有顯著影響。此外，平板集落形成分析顯示SW480-exo或SW620-exo細(xì)胞之間的生長(zhǎng)沒(méi)有差異。然而，來(lái)自轉(zhuǎn)移性CRCSW620細(xì)胞的外泌體通過(guò)Transwell測(cè)定顯著促進(jìn)了SW480細(xì)胞的遷移和侵襲。此外，與SW480-exo和對(duì)照組相比，SW620-exo提高了SW480細(xì)胞的傷口愈合能力。蛋白質(zhì)印跡分析以確定與EMT相關(guān)的蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。結(jié)果表明，相對(duì)于SW480-exo處理，SW620-exo處理顯著增加波形蛋白、纖連蛋白和N-鈣粘蛋白的表達(dá)并降低E-鈣粘蛋白的表達(dá)，表明源自轉(zhuǎn)移性CRC細(xì)胞的外泌體在SW480中誘導(dǎo)了EMT。 zVAD預(yù)處理也略微增加了IR后PTEN-398A細(xì)胞中未解決的DNA損傷灶的數(shù)量。自噬課題實(shí)驗(yàn)外包
4、白樺素能改善小鼠血液、肝臟和脂肪組織中的脂質(zhì)參數(shù)
測(cè)量了血液和其他組織中的脂質(zhì)水平，如圖5所示。洛伐他汀和白樺素處理的小鼠的血清總膽固醇（TC）和甘油三酸酯（TG）的水平顯著低于對(duì)照***的小鼠（圖5A和5B）。值得注意的是，與洛伐他汀相似，白樺素降低了LDL膽固醇（LDL-c）的含量并增加了HDL膽固醇（HDL-c）（圖5C和5D）。有趣的是，盡管白樺素和洛伐他汀均降低了肝臟的TC水平，但只有白樺素顯著降低了肝臟的TG含量（圖5E和5F）。 VEGF課題分子生物學(xué)我們比較了Pex和Npex組間的HSC的RNA測(cè)序基因表達(dá)譜。
表達(dá)PTENWT的細(xì)胞，在雙胸苷激酶阻斷和輻射釋放后被阻滯在S期，表現(xiàn)出低水平的CDK2磷酸化(圖5A)。相反，經(jīng)過(guò)相同處理的PTEN-398A細(xì)胞有更高水平的磷酸化CDK2(圖5A)，這與DNA損傷檢查點(diǎn)的缺陷***一致。與PTEN-WT細(xì)胞相比，PTEN-398細(xì)胞中磷酸化的AKT和磷酸化的p27Kip1水平更高(圖5B)。雖然p27Kip1與CDK2和CyclinE在照射過(guò)的PTEN-WT細(xì)胞中有效地共免疫沉淀，但在PTEN-398A細(xì)胞中這些相互作用減弱(圖5C,D)。與我們?cè)贛CF10A細(xì)胞中觀察到的結(jié)果一致，免疫印跡分析顯示PTEN398A/398A裂解物中磷酸化的AKT和磷酸化的p27Kip1水平更高;MMTVNeu**與Pten+/+;MMTVNeu對(duì)應(yīng)**進(jìn)行比較(圖5E-H)?？傊?，抑制ATM對(duì)PTEN的磷酸化增加了DNA損傷后AKT和p27Kip1的***，反過(guò)來(lái)有利于CDK2/CyclinE復(fù)合物的活性，并驅(qū)動(dòng)細(xì)胞周期進(jìn)程。
4、hnRNPA2B1在外泌體miR-934向巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用
據(jù)報(bào)道，外泌體RNA的分泌需要一種特定的RNA結(jié)合蛋白來(lái)轉(zhuǎn)運(yùn)。通過(guò)RNApull-down分析和質(zhì)譜分析，鑒定了三種可能參與miR-934轉(zhuǎn)運(yùn)的RNA結(jié)合蛋白，并發(fā)現(xiàn)敲除hnRNPA2B1可以降低外泌體miR-934的表達(dá)（Fig.4a,b）。hnRNPA2B1是一種RNA結(jié)合蛋白，通過(guò)與特定基序GGAG/CCCU結(jié)合，參與miRNAs的運(yùn)輸和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。特別是，由于miR-934序列中有兩個(gè)GGAG基序，我們推測(cè)hnRNPA2B1可能通過(guò)與GGAG序列結(jié)合，介導(dǎo)miR-934包裝成外泌體的過(guò)程。此外，miRNApull-down分析顯示，在細(xì)胞質(zhì)和外泌體中，miR-934和hnRNPA2B1之間存在***的結(jié)合關(guān)系，然而，突變miR-934的結(jié)合序列(GGAG)可削弱這種結(jié)合（Fig.4c）。RNA免疫沉淀分析進(jìn)一步證明，無(wú)論是在CRC細(xì)胞及其外泌體裂解物中，miR-934在anti-hnrnpa2b1抗體組中比在anti-IgG抗體組中更***富集（Fig.4d）。此外，敲除hnRNPA2B1可以抑制外泌體miR-934從HCT8和LoVo細(xì)胞轉(zhuǎn)移到巨噬細(xì)胞的過(guò)程（Fig.4e）。因此，這些結(jié)果證實(shí)hnRNPA2B1可以通過(guò)與miR-934的GGAG序列結(jié)合，介導(dǎo)miR-934包裝到CRC細(xì)胞外泌體中，并將外泌體miR-934轉(zhuǎn)移到巨噬細(xì)胞中。 英拜生物致力于分子生物行業(yè)十余年。
YTHDF1水平的降低導(dǎo)致MGC-803移植**的**進(jìn)展延遲(補(bǔ)充圖S2D和S2E)；與對(duì)照組相比，YTHDF1缺陷**的重量和體積***減少(圖2D)。因此，在YTHDF1缺陷**中，增殖標(biāo)記物Ki-67下調(diào)，凋亡標(biāo)記物cleavedcaspase-3上調(diào)(圖2E)。通過(guò)兩種轉(zhuǎn)移模型探討YTHDF1是否參與了胃*的體內(nèi)轉(zhuǎn)移。尾靜脈注射MGC-803-sicontrol細(xì)胞導(dǎo)致肺轉(zhuǎn)移，而注射MGC-803-siYTHDF1l細(xì)胞幾乎完全消除轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的形成。***建立了PDX模型，發(fā)現(xiàn)敲除YTHDF1抑制了**的生長(zhǎng)和重量。上述結(jié)果表明YTHDF1在胃*發(fā)生中起重要作用。使用motif和CHIP-seq預(yù)測(cè)影響基因簇表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子。星形膠質(zhì)細(xì)胞課題CRO
***ATM對(duì)PTEN的磷酸化增加了DNA損傷后AKT和p27Kip1的***。自噬課題實(shí)驗(yàn)外包
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7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過(guò)表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)