MAD2和p31conmet調(diào)節(jié)SAC的持續(xù)時(shí)間，反過來，也調(diào)節(jié)有絲分裂的持續(xù)時(shí)間。這促使我們研究RIT1是否通過與MAD2和p31conmet的直接關(guān)聯(lián)來影響SAC。通過RNAi或crispr介導(dǎo)的敲除去除RIT1可延長有絲分裂進(jìn)程(圖3A和S3A S3E)。此外，SAC的藥理抑制挽救了RIT1耗盡的作用，表明RIT1以SAC依賴的方式影響有絲分裂。此外，RIT1的缺失增加了染色體分離錯(cuò)誤的發(fā)生率(圖3B)，這表明RIT1不僅對(duì)有絲分裂的及時(shí)進(jìn)展至關(guān)重要，而且RIT1蛋白水平的失調(diào)也破壞了正常的SAC功能。LZTR1或RIT1M90I表達(dá)的缺失加速了異步生長細(xì)胞的有絲分裂進(jìn)程，這一效應(yīng)依賴于PM釋放RIT1(圖3C、S3H和S3I)。同樣，RIT1 WT或M90I的過表達(dá)部分覆蓋了藥物誘導(dǎo)的SAC反應(yīng)(圖3D和S3J)。RIT1M90I的異位表達(dá)以依賴MAD2-和p31come結(jié)合的方式***增加了有絲分裂錯(cuò)誤的發(fā)生率，包括滯后染色體和橋接染色體(圖3G和S3O)。因此，我們觀察到在表達(dá)RIT1M90I的細(xì)胞中非整倍體率增加，但在表達(dá)不能結(jié)合MAD2/p31conmet的突變體的細(xì)胞中卻沒有(圖3H和S3P)。這些結(jié)果表明，RIT1水平的增加會(huì)導(dǎo)致與MAD2和p31conmet的直接相互作用，從而降低有絲分裂的保真度。醫(yī)學(xué)整體課題外包服務(wù)。動(dòng)物模型構(gòu)建服務(wù)
因?yàn)镃XCL13是一種趨化劑，可以促進(jìn)表達(dá)CXCR5的細(xì)胞趨化，使用IHC染色評(píng)估其在CRC中的表達(dá)，結(jié)果顯示CXCR-5在結(jié)直腸*組織中的染色強(qiáng)于正常組織，說明M2極化巨噬細(xì)胞分泌的CXCL13主要作用于CRC細(xì)胞（Fig. 7d）。PMA預(yù)處理后的THP-1細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-934 mimics，并與加入anti-CXCL13抗體或IgG的SW480細(xì)胞或RKO細(xì)胞共培養(yǎng)。此外，上述TPH-1細(xì)胞液與敲除CXCR5的細(xì)胞共培養(yǎng)。體外transwell實(shí)驗(yàn)顯示，在與miR-934過表達(dá)PMA處理的THP-1細(xì)胞的CM共培養(yǎng)組中，anti-CXCL13抗體抑制了CRC細(xì)胞的遷移和侵襲；轉(zhuǎn)染了shCXCR5的SW480和RKO細(xì)胞與miR-934過表達(dá)PMA處理的THP-1細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，遷移和侵襲能力降低（Fig. 7e, f）。此外，小鼠體內(nèi)肝轉(zhuǎn)移檢測表明，與對(duì)照組相比，用anti-CXCL13抗體或敲除CXCR5的CRC細(xì)胞的肝轉(zhuǎn)移菌落減少（Fig. 7g–i）?；|(zhì)蛋白酶動(dòng)物建模模型實(shí)驗(yàn)的整體服務(wù)。
RASA1的上調(diào)消除了外泌體miR-335-5p對(duì)CRC細(xì)胞遷移和侵襲的促進(jìn)作用
為了進(jìn)一步確定RASA1在CRC細(xì)胞中的潛在功能，使用慢病毒載體建立了過表達(dá)RASA1的穩(wěn)定SW480細(xì)胞系。如圖6A和6B所示，在用表達(dá)RASA1的慢病毒載體（lenti-RASA1；SW480-RASA1）轉(zhuǎn)染的SW480細(xì)胞中，實(shí)時(shí)PCR和蛋白質(zhì)印跡驗(yàn)證了RASA1mRNA和蛋白質(zhì)的過表達(dá)。在過表達(dá)RASA1的細(xì)胞中，Ras和波形蛋白的蛋白質(zhì)水平顯著下調(diào)，而E-鈣粘蛋白上調(diào)。此外，與SW480載體對(duì)照相比，SW480-RASA1的遷移和侵襲能力顯著降低
編碼PI3Kαp110α亞基的PIK3CA在多達(dá)40%的乳腺*中發(fā)生突變，**常見的是雌***受體陽性(ER+)**。突變的PIK3CA在校正ER陽性等有利風(fēng)險(xiǎn)變量時(shí)并不是預(yù)后的**標(biāo)記物，但它是改善晚期ER+乳腺*內(nèi)分泌和PI3K聯(lián)合***應(yīng)答的預(yù)測生物標(biāo)記物。有趣的是，與PTEN等其他PI3K通路改變的**相比，pikca突變ER+乳腺*顯示出極少的AKT***和對(duì)AKT信號(hào)的依賴。
