三、在體內(nèi)，tbi介導的NCT缺陷和致死率被核輸出抑制劑抑制
為了確定TBI是否會損害體內(nèi)的核質(zhì)運輸，我們在果蠅運動神經(jīng)元中過表達了一個帶有核定位序列(NLS)和核輸出序列(NES)標記的GFP蛋白(OK371-gal4)。在表達nlsnes -GFP的大腦中，GFP信號分布在細胞核和細胞質(zhì)中(圖3A)。然而，定量分析顯示，在nls - nes -GFP表達的vnc暴露于TBI中，核GFP信號減少的細胞百分比***增加，而核GFP強度***降低(圖3B和C)，說明GFP核進口受到抑制和/或GFP核出口增加。接下來，我們在運動神經(jīng)元中表達了一種用NLS和突變的NES (ΔNES)標記的沒有核輸出活性的GFP蛋白。表達NLS的非創(chuàng)傷性腦損傷動物的腦細胞-ΔNES-GFP顯示了GFP在細胞核的強大定位(圖3A)，而創(chuàng)傷性腦損傷動物的vnc顯示了核GFP減少的細胞數(shù)量***增加，核GFP強度降低((圖3B和C)。果蠅幼蟲暴露于TBI，并在DMSO單獨、KPT-350(0.05、0.1或0.5 mM)或KPT-276(50、200或1000 nM)上飼養(yǎng)。對經(jīng)歷過TBI的果蠅幼蟲的羽化試驗顯示，KPT-350處理的動物(圖3D)或KPT-276處理的動物(圖3E)具有***的劑量依賴性的致死抑制。kpt -350處理的果蠅核GFP信號***高于dmso處理的對照組(圖3G）。 circNDUFB2未***改變IGF2BPs的mRNA水平。HE染色標書上海
2）下調(diào)MIR210HG可抑制子宮內(nèi)膜*細胞的增殖、遷移和侵襲
我們研究了MIR210HG在子宮內(nèi)膜*細胞中的生物學功能。我們發(fā)現(xiàn)MIR210HG的下調(diào)有效地降低了Ishikawa和HEC-1A細胞的增殖(圖2A和2B)。采用創(chuàng)面愈合實驗和Transwell實驗研究MIR210HG對**遷移和侵襲的影響。與sh陰性對照組(NC)相比，轉(zhuǎn)染sh-MIR210HG的細胞遷移和侵襲減少(圖2C和2D)。流式細胞術(shù)分析細胞周期分布(圖2E)。以上結(jié)果提示MIR210HG在子宮內(nèi)膜*中起致*基因的作用。
3）MIR210HG可能參與了由lncRNA-miRNA-mRNA調(diào)控網(wǎng)絡介導的子宮內(nèi)膜惡性生物學行為
利用TCGA數(shù)據(jù)集對子宮內(nèi)膜*樣本進行基因**富集分析，探索MIR210HG參與調(diào)控子宮內(nèi)膜*的生物學通路。MIR210HG的表達與TGF-b和Wnt通路***相關(guān)，而Smad3基因在這些關(guān)聯(lián)中發(fā)揮了重要作用(圖3A)。搜索工具STRING的分析也顯示SMAD3和HMGA2是強相關(guān)的(圖3B)。我們探究HMGA2是否為MIR210HG的下游基因，發(fā)現(xiàn)MIR210HG下調(diào)后HMGA2蛋白表達水平降低。相反，當MIR210HG高表達時，HMGA2的表達***增加(圖3C)。這表明MIR210HG可能通過上調(diào)HMGA2的表達來促進子宮內(nèi)膜*細胞的惡性生物學行為。 chip標書深圳水蘇糖可減少卵巢囊泡數(shù)量黃體形成.
