還檢測到β-肌動蛋白***升高，與免疫沉淀的HuR蛋白結(jié)合。接下來研究HuR-β-actin介導(dǎo)的調(diào)節(jié)機制是否參與OPC的遷移調(diào)節(jié)。β-actin的mRNA和蛋白表達以及細胞遷移能力在HuR基因過表達的細胞中***增加， HuR基因敲低細胞中降低。β-肌動蛋白的mRNA和蛋白表達在lnc-PMIF過表達細胞中***下調(diào)，但在lnc-PMIF基因敲除細胞中***上調(diào)，表明lnc-PMIF能抑制OPCs中β-actin的表達，基因過表達/敲除lnc-PMIF不改變HuR的蛋白表達。在前述lnc-PMIF敲低細胞中敲低HuR基因，細胞中β-actin的mRNA和蛋白表達***下調(diào)，細胞遷移能力也受到損害，這些數(shù)據(jù)表明lnc-PMIF可與HuR相互作用，抑制β-actin的表達來抑制OPC遷移。英拜提供生物醫(yī)學(xué)課題外包服務(wù)。凋亡課題檢測服務(wù)
表達PTENWT的細胞，在雙胸苷激酶阻斷和輻射釋放后被阻滯在S期，表現(xiàn)出低水平的CDK2磷酸化(圖5A)。相反，經(jīng)過相同處理的PTEN-398A細胞有更高水平的磷酸化CDK2(圖5A)，這與DNA損傷檢查點的缺陷***一致。與PTEN-WT細胞相比，PTEN-398細胞中磷酸化的AKT和磷酸化的p27Kip1水平更高(圖5B)。雖然p27Kip1與CDK2和CyclinE在照射過的PTEN-WT細胞中有效地共免疫沉淀，但在PTEN-398A細胞中這些相互作用減弱(圖5C,D)。與我們在MCF10A細胞中觀察到的結(jié)果一致，免疫印跡分析顯示PTEN398A/398A裂解物中磷酸化的AKT和磷酸化的p27Kip1水平更高;MMTVNeu**與Pten+/+;MMTVNeu對應(yīng)**進行比較(圖5E-H)?？傊?**ATM對PTEN的磷酸化增加了DNA損傷后AKT和p27Kip1的***，反過來有利于CDK2/CyclinE復(fù)合物的活性，并驅(qū)動細胞周期進程。五、阻斷atm依賴的磷酸化會損害DNA損傷后PTEN的亞細胞再分配研究了磷脂酰肌醇3,4,5磷酸(PIP3)在DNA損傷后的細胞定位。將MCF10A細胞按上述方法同步輻照，免疫熒光法分析PTEN的亞細胞分布。PTEN-WT和PTEN-398A蛋白在細胞核和質(zhì)膜穩(wěn)定定位(圖6A,B)。經(jīng)過IR處理后，PTEN-WT在質(zhì)膜上積累(圖6A,B)。相比之下，在這些條件下，沒有檢測到PTEN-398A蛋白的重新定位(圖6A,B)。肝脂肪變性課題基礎(chǔ)實驗外包使用motif和CHIP-seq預(yù)測影響基因簇表達的轉(zhuǎn)錄因子。
作者構(gòu)建了 (WT) SLC7A113’-UTR和突變型(Mut) 3’-UTR兩種質(zhì)粒(圖6H)。結(jié)果表明，只有過表達YTHDC2WT降低SLC7A11 mRNA在H1299細胞中的穩(wěn)定性，敲除YTHDC2可以提高SLC7A11 mRNA在H1975細胞中的穩(wěn)定性。然而，與WT 3’-UTR相比，Mut報告基因的這些作用減弱(圖6I和J)。在檢測外源性F-Luc-SLC7A11融合mRNA的RNA穩(wěn)定性后，得到了類似的結(jié)果(圖6K-M)?？偟膩碚f，3’-UTR上的m6A位點對于YTHDC2使SLC7A11 mRNA不穩(wěn)定至關(guān)重要。
7.抑制YTHDC2對XC-系統(tǒng)靶向***敏感，并與LUAD進展相關(guān)
為了評估YTHDC2抑制在LUAD中的重要性，從cohort#1隨機抽取20例YTHDC2lowLUAD，其中50%屬于腺泡型(圖7A)。在cohort#2中，與相鄰組織相比，**中YTHDC2表達下調(diào)，62%(62/100)的腺泡組織被歸類為YTHDC2low(圖7B、C)。與無這種表達模式的腺泡性LUAD患者相比，YTHDC2low的患者總生存期要短得多(圖7D)，進一步表明YTHDC2抑制可能對腺泡性LUAD的**進展尤為重要。另外，相對于*旁組織，**中腺泡LUAD組織中SLC7A11mRNA和蛋白水平表達量都比較高(圖7E、F)。