NPP4B抑制AKT信號(hào)，并在三陰性(ER/PR/HER2)和基底樣乳腺*中表現(xiàn)出**抑制活性。此外，INPP4B蛋白在黑色素瘤、卵巢*和前列腺*中表達(dá)減少。在小鼠模型中，Inpp4b消融與Tp53/Brca1缺失共同增加了乳腺**外顯率，并與Pten雜合子缺失共同促進(jìn)體內(nèi)甲狀腺**的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。值得注意的是，INPP4B通過降解PI(3,4)P2，抑制早期核內(nèi)體的局部AKT2信號(hào)通路和EGFR降解。 按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)路線和實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行文章的構(gòu)思與潤色。
四、在體內(nèi)和體外，NUPs的上調(diào)導(dǎo)致TDP-43/TBPH定位錯(cuò)誤和聚集
為了檢測Nup上調(diào)對(duì)Tbph (Drosophila TDP-43)病理的影響，我們建立了一個(gè)位點(diǎn)特異性Nup62過表達(dá)(Nup62 OE)蠅線，并對(duì)內(nèi)源性Tbph進(jìn)行染色。在eGFP對(duì)照(以下稱為對(duì)照)表達(dá)的果蠅幼蟲VNC中，Tbph的分布以細(xì)胞核為主，而Nup62 OE幼蟲VNC***改變了Tbph的定位，出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)聚集(圖4A)。定量分析顯示，與對(duì)照組相比，Nup62 OE果蠅幼蟲或成年大腦中斑點(diǎn)Tbph***增加(圖4B）。與對(duì)照組相比，Nup62 OE vnc的核Tbph強(qiáng)度***降低(圖4C)。此外，核細(xì)胞質(zhì)(N/C)分割進(jìn)一步證實(shí)，與對(duì)照組相比，Nup62 OE動(dòng)物的Tbph N/C比值***降低(圖4D和E)，表明Nup62的上調(diào)改變了Tbph在體內(nèi)的亞細(xì)胞定位。Nup62表達(dá)引起的Tbph的錯(cuò)位和聚集也讓我們檢測了Nup62表達(dá)是否影響Tbph的溶解度。 進(jìn)一步了解阻斷atm依賴的PTEN磷酸化如何影響細(xì)胞對(duì)基因毒性損傷的反應(yīng)。修復(fù)甲基化
TIMEOR是***個(gè)基于 Web 的自適應(yīng)時(shí)間序列多組學(xué)管道方法。動(dòng)物模型構(gòu)建服務(wù)
6）DRD2通過下調(diào)DDX5和eEF1A2來抑制NF-κB通路的***和**的發(fā)生
DRD2異位表達(dá)***抑制了p65和NF-κB靶基因IL-10的mRNA表達(dá)(圖6A)，表明在沒有配體***的情況下，DRD2是NF-κB通路的負(fù)調(diào)控因子。除了結(jié)合***β-arrestin2外，DRD2還可能通過其他方式抑制NF-κB信號(hào)通路。采用Co-IP法分離可能的結(jié)合蛋白，并采用質(zhì)譜法進(jìn)行蛋白鑒定。MDA-MB231和BT549細(xì)胞的所有結(jié)合蛋白中，DDX5、eEF1A2和ICAM-1均被異位表達(dá)的DRD2下調(diào)(圖6B-C)。根據(jù)以往的研究，DDX5和eEF1A2是幾種**中的兩種致*基因。WB也證實(shí)了DDX5和eEF1A2蛋白水平下調(diào)(圖6D)。在293T和MDA-MB231中，通過Co-IP和IB實(shí)驗(yàn)證實(shí)了DRD2、DDX5和eEF1A2的結(jié)合(圖6E)，表明這三種蛋白形成了一個(gè)復(fù)合物。根據(jù)以往的研究，DDX5可以結(jié)合p50，并協(xié)助IκB釋放p50。本研究還揭示了293T和MDA-MB231中DDX5與p50的結(jié)合(圖6E)。 動(dòng)物模型構(gòu)建服務(wù)
公司特色是以各式高通量二代測序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請(qǐng)：提供標(biāo)書課題設(shè)計(jì)、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的開展，設(shè)計(jì)的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c(diǎn)，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點(diǎn)**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c(diǎn)研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)