TFAP2B也有類似的模式，它調(diào)節(jié)遠端腎單位的發(fā)育30。TFAP2B轉(zhuǎn)錄因子活性在粗升肢和遠端曲小管中增加(圖3b,motif活性)，TFAP2B染色質(zhì)可及性增加(圖3b，基因活性)，TFAP2B轉(zhuǎn)錄增加(圖3b，基因表達)。我們對遠曲小管(DCT)、連接小管(CNT)和主細胞(PC)進行了偽時間排序，這些細胞在snRNA和snATAC數(shù)據(jù)集中都形成了一組不同的轉(zhuǎn)錄相關(guān)細胞類型。在HNF4A中，觀察到近曲小管中有一個CCAN，在啟動子、基因體和遠端區(qū)域的差異開放區(qū)域(圖3c，紅框)之間有多個連接(紅色或藍色弧線)(圖3c)。
分化通常與T細胞接收的免疫信號有關(guān):共刺激或細胞因子信號支持一種或另一種命運。然而，環(huán)境的代謝組成、檢測該環(huán)境的營養(yǎng)傳感器以及T細胞固有的代謝狀態(tài)也對決定分化的**終結(jié)果至關(guān)重要。代謝信號是理解的關(guān)鍵，因為T細胞的***和分化發(fā)生在各種代謝不同的組織環(huán)境。在**中，**細胞代謝的升高可以***改變T細胞所經(jīng)歷的營養(yǎng)環(huán)境。我們之前的研究表明，T細胞浸潤**時存在嚴重的代謝缺陷:葡萄糖攝取能力受到抑制，功能性線粒體質(zhì)量喪失，伴隨衰竭的發(fā)展。我們和其他人也表明，糾正這種錯誤的代謝狀態(tài)(通過各種方法)可以增強免疫功能，實現(xiàn)免疫***效果。免疫組織學染色顯示TNFαIL-1β和NF- κ b陽性染色主要分布在結(jié)腸黏膜層。
七、急性腎損傷和慢性腎臟疾病患者PT_VCAM1的比例升高
對小鼠缺血再灌注損傷(IRI)實驗中獲得的大量RNA-seq進行反卷積，以確定PT_VCAM1的比例是否與急性腎損傷有關(guān)。BisqueRNA使用基于scRNA-seq參考的反褶積方法從整體RNA-seq中估算細胞類型的豐度。PT_VCAM1估計比例在iri后24h***增加，并持續(xù)至少7天;與正常近端小管細胞比例下降相對應(圖7a)。有趣的是，未手術(shù)控制小鼠腎臟中PT_VCAM1的估計比例在老齡小鼠中增加(圖7b)。用BisqueRNA對非**腎樣本進行反卷積，估計PT_VCAM1細胞的比例為2.6%(圖7d)，這與我們的snRNA-seq和snatc-seq估計一致。接下來，我們分析了來自2型糖尿病患者腎臟活檢的大量RNA-seq。與對照組和早期糖尿病腎病患者相比，晚期糖尿病腎病患者PT_VCAM1的比例明顯更高(圖7e)，提示PT_VCAM1和小管損傷可能與糖尿病腎病的疾病進展有關(guān)。從小鼠IRI到人類的細胞類型標記轉(zhuǎn)移表明，大部分PT_VCAM1與我們**近在小鼠中發(fā)現(xiàn)的修復失敗的近端小管細胞(FR-PTC)群體有關(guān)(圖7c)。 circSDHC來源于第1染色體上的SDHC基因.SNP檢測標書省自然科學基金
腸道微生物群和循環(huán)代謝產(chǎn)物之間的聯(lián)系.HE染色標書上海
7、CFL1/PLD1軸介導低氧誘導的HCC細胞中AKT途徑的***之前的一項研究表明，PLD1***AKT及其下游mTOR通路促進HCC細胞增殖、侵襲。與此一致，作者觀察到CFL1敲除降低了p-AKT水平，在HCCLM3細胞中通過PLD1恢復增強了p-AKT水平（圖7A，C）。此外，PLD1沉默逆轉(zhuǎn)了CFL1誘導的Hep3B細胞中AKT信號轉(zhuǎn)導通路的活化（圖7B，D）。值得注意的是，CFL1或PLD1敲除抑制了肝*細胞中缺氧誘導的AKT通路***和EMT過程（圖7E，F(xiàn)）。之后，進行拯救實驗探討HIF-1α-CFL1-PLD1軸中PLD1的功能。在HCCLM3細胞中過表達的PLD1可以逆轉(zhuǎn)低氧條件下CFL1-shRNA引起的對AKT磷酸化或EMT過程的抑制（圖7G，H）?？偟膩碚f，證實CFL1/PLD1軸在缺氧誘導的HCC進展中起重要作用。
總之，該研究表明HCC中過表達CFL1與較差的臨床病理學參數(shù)呈正相關(guān)。體外和體內(nèi)實驗證實CFL1是HCC**生長和轉(zhuǎn)移的驅(qū)動因素。PDL1/AKT通路介導CFL1的致*功能。此外，CFL1是一個缺氧反應基因，通過***PLD1/AKT信號轉(zhuǎn)導參與缺氧誘導的HCC進展（圖8）。綜上所述，該研究表明CFL1是低氧微環(huán)境與HCC進展之間的一種新的連接體。 HE染色標書上海
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