7、CFL1/PLD1軸介導低氧誘導的HCC細胞中AKT途徑的***之前的一項研究表明，PLD1***AKT及其下游mTOR通路促進HCC細胞增殖、侵襲。與此一致，作者觀察到CFL1敲除降低了p-AKT水平，在HCCLM3細胞中通過PLD1恢復增強了p-AKT水平（圖7A，C）。此外，PLD1沉默逆轉(zhuǎn)了CFL1誘導的Hep3B細胞中AKT信號轉(zhuǎn)導通路的活化（圖7B，D）。值得注意的是，CFL1或PLD1敲除抑制了肝*細胞中缺氧誘導的AKT通路***和EMT過程（圖7E，F(xiàn)）。之后，進行拯救實驗探討HIF-1α-CFL1-PLD1軸中PLD1的功能。在HCCLM3細胞中過表達的PLD1可以逆轉(zhuǎn)低氧條件下CFL1-shRNA引起的對AKT磷酸化或EMT過程的抑制（圖7G，H）。總的來說，證實CFL1/PLD1軸在缺氧誘導的HCC進展中起重要作用。
總之，該研究表明HCC中過表達CFL1與較差的臨床病理學參數(shù)呈正相關。體外和體內(nèi)實驗證實CFL1是HCC**生長和轉(zhuǎn)移的驅(qū)動因素。PDL1/AKT通路介導CFL1的致*功能。此外，CFL1是一個缺氧反應基因，通過***PLD1/AKT信號轉(zhuǎn)導參與缺氧誘導的HCC進展（圖8）。綜上所述，該研究表明CFL1是低氧微環(huán)境與HCC進展之間的一種新的連接體。 生命科學領域內(nèi)的精細研究。浙江課題技術(shù)指導
5）M1-Exos通過傳遞miR-155加重了EndoMT
為了研究外泌體miR-155在SCI后M1-Exos介導的BSCB破壞惡化中的作用，構(gòu)建miR-155過表達(miR-155OE)和敲低(miR-155KD)BMDMs，然后分離外泌體并處理bEnd.3細胞。如圖5A和B所示，miR-155OE-Exos組TEER值***降低，通透性***增加，而miR-155KD-Exos組則相反。加入miR-155OE-Exos后，ZO-1和Occludin的熒光強度明顯降低，而miR-155KD-Exos處理后，ZO-1和Occludin的表達***增強(圖5C和D)。此外，westernblot檢測TJs蛋白的表達，結(jié)果與上述討論的結(jié)果相似(圖5E)。miR-155OE-Exos可促進細胞形態(tài)轉(zhuǎn)化，其分支更少，體細胞更長。miR-155KD-Exos處理后的結(jié)果則相反(圖5F)。miR-155OE-Exos暴露后，I型膠原蛋白、III型膠原蛋白和α-SMA蛋白水平上調(diào)，CD31蛋白水平下調(diào)，而miR-155KD-Exos作用相反(圖5G)。以上結(jié)果表明，外泌體miR-155在促進bEnd.3細胞的EndoMT中起著至關重要的作用。 河北課題創(chuàng)新服務也是***PDAC肝轉(zhuǎn)移的潛在靶點。
蛋白質(zhì)生物標志物
MarkerDB中142個蛋白質(zhì)生物標志物覆蓋了160多種疾病。MarkerDB中的所有蛋白質(zhì)生物標記物數(shù)據(jù)都是從OncoMX、CBD和UPBD原始文獻中提取的，結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)從蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫PDB收集。目前，MarkerDB中的所有蛋白質(zhì)標記都有一個或多個疾病關聯(lián)，以及MarkerDB ID、序列、結(jié)構(gòu)、詳細的蛋白質(zhì)描述、蛋白質(zhì)名稱/同義詞、蛋白質(zhì)理化數(shù)據(jù)、疾病濃度、正常濃度、性別、年齡范圍，生物流體、一個或多個文獻參考和其他在線數(shù)據(jù)庫的外部超鏈接。
2、CFL1的高表達與HCC的不良預后相關單變量分析顯示，**大小、**數(shù)量、TNM分期、靜脈浸潤、HBV***和CFL1水平與HCC患者的總體生存率***相關（表2）。多變量分析顯示，***大小、**數(shù)量、靜脈浸潤和CFL1水平是HCC總體生存率的**預后指標（表2）。并且，可以看出CFL1的高表達與HCC的不良預后相關。
3、CFL1促進HCC的增殖，遷移和侵襲如圖2所示，在高表達CFL1的HCCLM3和MHCC97h細胞中，敲除CFL1(圖2A)。隨后實驗發(fā)現(xiàn)敲除CFL1后HCCLM3和MHCC97h細胞的增殖，遷移和侵襲能力被抑制，表明CFL1促進HCC的增殖，遷移和侵襲。
使用motif和CHIP-seq預測影響基因簇表達的轉(zhuǎn)錄因子。
此外，GFP-INPP4B的表達在基礎和wnt刺激條件下降低了GSK3β蛋白水平，與GSK3β的增強破壞一致(圖6d)。通過Hrs shRNA消耗抑制晚期核內(nèi)體形成后，降低的GSK3β蛋白水平得以恢復(圖6f, g)。GFP-INPP4B而不是gfp載體細胞表現(xiàn)出明顯的GSK3β蛋白酶保護，這與GSK3β向晚期核內(nèi)體轉(zhuǎn)運的增強相一致(圖6h)。免疫熒光證實了這一點，在GFP-INPP4B中觀察到RFP-GSK3與LysoTracker共定位，這是一種積累在晚期核內(nèi)體/溶酶體中的染料，而不是gfp載體細胞(圖6i)。
我們比較了Pex和Npex組間的HSC的RNA測序基因表達譜。河北課題創(chuàng)新服務
TRF測序課題整體服務。浙江課題技術(shù)指導
4、CLF1敲除抑制小鼠HCC的生長和肺部轉(zhuǎn)移隨后，作者在體內(nèi)進一步驗證CLF1的功能。結(jié)果如圖3所以，敲除CFL1后***降低了HCC細胞的**體積和**，并減少了肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量。IHC表明CLF1的敲除也導致EMT相關蛋白的抑制?？傊珻LF1敲除抑制小鼠HCC的生長和肺部轉(zhuǎn)移。
5、CFL1是HIF-1α在HCC細胞中的下游靶基因為了闡明低氧對HCC中CFL1表達的影響，將HCCLM3和Hep3B細胞在低氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。結(jié)果發(fā)現(xiàn)低氧誘導導致CFL1的表達升高，但是當HIF-1α敲除后，低氧誘導并不能提高CFL1的表達，并且使用HIF-1α的抑制劑處理HCCLM3和Hep3B細胞，也能降低因低氧誘導導致CFL1表達升高（圖4A-F）。ChIP-PCR檢測進一步發(fā)現(xiàn)，HIF-1α和HIF-1β與HCC細胞CFL1啟動子中的HRE直接結(jié)合（圖4G）。在低氧條件下，轉(zhuǎn)染HRE熒光素酶質(zhì)?；駽FL1啟動子-熒光素酶質(zhì)粒的HEK293T細胞中熒光素酶報告基因活性升高（圖4H）。 浙江課題技術(shù)指導
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