LINC00926通過(guò)增強(qiáng)STUB1介導(dǎo)的泛素-蛋白酶體途徑調(diào)節(jié)PGK1蛋白的穩(wěn)定性亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示，LINC00926主要定位于細(xì)胞質(zhì)，F(xiàn)ISH實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了這一點(diǎn)(圖4A和4B)。結(jié)合LINC00926沒(méi)有改變PGK1mRNA水平的事實(shí)，我們推測(cè)LINC00926在轉(zhuǎn)錄后水平下調(diào)了PGK1的表達(dá)。事實(shí)上，蛋白酶體抑制劑MG132的加入阻斷了LINC00926過(guò)表達(dá)介導(dǎo)的PGK1降解，這表明泛素-蛋白酶體途徑參與了LINC00926對(duì)PGK1蛋白穩(wěn)定性的調(diào)節(jié)(圖4C)。LINC00926過(guò)表達(dá)增加PGK1泛素化(圖4D)。下調(diào)LINC00926基因后，PGK1蛋白水平升高，泛素化水平降低(圖4E)。為了尋找負(fù)責(zé)LINC00926調(diào)控PGK1蛋白穩(wěn)定性的E3泛素連接酶STUB1，我們接下來(lái)通過(guò)RNA下拉實(shí)驗(yàn)確定了LINC00926在乳腺*細(xì)胞中的蛋白伴侶。質(zhì)譜分析結(jié)果顯示了特異性差異表達(dá)譜帶。我們鑒定出了幾個(gè)可能與LINC00926相互作用的蛋白，包括兩個(gè)E3連接酶，STUB1和E6AP(圖4F)。免疫印跡進(jìn)一步證實(shí)，只有STUB1與LINC00926相互作用，而E6AP則沒(méi)有(圖4G)。此外，RIP分析也表明，PGK1和STUB1免疫沉淀中，LINC00926***富集(圖4H)。此外，LINC00926增強(qiáng)了STUB1介導(dǎo)的PGK1泛素化(圖4I)。敲低STUB1**減弱了LINC00926對(duì)PGK1泛素化的影響FMT處理可恢復(fù)SCI小鼠中糞便短鏈脂肪酸(SCFAs)。江西標(biāo)書(shū)實(shí)驗(yàn)可參觀
7）miR-155負(fù)調(diào)控SOCS6表達(dá)，***NF-κB通路
為了進(jìn)一步探討外泌體miR-155誘導(dǎo)EndoMT和線粒體功能障礙的潛在機(jī)制，我們重點(diǎn)研究了miR-155的下游基因。首先，利用在線miRNA靶標(biāo)數(shù)據(jù)庫(kù)預(yù)測(cè)了84個(gè)潛在靶基因。SOCS6是具有3’UTR的下游mRNA之一，可能與miR-155結(jié)合(圖7A)。結(jié)合GSE49329和GSE49330數(shù)據(jù)庫(kù)，我們發(fā)現(xiàn)miR-155的表達(dá)與SOCS6的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(圖7B)。為了進(jìn)一步證實(shí)SOCS63’UTR是miR-155的直接靶標(biāo)，我們根據(jù)預(yù)測(cè)的結(jié)合位點(diǎn)(圖7C)構(gòu)建了SOCS63’UTR野生型(WT)和突變型(MUT)序列。熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)顯示，與對(duì)照組相比，共轉(zhuǎn)染SOCS6的WT-3’UTR時(shí)，miR-155過(guò)表達(dá)明顯降低了熒光素酶活性(圖7D)。qRT-PCR和westernblot進(jìn)一步顯示，miR-155過(guò)表達(dá)導(dǎo)致SOCS6表達(dá)降低，而miR-155敲低上調(diào)SOCS6mRNA和蛋白水平(圖7E和F)。GO分析顯示miR-155可以負(fù)向調(diào)控細(xì)胞-細(xì)胞粘附，參與調(diào)控成纖維細(xì)胞增殖(圖7G)。從GO分析可知，miR-155可能介導(dǎo)NF-κB信號(hào)通路(圖7G)。過(guò)表達(dá)miR-155可***提高細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中p65蛋白的水平，而敲低miR-155可起到相反的作用(圖7H)。 湖北標(biāo)書(shū)動(dòng)物模型構(gòu)建注射circSDHC敲低*細(xì)胞的小鼠比對(duì)照組表現(xiàn)出更少的惡病質(zhì).
