5）M1-Exos通過傳遞miR-155加重了EndoMT
為了研究外泌體miR-155在SCI后M1-Exos介導(dǎo)的BSCB破壞惡化中的作用，構(gòu)建miR-155過表達(miR-155OE)和敲低(miR-155KD)BMDMs，然后分離外泌體并處理bEnd.3細胞。如圖5A和B所示，miR-155OE-Exos組TEER值***降低，通透性***增加，而miR-155KD-Exos組則相反。加入miR-155OE-Exos后，ZO-1和Occludin的熒光強度明顯降低，而miR-155KD-Exos處理后，ZO-1和Occludin的表達***增強(圖5C和D)。此外，westernblot檢測TJs蛋白的表達，結(jié)果與上述討論的結(jié)果相似(圖5E)。miR-155OE-Exos可促進細胞形態(tài)轉(zhuǎn)化，其分支更少，體細胞更長。miR-155KD-Exos處理后的結(jié)果則相反(圖5F)。miR-155OE-Exos暴露后，I型膠原蛋白、III型膠原蛋白和α-SMA蛋白水平上調(diào)，CD31蛋白水平下調(diào)，而miR-155KD-Exos作用相反(圖5G)。以上結(jié)果表明，外泌體miR-155在促進bEnd.3細胞的EndoMT中起著至關(guān)重要的作用。 課題CRO服務(wù)找上海英拜。鐵死亡臨床醫(yī)學(xué)課題歡迎咨詢
老年病是指人在老年期所患的與衰老有關(guān)，并且有自身特點的疾病。老年人患病不僅比年輕人多，而且有其特點，主要是因為人進入老年期后，人體組織結(jié)構(gòu)進一步老化，各***功能逐步出現(xiàn)障礙，身體抵抗力逐步衰弱，活動能力降低，以及協(xié)同功能喪失。針對老年病的基因檢測，能有效判斷老年疾病的發(fā)生風(fēng)險，準確用以建立健康的個性化生活管理，達到及早預(yù)防、早***，延緩疾病發(fā)生的效果。英拜生物提供老年病風(fēng)險評估15項檢測：***、心房纖顫、心肌梗死等?；蛐酒?genechip)是目前生物芯片家族中完善、應(yīng)用*****的芯片，將許多特定的寡聚核苷酸或DN**段(稱為探針)固定在芯片的每個預(yù)先設(shè)置的區(qū)域內(nèi)，將待測樣本標記后同芯片進行雜交，利用堿基互補配對原理進行雜交，通過檢測雜交信號并進行計算機分析，從而檢測對應(yīng)片段是否存在、存在量的多少，以用于疾病的臨床診斷和檢測等眾多方面。運用縮微技術(shù)，基因芯片能夠同時分析成千上萬個生物樣本，將許多不連續(xù)的分析過程集成于玻璃介質(zhì)上，使這些分析過程連續(xù)化、微型化、集成化和自動化。內(nèi)蒙古課題贈送提供技術(shù)路線提供生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域內(nèi)的課題思路設(shè)計。
2）circPDE4B調(diào)節(jié)軟骨細胞活力和ECM代謝
為了評估circPDE4B在ECM代謝中的作用，我們分別用三種circPDE4BsiRNA轉(zhuǎn)染HCs(圖2A)。我們使用CCK-8方法評估了circPDE4B對軟骨細胞活力的影響。結(jié)果顯示，敲低circPDE4B的表達降低了軟骨細胞的活力(圖2B)。此外，shRNA腺病毒抑制circPDE4B***提高了MMP3、MMP13和ADAMTS4的表達，而SOX9、COL2A1(或COL2蛋白)和aggrecan在HCs/MCs中的表達下調(diào)(圖2C和圖2D)。免疫熒光進一步證實，circPDE4B敲除影響了HCs/MCs的MMP3、MMP13、COL2和aggrecan水平(圖2E、F)。同時，HCs的阿爾新藍染色顯示，circPDE4B抑制導(dǎo)致軟骨細胞功能障礙，蛋白多糖藍染較少(圖2G)。然后通過CCK-8實驗(圖2H)發(fā)現(xiàn)，過表達circPDE4B增加了軟骨細胞的活力。在過表達circPDE4B-HCs中，MMP3、MMP13和ADAMTS4的mRNA和蛋白水平下調(diào)，SOX9、COL2A1(或COL2蛋白)和aggrecan的mRNA和蛋白水平上調(diào)(圖2I-L)。此外，HCs的阿爾新藍染色表明，與單獨IL-1β***相比，circPDE4B過表達和IL-1β共處理減少了軟骨破壞(圖2M)。這些數(shù)據(jù)表明，circPDE4B/circPde4b在HCs中可以促進細胞活力，抑制分解代謝作用。
