7.EVs介導(dǎo)的ELNAT1被HLECs內(nèi)化以誘導(dǎo)淋巴管生成
共聚焦顯微鏡顯示HLECs中PKH67標(biāo)記EVs孵育后的點(diǎn)狀熒光強(qiáng)度（Figure7A），表明HLECs內(nèi)化了BCa分泌的EVs。此外,孵化UM-UC-3-EVELNAT1***上調(diào)HLECs中ELNAT1表達(dá),而孵化T24-EVsi-ELNAT1，則T24細(xì)胞分泌的EVs中ELNAT1表達(dá)下調(diào)，則削弱了HLECs中EVs誘導(dǎo)ELNAT1過表達(dá)的能力（Figure7B,C）。
為了排除淋巴血管生成是由內(nèi)源性ELNAT1***HLECs中誘導(dǎo)的可能性，構(gòu)建了ELNAT1-KO HLECS ELNAT1（HLECsELNAT1-KO）模型（Figure 7 D, E）。與HLECsELNAT1-WT一致，我們觀察到，EVs介導(dǎo)的ELNAT1過表達(dá)增強(qiáng)了HLECsELNAT1-KO的管狀形成和遷移能力，而下調(diào)ELNAT1則抑制了BCa細(xì)胞分泌EVs誘導(dǎo)HLECsELNAT1-KO管狀形成和遷移的能力（Figure 7 F-H）。這表明BCa細(xì)胞分泌的EVs通過運(yùn)輸EVs介導(dǎo)的ELNAT1促進(jìn)淋巴管生成，而不是轉(zhuǎn)錄***內(nèi)源性的ELNAT1。綜上所述，這些結(jié)果表明EVs介導(dǎo)的ELNAT1被HLECs內(nèi)化誘導(dǎo)BCa淋巴管生成。 英拜提供一年三節(jié)的購(gòu)物卡津貼。單細(xì)胞相關(guān)課題科研細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
Nup62表達(dá)引起的Tbph的錯(cuò)位和聚集也讓我們檢測(cè)了Nup62表達(dá)是否影響Tbph的溶解度。Nup62 OE或?qū)φ展壌竽X的可溶性-不可溶性分選顯示，與對(duì)照相比，Nup62在運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中表達(dá)的上調(diào)***增加了不溶性，從而改變了Tbph的可溶性(圖4F和G)，表明Nup62水平是Tbph溶解度的重要決定因素。qPCR證實(shí)了Nup62的過表達(dá)(圖4H)。NUP62與內(nèi)源性TDP-43共聚合(圖4I)。與單獨(dú)mRuby相比，NUP62在HEK293T細(xì)胞中的表達(dá)導(dǎo)致TDP-43的溶解性***改變(圖4J和K）。檢測(cè)了nup62介導(dǎo)的TDP-43聚集物在HEK293T細(xì)胞中是否被磷酸化。內(nèi)源性與NUP62-mRuby共定位的TDP-43聚集體被磷酸化(圖4L)。西藏科研歡迎咨詢巨噬細(xì)胞表型協(xié)調(diào)急性胰腺炎損傷后的炎癥和修復(fù)再生。
6、外泌體miR-138-5p促進(jìn)乳腺*肺轉(zhuǎn)移
極化的巨噬細(xì)胞在決定**細(xì)胞的表型中起著重要的作用。因此，探究M2巨噬細(xì)胞外泌體miR-138-5p處理是否有助于乳腺*小鼠異**模型的**轉(zhuǎn)移。使用氯膦酸鈉***小鼠巨噬細(xì)胞，然后轉(zhuǎn)移使用過表達(dá)miR-138-5p的T47D或T47D細(xì)胞來源的外泌體處理的Raw264.7細(xì)胞。小鼠模型通過尾靜脈注射4T1-熒光素酶細(xì)胞構(gòu)建（圖6A）。結(jié)果顯示，外泌體miR-138-5p處理組***促進(jìn)小鼠體內(nèi)乳腺*細(xì)胞的**體積和肺轉(zhuǎn)移，同時(shí)增加了CD206和Arg-1陽性細(xì)胞數(shù)（圖6B-E）。這些結(jié)果表明外泌體miR-138-5p誘導(dǎo)的M2巨噬細(xì)胞促進(jìn)乳腺*的肺轉(zhuǎn)移。
