4）miR-337-3p/miR-137在子宮內(nèi)膜*組織中表達(dá)較低，miR-337-3p/miR-137是MIR210HG的靶點(diǎn)
qPCR結(jié)果顯示，**組織中miR-337-3p和miR-137的表達(dá)明顯下調(diào)(圖4A)。此外，采用Pearson等級相關(guān)法分析miR-337-3p、miR-137與MIR210HG表達(dá)的相關(guān)性(圖4B)。隨后，我們分析了HMGA2與miR-337-3p/137表達(dá)的關(guān)系(圖4C)。我們進(jìn)行了熒光素酶實(shí)驗(yàn)，以確定MIR210HG是否可以直接靶向miR-337-3p和miR-137在預(yù)測的結(jié)合位點(diǎn)(圖4D)。為了確定MIR210HG是否與miRNA核糖**白復(fù)合物結(jié)合，我們使用抗AGO2抗體進(jìn)行RIP實(shí)驗(yàn)。與對照免疫球蛋白G免疫沉淀相比，lncRNAMIR210HG和miR-337-3p/miR-137在含AGO2的免疫沉淀中***富集(圖4E)。當(dāng)MIR210HG在Ishikawa和HEC-1A細(xì)胞中過表達(dá)時(shí)，miR-337-3p和miR-137表達(dá)水平降低。相比之下，轉(zhuǎn)染sh-MIR210HG后，細(xì)胞中miR-337-3p和miR-137的表達(dá)水平***升高，說明MIR210HG可以調(diào)控miR-337-3p和miR-137的表達(dá)(圖4F)。隨后，我們研究了miR-337-3p和miR-137是否負(fù)調(diào)控MIR210HG的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)過表達(dá)miR-337-3p/137會(huì)下調(diào)MIR210HG的表達(dá)，而敲除miR-337-3p/137會(huì)上調(diào)MIR210HG的表達(dá)(圖4G)。 促*分泌體通過外泌體傳遞和運(yùn)輸是轉(zhuǎn)移前微環(huán)境形成和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵。醫(yī)學(xué)科研課題分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)
YTHDC2調(diào)節(jié)SLC7A11 mRNA的穩(wěn)定性(圖5A-D)，而控制RNA衰減是m6A甲基化的重要功能之一。作者先驗(yàn)證METTL3刺激m6A的能力(圖5E、F)。在H1975細(xì)胞中敲降METTL3延長了SLC7A11 mRNA的半衰期，而在H1299細(xì)胞中過表達(dá)METTL3則加速了SLC7A11 mRNA的降解(圖5G)。此外，H1299細(xì)胞中降低METTL3表達(dá)阻斷了YTHDC2，從而減緩SLC7A11 mRNA的衰減，刺激胱氨酸攝取并減弱脂質(zhì)活性氧(ROS)的生成(圖5H-J)，這表明YTHDC2在LUAD細(xì)胞中的作用是依賴m6A。
6.YTHDC2傾向于相互作用并使m6A甲基化的SLC7A11mRNA不穩(wěn)定
為了揭示SLC7A11mRNA中潛在的m6A甲基化位點(diǎn)，在H1975細(xì)胞中METTL3敲除前后分別進(jìn)行了MeRIP-seq研究。在H1975細(xì)胞中，無論是否敲除METTL3,GGACmotif都高度富集于m6A位點(diǎn)(圖6A)。m6A峰在mRNA停止密碼子附近的3’非翻譯區(qū)(3’UTR)尤為豐富(圖6B)。為了進(jìn)一步證實(shí)SLC7A11mRNA的m6A依賴性修飾，我們進(jìn)行MeRIP-qPCR。在H1975細(xì)胞中，敲除METTL3后，SLC7A11mRNA中的m6A修飾明顯減少，特別是在假定的m6A位點(diǎn)周圍。相反，當(dāng)METTL3在H1299細(xì)胞中過表達(dá)時(shí)，觀察到相反的結(jié)果(圖6C)。 課題詢問報(bào)價(jià)TIMEOR是***個(gè)基于 Web 的自適應(yīng)時(shí)間序列多組學(xué)管道方法。
3、hUC-MSCs在體外增加MRL/lpr小鼠脾CD4+T細(xì)胞的衰老通過Sirt1
