由于circMAPK1在GC細胞系中穩(wěn)定表達，我們推測circMAPK1可能是一種適合GC診斷或預(yù)后的標志物。qRT-PCR顯示circMAPK1在*組織中的表達低于匹配的非*組織(圖1m)。Kaplan-Meier生存分析顯示胃*組織中circMAPK1水平較高的患者總生存期***延長(圖1n)。綜上所述，circMAPK1是一種穩(wěn)定表達的circRNA，可作為有效的診斷和預(yù)后標志物，值得進一步研究。
2）CircMAPK1在體外抑制GC細胞的增殖和遷移
為了研究circMAPK1在GC中的生物學功能，我們進行了一系列細胞實驗。隨CCK8實驗(圖2a)、集落形成實驗(圖2b)和EdU實驗(圖2c)結(jié)果表明，沉默circMAPK1可***增強GC細胞的增殖能力。我們發(fā)現(xiàn)circMAPK1的減少增加了S期GC細胞的數(shù)量(圖2d)。Transwell(圖2e)試驗顯示circMAPK1的干擾促進了GC細胞的遷移。此外，過表達circMAPK1***削弱了GC細胞的增殖能力。同樣，過表達circMAPK1時，S期GC細胞的數(shù)量***減少，細胞遷移受到抑制。綜上所述，circMAPK1在GC細胞的增殖和遷移中起著重要作用。 可以推斷基因調(diào)控事件之間的關(guān)系。國自然課題科技檢測
五、NF-κB調(diào)節(jié)表達VCAM1的近端小管亞群的分子特征
檢測了一組近端小管細胞，VCAM1的表達和染色質(zhì)可及性增加，我們將其命名為PT_VCAM1(圖1)。免疫熒光研究表明，VCAM1在近端小管上皮中呈散在分布的表達(圖5a)。我們的單細胞研究估計PT_VCAM1占總細胞數(shù)的2%，近端小管上皮細胞數(shù)的6%。我們還證實，在LTL+ PT細胞中，VCAM1+小管細胞占4.19 1.58%，而在腎皮質(zhì)的UMOD+ TAL細胞中，VCAM1+細胞未被檢測到(圖5b)。雖然之前的研究表明VCAM1在亨利氏襻(dTL)的降肢表達，但我們*通過AQP1對腎臟切片進行鏈紋檢測，觀察到VCAM1在dTL的一個亞組表達(圖5c)。這些數(shù)據(jù)表明，VCAM1+小管細胞大部分位于皮質(zhì)內(nèi)近端小管內(nèi)。與VCAM1+ PT細胞相比，有少數(shù)dTL小管表達VCAM1。免疫熒光分析確定了一個VCAM1+近端小管細胞亞群表達CD24或CD133(圖5d)。 肝脂肪變性課題CRO我們接下來研究了Pex對HSCs生物學行為的影響。
分化通常與T細胞接收的免疫信號有關(guān):共刺激或細胞因子信號支持一種或另一種命運。然而，環(huán)境的代謝組成、檢測該環(huán)境的營養(yǎng)傳感器以及T細胞固有的代謝狀態(tài)也對決定分化的**終結(jié)果至關(guān)重要。代謝信號是理解的關(guān)鍵，因為T細胞的***和分化發(fā)生在各種代謝不同的組織環(huán)境。在**中，**細胞代謝的升高可以***改變T細胞所經(jīng)歷的營養(yǎng)環(huán)境。我們之前的研究表明，T細胞浸潤**時存在嚴重的代謝缺陷:葡萄糖攝取能力受到抑制，功能性線粒體質(zhì)量喪失，伴隨衰竭的發(fā)展。我們和其他人也表明，糾正這種錯誤的代謝狀態(tài)(通過各種方法)可以增強免疫功能，實現(xiàn)免疫***效果。
1、在響應(yīng)CDK4/6抑制中瘤內(nèi)記憶類CD8+T細胞的表現(xiàn)