在皂苷處理的MCF-7細(xì)胞中，觀察到內(nèi)源性INPP4B與HARab7WT或HA-Rab7Q67L共同定位于cd63陽性的晚期核內(nèi)體(圖3e)。HA-Rab7T22N是一個(gè)不定位于晚期核內(nèi)體的顯性陰性突變體(補(bǔ)充圖3f)，它的表達(dá)也阻止了內(nèi)源性INPP4B的募集(圖3e)，表明活性的gtp結(jié)合的Rab7是INPP4B亞細(xì)胞定位到晚期核內(nèi)體所必需的。 GFP-INPP4B***提高了細(xì)胞內(nèi)PI(3)P水平(1.8倍)(圖3f)，PI(3,4)P2也存在于早期和晚期核內(nèi)體。表達(dá)INPP4B shrna的MCF-7細(xì)胞顯示出更明顯的細(xì)胞內(nèi)PI(3,4)P2斑點(diǎn)，表明INPP4B缺失抑制PI(3,4)P2在核內(nèi)體上的降解，導(dǎo)致其積累(圖3g)。GFP-INPP4B沒有改變PI(3) p陽性早期核內(nèi)體的比例，但***增加了PI(3) p陽性晚期核內(nèi)體的比例(1.7倍)(圖3h, i)。英拜專注高通量測(cè)序行業(yè)的整體服務(wù)。
然而，在單細(xì)胞方法中，尚未出現(xiàn)一種適用于所有三種模式的統(tǒng)一方法，這種方法可以應(yīng)用于高度特定的功能免疫細(xì)胞類型。我們系統(tǒng)地測(cè)試了PBMCs的全細(xì)胞和核純化和制備方法，以克服以往的分析只限于測(cè)量細(xì)胞表面的核成分(ATAC和核rna)或蛋白質(zhì)的局限性。我們發(fā)現(xiàn)完整的透性細(xì)胞的scATAC-seq表現(xiàn)非常好，在某些測(cè)量中超過了傳統(tǒng)的細(xì)胞核scATAC-seq(圖1b)。這一發(fā)現(xiàn)使得一種類似于轉(zhuǎn)錄組和表位的細(xì)胞索引(CITE-seq)的新方案能夠測(cè)量表面蛋白豐度和染色質(zhì)可及性:染色質(zhì)景觀和表位的整合細(xì)胞索引(ICICLE-seq，圖1a和3)。***，我們證明了我們優(yōu)化的可滲透細(xì)胞方法可以與基于液滴的多組學(xué)平臺(tái)相結(jié)合，從而能夠同時(shí)測(cè)量細(xì)胞的三個(gè)不同的分子隔間:mRNA(通過scRNA-seq)，蛋白質(zhì)(使用寡聚標(biāo)記抗體)和DNA(通過scATAC-seq)，我們根據(jù)轉(zhuǎn)錄、表位和可及性將其稱為TEA-seq(圖4)?？傊?，對(duì)單細(xì)胞水平上基因調(diào)控和表達(dá)的分子基礎(chǔ)有了新的、更統(tǒng)一的看法。英拜提供分子生物學(xué)以及免疫病理相關(guān)實(shí)驗(yàn)。生物相關(guān)科研地區(qū)科學(xué)基金
上海英拜生物有經(jīng)驗(yàn)豐富的科研團(tuán)隊(duì)。單細(xì)胞相關(guān)課題科研細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
7）USP35敲除增強(qiáng)肺*細(xì)胞的化療敏感性
鑒于USP35在肺*細(xì)胞中的高表達(dá)及其在調(diào)節(jié)鐵死亡中的作用，我們**終評(píng)估了USP35沉默是否能使肺*細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感。如圖9A-C所示，USP35缺乏的H460和H1299細(xì)胞在體外對(duì)DDP和PTX的毒性作用更敏感，細(xì)胞活力和定殖的降低證明了這一點(diǎn)。相應(yīng)地，接種USP35缺陷*細(xì)胞的荷瘤小鼠經(jīng)DDP或PTX***后**體積和重量均減少(圖9D，E)。酪氨酸激酶抑制劑(TKI)已成為常規(guī)化療的替代藥物，并為肺*患者提供了***的生存益處。然后，我們?cè)贖460和H1299細(xì)胞中測(cè)量了USP35敲除和TKI之間的協(xié)同效應(yīng)，數(shù)據(jù)表明USP35沉默在體內(nèi)和體外使H460和H1299細(xì)胞對(duì)GFB化療敏感(圖9F-H)。 單細(xì)胞相關(guān)課題科研細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
公司特色是以各式高通量二代測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
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4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)