外泌體circ_0072083與膠質(zhì)瘤患者的TMZ耐藥、診斷和生存有關(guān)
為了分析外泌體 circ_0072083 在膠質(zhì)瘤患者中的價(jià)值，從患者的血清樣本中分離外泌體。通過(guò) TEM 和特定標(biāo)記物（CD63、CD81 和 TSG101）驗(yàn)證外泌體。此外，大小主要在100-200 nm，并且在耐藥患者中其濃度更高。此外，與TMZ敏感患者（n ?=33）相比，TMZ耐藥患者（n =36）的外泌體circ_0072083水平顯著上調(diào)。此外，通過(guò)將這些外泌體暴露于不同條件來(lái)評(píng)估外泌體 circ_0072083 的穩(wěn)定性，結(jié)果表明 TMZ 耐藥患者中外泌體 circ_0072083 的豐度不受不同孵育時(shí)間和不同 pH 值的顯著影響。此外，外泌體 circ_0072083 可以作為神經(jīng)膠質(zhì)瘤的**診斷靶標(biāo)（AUC= 0.85，P ?< 0.05），并且外泌體 circ_0072083 水平高的患者總生存率較低（P ?< 0.05）。?根據(jù)平均水平將患者分為高（n ?= 36）或低（n = 33）外泌體circ_0072083組。桌子表格11總結(jié)出高外泌體circ_0072083水平與膠質(zhì)瘤患者的**大小、晚期WHO分級(jí)、MGMT甲基化和TMZ抗性相關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)表明外泌體circ_0072083在神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者中具有重要作用。這表明外泌體circ_0072083可以通過(guò)在Warburg效應(yīng)下調(diào)節(jié)ALKBH5介導(dǎo)的去甲基化來(lái)調(diào)節(jié)miR-1252-5p/NANOG軸來(lái)增加膠質(zhì)瘤中的TMZ抗性。
miR-144在鼻咽*組織和細(xì)胞中上調(diào)
先前的文獻(xiàn)強(qiáng)調(diào)了miR-144在NPC發(fā)展過(guò)程中的促*作用。我們首先確定miR-144在NPC中的表達(dá)模式。采用qRT-PCR方法分析95例鼻咽*活檢標(biāo)本和95例慢性鼻咽炎鼻咽活檢標(biāo)本中miR-144的表達(dá)。結(jié)果表明，miR-144在鼻咽*組織中的表達(dá)水平高于在非*性鼻咽組織中的表達(dá)水平(圖1A)，并通過(guò)原位雜交(ISH)進(jìn)一步驗(yàn)證(圖1B)。如圖1C所示，相對(duì)于非*性鼻咽組織，鼻咽*組織中CD31的免疫組化染色增強(qiáng)。在鼻咽*組織中，CD31的表達(dá)與miR-144的表達(dá)呈正相關(guān)(圖1D)。隨后，我們通過(guò)qRT-PCR比較了人鼻咽*細(xì)胞系(C666-1和SUNE1)和鼻咽上皮細(xì)胞系NP69之間miR-144的表達(dá)水平。與預(yù)期的一樣，C666-1和SUNE1細(xì)胞表現(xiàn)出相對(duì)于NP69更高水平的miR-144表達(dá)(圖1E)。以上結(jié)果提示，miR144在鼻咽*組織和細(xì)胞中呈高表達(dá)，與CD31表達(dá)呈正相關(guān)，表明miR144與**血管生成具有潛在的相關(guān)性。 FMT處理可能促進(jìn)了創(chuàng)傷性脊髓損傷后神經(jīng)元的存活和軸突再生。
2）M1-BMDMs來(lái)源的外泌體加重了bEnd.3細(xì)胞的EndoMT
我們?cè)u(píng)估了M1-BMDMs對(duì)bEnd.3細(xì)胞的影響。結(jié)果表明，M1-BMDMs條件培養(yǎng)基(M1-CM)***降低了bEnd.3細(xì)胞TEER值(圖2A)，并增加通透性(圖2B)。此外，TJs蛋白熒光染色顯示，M1-CM處理***降低了bEnd.3細(xì)胞膜ZO-1和Occludin的表達(dá)(圖2C和D)。為了進(jìn)一步研究M1-BMDMs是否通過(guò)外泌體破壞血管內(nèi)皮細(xì)胞的TJs，我們使用外泌體分泌抑制劑GW4869預(yù)處理M1-BMDMs。我們發(fā)現(xiàn)，加入GW4869部分逆轉(zhuǎn)了M1-CM誘導(dǎo)的TEER值的下降(圖2A)，滲透率增加(圖2B)；GW4869也逆轉(zhuǎn)了TJs蛋白熒光強(qiáng)度下降的趨勢(shì)(圖2C和D)。