7）FOXO3A/LINC00926/PGK1軸調(diào)節(jié)乳腺***生長(zhǎng)和肺轉(zhuǎn)移
為了證實(shí)FOXO3A/LINC00926/PGK1通路的體內(nèi)表型，我們首先通過將MDA-MB-231細(xì)胞注射到BALB/c小鼠的乳腺脂肪墊上，研究了LINC00926/PGK1軸對(duì)乳腺*生長(zhǎng)的影響。與預(yù)期的一樣，下調(diào)LINC00926***增加了乳腺**的生長(zhǎng)。相反，當(dāng)PGK1被敲除時(shí)，**生長(zhǎng)被抑制。更重要的是，當(dāng)PGK1被敲除時(shí)，LINC00926敲除對(duì)**生長(zhǎng)的影響***減弱(圖7A-7C)。接下來，我們研究了FOXO3A/LINC00926軸對(duì)乳腺*生長(zhǎng)的影響。結(jié)果顯示FOXO3A過表達(dá)***降低了乳腺*的生長(zhǎng)。當(dāng)LINC00926敲低時(shí)，**生長(zhǎng)增加，F(xiàn)OXO3A過表達(dá)對(duì)**生長(zhǎng)的影響***減弱(圖7D-7F)。接下來，我們研究了該途徑對(duì)乳腺*轉(zhuǎn)移的影響。與對(duì)照組相比，LINC00926基因抑制組在整個(gè)肺區(qū)域擴(kuò)散的結(jié)節(jié)數(shù)量明顯增加(圖7G)。相反，PGK1基因敲低導(dǎo)致乳腺*細(xì)胞向肺轉(zhuǎn)移擴(kuò)散的減少。然而，PGK1下調(diào)極大地減弱了下調(diào)LINC00926調(diào)節(jié)肺轉(zhuǎn)移的能力(圖7G)。與**生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，下調(diào)LINC00926***減弱了FOXO3A調(diào)控肺轉(zhuǎn)移的能力(圖7H)。 ATM對(duì)PTEN的磷酸化導(dǎo)致PTEN在質(zhì)膜上重新分布。炎癥課題服務(wù)兩年
關(guān)聯(lián)研究已將血液來源的microRNA(miRNA)的改變與結(jié)直腸*(CRC)聯(lián)系起來。miRNA譜可能在CRC進(jìn)展過程中多樣化，并在血液中反映CRC進(jìn)展水平。但是，尚無研究評(píng)估不同CRC階段血液中miRNA的變化。本研究對(duì)來自不同階段的健康供體、結(jié)直腸腺瘤、結(jié)直腸憩室炎和CRC患者（UICCstagesI/II,III,andIV）的80份血液樣本中的2,549種miRNA的譜進(jìn)行了基于微陣列的比較。
接下來通過RT-PCR進(jìn)行確認(rèn)，并對(duì)另外 36 份血液樣本中miRNA進(jìn)行驗(yàn)證。與健康對(duì)照相比，有 179 個(gè) CRC 相關(guān) miRNA 的豐度差異。只有三個(gè)（miR-1225-5p、miR-1207-5p 和 miR-4459）在所有 CRC 階段表現(xiàn)出增加的水平。
對(duì)3個(gè)miRNA進(jìn)行通路分析，發(fā)現(xiàn)了miRNAs 以各種方式對(duì)幾種**相關(guān)通路起作用。
這項(xiàng)研究為改進(jìn) CRC 篩查的生物標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)提供了線索，是***項(xiàng)提供 CRC 血液表達(dá)譜的研究，******評(píng)估了不同 CRC不同階段血液中 miRNA 的變化。 這也為其他疾病biomarker的研究提供了新的思路。 醫(yī)學(xué)相關(guān)課題動(dòng)物模型構(gòu)建Pex衍生的CD44v6/C1QBP復(fù)合物介導(dǎo)了Pex對(duì)肝纖維化和PDAC肝轉(zhuǎn)移的積極作用。
IGF2BP結(jié)合區(qū)域包含“GGAC”N6-甲基腺苷（m6A）**基序。IGF2BPs是m6A結(jié)合蛋白。為了探索circRNA和IGF2BP之間的相互作用是否通過m6A依賴性的方式進(jìn)行調(diào)節(jié)，對(duì)circNDUFB2進(jìn)行了MeRIP，并觀察到circNDUFB2中m6A的顯著富集。敲低METTL3和METTL14顯著降低了circNDUFB2中m6A修飾的水平，并且沒有改變circNDUFB2的水平。METTL3/14敲低顯著削弱了circNDUFB2和IGF2BP之間的相互作用。這些數(shù)據(jù)表明，circNDUFB2以依賴于m6A的方式與三個(gè)IGF2BP物理相互作用。circNDUFB2過表后IGF2BPs的mRNA無***變化，蛋白質(zhì)水平***降低。此外，circNDUFB2突變體不影響IGF2BPs的蛋白質(zhì)水平。因此推測(cè)circNDUFB2可能通過相互作用使IGF2BP蛋白失穩(wěn)。發(fā)現(xiàn)circNDUFB2的過度表達(dá)***降低了IGF2BP蛋白的水平，這可以通過MG132（蛋白酶抑制劑）恢復(fù)。circNDUFB2***增加了IGF2BPs的泛素化水平，但這種作用因其突變而受損。這些結(jié)果表明circNDUFB2通過促進(jìn)泛素/蛋白酶體依賴性降解降低IGF2BPs的穩(wěn)定性。
9.阻斷SUMOylation抑制EVs介導(dǎo)的ELNAT1誘導(dǎo)的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移