為了***評價CDK4/6抑制對抗**T細胞免疫的影響，使用多模式單細胞測序(CITE-seq)分析了CDK4/6抑制劑palbociclib或?qū)φ仗幚淼腗C38-OVA**小鼠的瘤內(nèi)T細胞群體(Fig.1A)。維度分析顯示MC38-OVA**中有10個不同的T細胞群(Fig.1B)。用CDK4/6i處理的**有較低頻率的CD4+調(diào)節(jié)性T細胞(Foxp3+Tregs)，而CD8+記憶類T細胞頻率更高，以Tcf7、Sell、Bcl2和Cd7高表達為特征(Fig.1B-D)。CD8+T細胞池的基因動態(tài)表達揭示來源于CDK4/6i處理的小鼠的CD8+**免疫浸潤（TILs）向更早、更像干細胞的分化狀態(tài)傾斜(Fig.1E-F)。與此一致，較早出現(xiàn)假時間軌跡的細胞表達更高水平的記憶相關(guān)基因(Tcf7,Sell,Il7r)，和更低水平的效應(yīng)相關(guān)基因(Prf1,Gzmb)和耗損標志物(PD-1,TIM3)(Fig.1G)。 TRF測序課題整體服務(wù)。
miR-144在鼻咽*細胞釋放的EVs中高度富集
接下來，為了確定**分泌的miR-144是否具有通過EVs細胞外通信影響**-微環(huán)境串擾的能力，我們首先從C666-1、SUNE1和NP69細胞中分離EVs。透射電子顯微鏡(TEM)觀察發(fā)現(xiàn)，納米顆粒的直徑為30~100nm，每個囊泡呈杯狀(圖2A)。免疫印跡顯示，與相應(yīng)的細胞裂解液相比，這些來自C666-1、SUNE1和NP69細胞的納米顆粒中存在常見的EVs特異性標記物，包括CD9、CD63和TSG101，而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜蛋白calnexin明顯缺失(圖2B)。納米顆粒示蹤分析(NTA)進一步顯示EV的平均直徑為94.1nm(C666-1細胞)、90.5nm(SUNE1細胞)和68.5nm(NP69細胞)(圖2C)。此外，我們檢測了C666-1、SUNE1和NP69細胞衍生EVs的表面電荷(圖2D)。添加RNase對這三種細胞系的EVs中miR-144的表達沒有影響，而TritonX-100處理的細胞中miR-144的表達明顯降低，說明細胞膜對miR-144的表達具有保護作用(圖2E)。結(jié)果表明，這三種細胞系的EVs具有穩(wěn)定的膜態(tài)，對RNA具有保護作用。通過qRT-PCR檢測EVs中miR-144的表達，結(jié)果顯示miR-144在鼻咽*細胞EVs中表達高水平(圖2F)。這些發(fā)現(xiàn)為miR-144在npc細胞來源的ev中上調(diào)提供了證據(jù)。 解決了對確定因果調(diào)節(jié)機制網(wǎng)絡(luò)的方法的關(guān)鍵需求。CRO課題分子生物學
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從各組小鼠中分離出外周血CD4+T細胞，結(jié)果顯示miR-208b-OE組中PDCD4的***下調(diào)，miR-208-KD組的結(jié)果則相反(圖7E和7F)。然而，在PDCD4mRNA水平上沒有觀察到差異(圖7G)。從血清中分離出外泌體，檢測miR-208b水平(圖7H)。如預(yù)期的，miR-208b在miR-208b-OE組中***升高，而miR-208b-KD組中miR-208b水平下降(圖7I)。這些結(jié)果表明，**分泌的miR-208b在體內(nèi)可以充分地傳遞到CD4+T細胞中，抑制PDCD4的表達。此外，這種現(xiàn)象在奧沙利鉑***組更加***(miR-208b-OE+OXA和miR-208b-KD+OXA)。國自然課題科技檢測
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5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
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7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