相應(yīng)的，TJs蛋白表達(dá)水平也出現(xiàn)了類(lèi)似的結(jié)果(圖2E)。有趣的是，通過(guò)對(duì)脊髓切片中的α-SMA和CD31進(jìn)行共染色，我們發(fā)現(xiàn)損傷部位的共定位比未損傷部位更多(圖2F和G)。M1-CM***改變bEnd.3細(xì)胞形態(tài)，分枝減少，胞體拉長(zhǎng)(圖2H)。此外，M1-CM暴露***降低了CD31的表達(dá)，并強(qiáng)烈增強(qiáng)了EndoMT標(biāo)記物膠原I、III和α-SMA在bEnd.3細(xì)胞中的表達(dá)(圖2I)。然而，GW4869可以部分扭轉(zhuǎn)這些影響。綜上所述，外泌體可能介導(dǎo)巨噬細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞之間的相互作用，并可能是巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞EndoMT的原因。 SCI小鼠的握力在損傷后逐漸持續(xù)恢復(fù)。海南標(biāo)書(shū)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)
短鏈脂肪酸與運(yùn)動(dòng)恢復(fù)/腸屏障通透性的相關(guān)性。江西標(biāo)書(shū)實(shí)驗(yàn)可參觀
Il4ra缺陷小鼠的M2樣巨噬細(xì)胞減少和再生失調(diào)
為了探索再生過(guò)程中胰腺巨噬細(xì)胞的調(diào)節(jié)機(jī)制，我們進(jìn)行了基因集富集分析(GSEA)以比較第3天和第1天巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組譜。巨噬細(xì)胞的M2***和IL4刺激特征從第3天開(kāi)始富含巨噬細(xì)胞。我們發(fā)現(xiàn)，表達(dá)IL-4和IL-13分別提高在第1天，和表達(dá)Il4ra自第1天升高，達(dá)到峰值在第3天。為了進(jìn)一步確定受體和配體的細(xì)胞來(lái)源，在AP損傷后***從胰腺中分離并比較了CD45.2+和CD45.2-細(xì)胞，有趣的是，Il4ra1被顯性免疫細(xì)胞上表達(dá)（CD45.2+），而IL4和IL13中主要表達(dá)于實(shí)質(zhì)細(xì)胞（CD45.2-）。此外，通過(guò)使用Il4ra缺陷小鼠，我們證明了IL4Rα信號(hào)在AP損傷后胰腺修復(fù)/再生過(guò)程中介導(dǎo)了M2巨噬細(xì)胞的極化。值得注意的是，與它們的對(duì)應(yīng)物相比，來(lái)自Il4ra-/-小鼠的胰腺在第3天和第5天具有更多的ADM結(jié)構(gòu)。總的來(lái)說(shuō)，這些發(fā)現(xiàn)表明IL4/IL4Rα軸是AP恢復(fù)過(guò)程中胰腺巨噬細(xì)胞M2極化所必需的，發(fā)揮***功能來(lái)控制ADM形成的程度。 江西標(biāo)書(shū)實(shí)驗(yàn)可參觀
公司特色是以各式高通量二代測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過(guò)英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫(xiě)SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開(kāi)發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開(kāi)放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
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4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
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6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過(guò)表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)