從各組小鼠中分離出外周血CD4+T細胞，結(jié)果顯示miR-208b-OE組中PDCD4的***下調(diào)，miR-208-KD組的結(jié)果則相反(圖7E和7F)。然而，在PDCD4mRNA水平上沒有觀察到差異(圖7G)。從血清中分離出外泌體，檢測miR-208b水平(圖7H)。如預(yù)期的，miR-208b在miR-208b-OE組中***升高，而miR-208b-KD組中miR-208b水平下降(圖7I)。這些結(jié)果表明，**分泌的miR-208b在體內(nèi)可以充分地傳遞到CD4+T細胞中，抑制PDCD4的表達。此外，這種現(xiàn)象在奧沙利鉑***組更加***(miR-208b-OE+OXA和miR-208b-KD+OXA)。也是***PDAC肝轉(zhuǎn)移的潛在靶點。
由于腸道微生物群在多囊卵巢綜合征的起始和發(fā)展中起著重要作用，作者還研究DHEA和tempol是否影響腸道的氧化還原狀態(tài)。腸道MDA、3-NT和AGEs水平在PCOS大鼠中***高于對照組和氧化生物標記的增加被tempol處理消除(圖3K-M)。此外，tempol***增加PCOS大鼠的腸道SOD1和SOD2表達(圖3N)。因此，這些結(jié)果表明tempol能夠降低PCOS大鼠的腸道氧化應(yīng)激。
4.Tempol減輕PCOS大鼠腸道微生物失調(diào)
隨后，通過rarefaction和Shannon曲線(Fig.4A-B)，以及4個α-多樣性指數(shù)(ACE)、Shannon、Simpson和Chao1來評估細菌群落的豐度和多樣性。當序列增加到2000時多個樣本稀疏曲線往往是平坦的，這表明測序數(shù)據(jù)的數(shù)量是合理的(圖4C-F)。在多個樣本Shannon曲線也觀察到類似的結(jié)果(圖4g)，表明大多數(shù)樣本多樣性被測序覆蓋。有趣的是，rarefaction和Shannon曲線以及4個α-多樣性指數(shù)的結(jié)果在不同組間沒有差異(圖4A-F)，這表明DHEA處理或tempol干預(yù)對腸道微生物群α-多樣性沒有明顯影響。 soRNA測序的 整套服務(wù)。重慶課題動物模型構(gòu)建
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APCmRNA上的METTL3依賴性m6A上調(diào)抑制APC表達
為了確定METTL3依賴的m6A調(diào)控對APC表達的影響，構(gòu)建了一個熒光素酶報告基因，熒光素酶分析顯示，METTL3缺失**增加了WTAPC的熒光素酶活性，而突變的APC提高了熒光素酶活性并使該活性抵抗METTL3缺失的調(diào)節(jié)。相反，METTL3過表達抑制了WT-APC的熒光素酶活性，但沒有突變的APC。這些結(jié)果表明METTL3介導(dǎo)的m6A水平的APCmRNA上調(diào)抑制了APC的表達。
與這一發(fā)現(xiàn)一致，METTL3缺失增加了APCmRNA和蛋白質(zhì)表達（，并且這些增加被KYSE450細胞中rMETTL3的重組表達所消除。此外，METTL3的過表達降低了KYSE450細胞中APC的表達，四環(huán)素劑量依賴性增加的METTL3表達水平與APC水平呈負相關(guān)。相反，METTL3非活性突變體與WT對應(yīng)物不同，未能調(diào)節(jié)APC表達。值得注意的是，ESCC細胞中的METTL14缺失消除了METTL3的過度表達降低了APC的表達。這些結(jié)果表明，在ESCC細胞中，METTL3與METTL14共同介導(dǎo)的APCmRNAm6A上調(diào)抑制了APCmRNA和蛋白的表達。 鐵死亡臨床醫(yī)學(xué)課題歡迎咨詢
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標書申請：提供標書課題設(shè)計、撰寫，標書部分基礎(chǔ)實驗的開展，設(shè)計的標書均符合科研前沿?zé)狳c，中標率很高。
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4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學(xué)實驗