為了進一步探索Pex調(diào)控HSC行為的機制，我們比較了Pex和Npex組間的HSC的RNA測序基因表達譜(圖3A)。在差異表達基因中，我們觀察到41個重疊的上調(diào)基因在Pan02 exo組與Npex組和KPC exo組與Npex組之間存在部分交集(圖3B)。主要涉及的基因參與細胞外空間、細胞外區(qū)域和ECM(圖3C)，表明Pex調(diào)節(jié)HSC的ECM分泌。此外，GO和KEGG通路分析顯示，IGF-1及其下游PI3K/AKT是受Pex影響的排名比較高的信號通路(圖3D，E)。western blot分析支持了Pex***增加HSC中IGF- 1R、IRS-1和AKT磷酸化的發(fā)現(xiàn)(圖3F)。當(dāng)使用IGF-1R抑制劑時，Pex誘導(dǎo)的p-IGF-1R、p-IRS-1和p- AKT的上調(diào)被阻斷(圖3G)。基于這些結(jié)果，我們推測IGF-1信號可能是介導(dǎo)Pex依賴的HSC活化的關(guān)鍵因素。與預(yù)期的一樣，IGF-1R抑制劑***了Pex誘導(dǎo)的HSC的活化、增殖和遷移(圖4A-D)。此外，IGF-1R抑制劑逆轉(zhuǎn)了Pex誘導(dǎo)的HSC中ECM的產(chǎn)生(圖4E)。我們的體內(nèi)實驗表明，IGF-1R抑制劑可以阻斷Pex誘導(dǎo)的肝纖維化(圖4F-I)。這些數(shù)據(jù)表明IGF-1信號在Pex誘導(dǎo)的肝纖維化中起重要作用。外泌體CD44v6和C1QBP可能是預(yù)測PDAC患者預(yù)后的有前途的生物標(biāo)志物。
Il4ra缺陷小鼠的M2樣巨噬細胞減少和再生失調(diào)
為了探索再生過程中胰腺巨噬細胞的調(diào)節(jié)機制，我們進行了基因集富集分析(GSEA)以比較第3天和第1天巨噬細胞的轉(zhuǎn)錄組譜。巨噬細胞的M2***和IL4刺激特征從第3天開始富含巨噬細胞。我們發(fā)現(xiàn)，表達IL-4和IL-13分別提高在第1天，和表達Il4ra自第1天升高，達到峰值在第3天。為了進一步確定受體和配體的細胞來源，在AP損傷后***從胰腺中分離并比較了CD45.2+和CD45.2-細胞，有趣的是，Il4ra1被顯性免疫細胞上表達（CD45.2+），而IL4和IL13中主要表達于實質(zhì)細胞（CD45.2-）。此外，通過使用Il4ra缺陷小鼠，我們證明了IL4Rα信號在AP損傷后胰腺修復(fù)/再生過程中介導(dǎo)了M2巨噬細胞的極化。值得注意的是，與它們的對應(yīng)物相比，來自Il4ra-/-小鼠的胰腺在第3天和第5天具有更多的ADM結(jié)構(gòu)?？偟膩碚f，這些發(fā)現(xiàn)表明IL4/IL4Rα軸是AP恢復(fù)過程中胰腺巨噬細胞M2極化所必需的，發(fā)揮***功能來控制ADM形成的程度。 高通量測序后續(xù)的機制實驗。蛋白組學(xué)課題代發(fā)服務(wù)
提供生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域內(nèi)的課題思路設(shè)計。凋亡課題檢測服務(wù)
我們發(fā)現(xiàn)，在circMAPK1穩(wěn)定下調(diào)的SGC7901和MGC803細胞中，與對照組相比，MAPK1-109aa與MEK1的結(jié)合明顯減少，而MAPK1與MEK1的結(jié)合增加(圖7f)。在MKN45和BGC823細胞中，IRES突變時MAPK1-109aa不翻譯。因此，MAPK1與MEK1的結(jié)合沒有明顯變化。然而，過表達circMAPK1后，MAPK1與MEK1的結(jié)合***減少，而MAPK1-109aa與MEK1的結(jié)合***增加(圖7g)。因此，以上結(jié)果表明MAPK1-109aa與MAPK1競爭結(jié)合MEK1。隨后的Western blot結(jié)果也證實，在過表達circMAPK1的細胞系中，MAPK1-109aa***升高，磷酸化的MAPK1/2降低，而在circMAPK1敲低的細胞中則相反(圖7h)。此外，MAPK1的下游效應(yīng)因子，如p-ELK1、p-c-Fos、p-c-JUN和p-RSK，也被過表達的circMAPK1***抑制(圖7i)。這些結(jié)果表明，circMAPK1編碼的MAPK1-109aa通過抑制MAPK1信號通路發(fā)揮抑*作用。凋亡課題檢測服務(wù)
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請：提供標(biāo)書課題設(shè)計、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實驗的開展，設(shè)計的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點**文獻技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學(xué)實驗