在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的同時(shí)，在體外測定了hUC-MSCs對T細(xì)胞衰老的影響。MRL/lpr小鼠脾CD4+T細(xì)胞與hUC-MSCs以不同比例(CD4+T細(xì)胞:MSCs:1:1、10:1、50:1)共培養(yǎng)48h。結(jié)果發(fā)現(xiàn)hUC-MSCs呈劑量依賴性方式***上調(diào)p21和p16的水平，但下調(diào)Sirt1的水平(圖3A-C)。此外，細(xì)胞衰老的調(diào)節(jié)并不依賴于細(xì)胞與細(xì)胞之間的接觸，用transwell系統(tǒng)分離培養(yǎng)的CD4+T細(xì)胞和MSCs時(shí)也發(fā)現(xiàn)了類似的結(jié)果(圖3D-F)。這些數(shù)據(jù)表明，可溶性因子介導(dǎo)了hUC-MSCs對MRL/lpr小鼠脾CD4+T細(xì)胞衰老的調(diào)節(jié)作用。
細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4和6(CDK4/6)的藥理學(xué)抑制劑是***受體陽性乳腺*的獲批***藥物，目前正在其他**類型的數(shù)百項(xiàng)臨床試驗(yàn)中進(jìn)行評價(jià)。這些抑制劑的臨床成功在很大程度上歸因于定義明確的**內(nèi)在細(xì)胞抑制機(jī)制，而其作為免疫調(diào)節(jié)劑的新作用知之甚少。本研究利用整合的表觀基因組、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)分析，證明了CDK4/6抑制劑在促進(jìn)免疫T細(xì)胞記憶的表型和功能獲得中的新作用。本文的機(jī)制見解拓寬了CDK4/6抑制劑作為增強(qiáng)抗**T細(xì)胞免疫的臨床工具的前瞻性效用。本研究于2021年5月14日發(fā)表在《Cancer Discovery》IF:29.497期刊上。外泌體CD44v6和C1QBP可能是預(yù)測PDAC患者預(yù)后的有前途的生物標(biāo)志物。
Pearson相關(guān)分析表明circACTN4的水平與BC組織中FUBP1的表達(dá)呈正相關(guān)。此外，MYC在BC組織中高表達(dá)，并與 FUBP1的表達(dá)呈正相關(guān)。為了確認(rèn)ACTN4在BC中的生物學(xué)功能，構(gòu)建了ACTN4過表達(dá)和干擾質(zhì)粒，為了探究 circACTN4 的作用與 ACTN4 無關(guān)，進(jìn)行了共轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明 ACTN4 敲低不影響促進(jìn)作用circACTN4 對 MYC 轉(zhuǎn)錄的過度表達(dá)，ACTN4 的上調(diào)并沒有逆轉(zhuǎn) qRT-PCR 和蛋白質(zhì)印跡對 circACTN4 敲低對 MYC 表達(dá)的抑制作用。WB結(jié)果表明circACTN4可以促進(jìn)MYC及其下游蛋白CDK4和CCND2的表達(dá)。這些數(shù)據(jù)表明 circACTN4 可以與 FUBP1 結(jié)合并促進(jìn) MYC 的表達(dá)。英拜生物對整體實(shí)驗(yàn)實(shí)施的全局把控。臨床醫(yī)學(xué)課題免費(fèi)設(shè)計(jì)
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研究了磷脂酰肌醇3,4,5磷酸(PIP3)在DNA損傷后的細(xì)胞定位。將MCF10A細(xì)胞按上述方法同步輻照，免疫熒光法分析PTEN的亞細(xì)胞分布。PTEN-WT和PTEN-398A蛋白在細(xì)胞核和質(zhì)膜穩(wěn)定定位(圖6A, B)。經(jīng)過IR處理后，PTEN-WT在質(zhì)膜上積累(圖6A, B)。相比之下，在這些條件下，沒有檢測到PTEN-398A蛋白的重新定位(圖6A, B)。B).我們通過細(xì)胞分離和膜相關(guān)PTEN的免疫印跡分析進(jìn)一步證實(shí)了這些結(jié)果(圖6C, D)。這些結(jié)果表明，ATM對PTEN的磷酸化導(dǎo)致PTEN在質(zhì)膜上重新分布，這與AKT通路***減少有關(guān)醫(yī)學(xué)科研課題分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)
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