用si-NC或si-UBC9#1轉(zhuǎn)染的對(duì)照或ELNAT1過表達(dá)UM-UC-3細(xì)胞分泌的EVs處理HLECs，結(jié)果顯示過表達(dá)ELNAT1***促進(jìn)了體外BCa細(xì)胞分泌的EVs誘導(dǎo)淋巴血管生成，而沉默UBC9逆轉(zhuǎn)了這一作用（Figure9A-C）。IVIS證明UM-UC-3-EVELNAT1增強(qiáng)了體內(nèi)腘窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，而沉默UBC9抑制了這種作用（Figure9D,E）。UM-UC-3-EVELNAT1+siUBC9#1組的腘窩LNs體積比UM-UC-3-EVELNAT1組?。‵igure9F）。與UM-UC-3-EVVector組相比，UM-UC-3-EVELNAT1增加了小鼠足底**的淋巴管數(shù)量，而下調(diào)UBC9的表達(dá)導(dǎo)致EVs介導(dǎo)的ELNAT1誘導(dǎo)的淋巴管數(shù)量逐漸減少（Figure9G,H）。此外，UM-UC-3-EVELNAT1+si-UBC9#1組的LN生成時(shí)間長(zhǎng)于UM-UC-3-EVELNAT1組（Figure9I）。綜上所述，這些結(jié)果表明UBC9誘導(dǎo)的SUMOylation抑制EVs介導(dǎo)的ELNAT1誘導(dǎo)的BCa淋巴管生成和LN轉(zhuǎn)移。 我們使用抗體陣列評(píng)估了表達(dá)PTEN- wt或PTEN- 398a的MCF10A細(xì)胞裂解液的應(yīng)激反應(yīng)和凋亡通路的活性。
二、YTHDF1缺乏可抑制胃*進(jìn)展和轉(zhuǎn)移
YTHDF1在不同胃*細(xì)胞株中的蛋白表達(dá)水平，遠(yuǎn)高于正常胃腺細(xì)胞GES-1。為了進(jìn)一步探討YTHDF1在胃*中的作用，采用了胃*細(xì)胞系、細(xì)胞系來源的異種移植(CDX)和PDX模型(圖2A)。首先，通過產(chǎn)生兩種穩(wěn)定的shRNA表達(dá)人胃*細(xì)胞株MGC-803和HGC-27，研究了YTHDF1的抑制作用，這兩種細(xì)胞株在所有被檢測(cè)的胃*細(xì)胞株中YTHDF1的表達(dá)相對(duì)較高(補(bǔ)充圖S2B)。YTHDF1基因敲除確實(shí)降低了胃*細(xì)胞的增殖(圖2B)。此外，在MGC-803和HGC-27細(xì)胞中YTHDF1敲除降低細(xì)胞的遷移和侵襲能力(圖2C)。隨后通過皮下注射YTHDF1敲除的MGC-803細(xì)胞到免疫缺陷裸鼠，研究YTHDF1的抑制是否會(huì)影響體內(nèi)胃*的發(fā)生。 小鼠正常胰腺(Npex)和小鼠PDAC細(xì)胞分離的外泌體呈現(xiàn)典型的外泌體結(jié)構(gòu)。服務(wù)課題推薦咨詢
有肝轉(zhuǎn)移的PDAC患者外泌體CD44v6和C1QBP的表達(dá)明顯高于無肝轉(zhuǎn)移的PDAC患者。炎癥課題服務(wù)兩年
3、CRC細(xì)胞來源的外泌體miR-934誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞M2極化
為了探索miR-934促進(jìn)CRLM的分子和細(xì)胞基礎(chǔ)，通過Cytoscape軟件注釋了TCGAcohort中191個(gè)miR-934相關(guān)基因的細(xì)胞功能，發(fā)現(xiàn)miR-934***參與多種炎癥反應(yīng)，提示miR-934可能參與了CRC免疫微環(huán)境（Fig.3a）。然后發(fā)現(xiàn)miR-934與巨噬細(xì)胞的基因信號(hào)特異性相關(guān)（Fig.3b）。為了研究在CRLM中TAM的浸潤(rùn)與miR-934之間的相關(guān)性，我們?cè)谠l(fā)性結(jié)直腸*組織和CRLM組織樣本中采用免疫組化染色檢測(cè)TAM標(biāo)記CD163。如圖3c所示，在CRLM組織中CD163+TAM浸潤(rùn)豐富的區(qū)域觀察到miR-934表達(dá)升高。將THP-1細(xì)胞與PMA孵育，誘導(dǎo)分化為M0巨噬細(xì)胞，M0巨噬細(xì)胞具有適當(dāng)?shù)馁N壁形態(tài)和巨噬細(xì)胞標(biāo)志物CD68的高表達(dá)（Fig.3d）。接下來，研究了CRC細(xì)胞來源的外泌體對(duì)巨噬細(xì)胞M2極化的影響。如Fig.3e所示，當(dāng)與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，標(biāo)記有DiO(綠色)的CRC細(xì)胞來源的外泌體被未染色的巨噬細(xì)胞內(nèi)化。相比于低表達(dá)miR-934的細(xì)胞的外泌體孵育的巨噬細(xì)胞或PBS孵育的細(xì)胞，M2標(biāo)記物(CD206,arginase-1,IL10和CD163)的表達(dá)在高表達(dá)miR-934的CRC細(xì)胞的外泌體孵育的巨噬細(xì)胞中***增加，而M1標(biāo)記物(iNOS和IL-1β)幾乎無差異（Fig.3f,g）。 炎癥課題服務(wù)兩年
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1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請(qǐng)：提供標(biāo)書課題設(shè)計(jì)、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的開展，設(shè)計(jì)的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c(diǎn)，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點(diǎn)**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c(diǎn)研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)