高通量測(cè)序技術(shù)全基因組測(cè)序（WGS）：通過比對(duì)整合前后基因組序列，整合位點(diǎn)。靶向捕獲測(cè)序：設(shè)計(jì)探針捕獲整合位點(diǎn)附近的序列，提高檢測(cè)靈敏度。示例：在CAR-T細(xì)胞中，通過WGS分析轉(zhuǎn)基因整合位點(diǎn)，評(píng)估安全性。PCR擴(kuò)增與測(cè)序原理：設(shè)計(jì)引物擴(kuò)增整合位點(diǎn)附近的宿主基...

Guide-seq原理圖，Discover-seq細(xì)胞內(nèi)的脫靶切割一般無法直接捕獲，除了Guide-seq這種連接dsODN來間接記錄脫靶位點(diǎn)的方法外，研究者們還想出一種蛋白介導(dǎo)的方法Discover-seq。由于DNA雙鏈斷裂后細(xì)胞會(huì)啟動(dòng)DNA修復(fù)機(jī)制，大量...

為了應(yīng)對(duì)脫靶效應(yīng)的挑戰(zhàn)，科學(xué)家們開發(fā)了多種脫靶檢測(cè)技術(shù)。這些技術(shù)旨在識(shí)別和驗(yàn)證基因編輯過程中可能發(fā)生的脫靶位點(diǎn)，從而確?；蚓庉嫾夹g(shù)的安全性和有效性。生物信息學(xué)方法是一種常用的脫靶位點(diǎn)預(yù)測(cè)技術(shù)。通過比較gRNA或MicroRNA序列與基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列，可以...

脫靶效應(yīng)對(duì)基因編輯技術(shù)的安全性和有效性構(gòu)成了嚴(yán)重威脅。首先，脫靶編輯可能導(dǎo)致意外的基因突變，進(jìn)而引發(fā)疾病或遺傳問題。其次，脫靶效應(yīng)可能干擾正?；虻墓δ?，導(dǎo)致細(xì)胞功能障礙或死亡。此外，脫靶效應(yīng)還可能影響基因編輯技術(shù)的準(zhǔn)確度和可靠性，使得實(shí)驗(yàn)結(jié)果難以解釋和重復(fù)。...

脫靶檢測(cè)是基因編輯領(lǐng)域中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，主要用于評(píng)估基因編輯工具（如CRISPR/Cas9系統(tǒng)）在目標(biāo)基因之外是否產(chǎn)生了非特異性的基因變化。以下是對(duì)脫靶檢測(cè)的詳細(xì)介紹：脫靶檢測(cè)的定義脫靶檢測(cè)是指通過一系列實(shí)驗(yàn)方法，檢測(cè)基因編輯過程中是否在目標(biāo)基因以...

為了準(zhǔn)確測(cè)定載體拷貝數(shù)，上海唯可生物科技有限公司采用了多種先進(jìn)的技術(shù)手段。其中，定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（qPCR）技術(shù)是常用且高效的方法之一。qPCR 技術(shù)通過對(duì)目標(biāo)基因和參照基因進(jìn)行同時(shí)擴(kuò)增，并實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過程中的熒光信號(hào)變化，能夠精確計(jì)算出載體拷貝數(shù)。這種方法...

CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品可能存在的安全性風(fēng)險(xiǎn)根據(jù)產(chǎn)品從生產(chǎn)、運(yùn)輸、處理、給藥、隨訪等流程的時(shí)間順序，將關(guān)于CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品可能存在的安全性風(fēng)險(xiǎn)列舉如下。所列舉的風(fēng)險(xiǎn)并非全部，在撰寫CAR-T細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)管理計(jì)劃時(shí)，應(yīng)結(jié)合產(chǎn)...

載體設(shè)計(jì)復(fù)制起點(diǎn)（Ori）：不同Ori的復(fù)制效率不同，如高拷貝數(shù)Ori（如pUC Ori）可支持每個(gè)細(xì)胞100-500個(gè)拷貝，而低拷貝數(shù)Ori（如pSC101 Ori）支持1-5個(gè)拷貝。選擇標(biāo)記：抗性基因（如Amp、Kan）的強(qiáng)度可能影響載體穩(wěn)定性。宿主細(xì)胞細(xì)...

對(duì)于TCR修飾的T細(xì)胞，還應(yīng)關(guān)注引入TCR鏈和內(nèi)源性TCR之間的錯(cuò)配可能性，應(yīng)描述和說明旨在降低錯(cuò)配可能性的TCR設(shè)計(jì)策略。誘導(dǎo)多能干細(xì)胞來源的細(xì)胞產(chǎn)品誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（inducedpluripotentstemcell，iPS）自身具有致瘤性風(fēng)險(xiǎn)，在體內(nèi)可形...

在細(xì)菌細(xì)胞中，某種特定基因的數(shù)目。一般檢測(cè)方法有若是測(cè)序結(jié)果，可選用censor軟件檢測(cè)相關(guān)拷貝數(shù)。Southernblot是一種常用的DNA定量的分子生物學(xué)方法。其原理是將待測(cè)的DNA樣品固定在固相載體（硝酸纖維膜或尼龍膜）上，與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交，在與...

CAR-T細(xì)胞輸注后患者反應(yīng)及毒性分析：本次收集攻擊113例患者，采用qPCR和dPCR檢測(cè)20例使用axis-cel和tissa-cel處理的gDNA樣本的拷貝數(shù)。在接受tissa-celzhiliao的患者中，9例患者接受了DLBCLzhiliao，1例患...

劑量探索和劑量遞增，起始劑量的估算。shouci人體試驗(yàn)的起始劑量，通常基于非臨床安全性研究結(jié)果。與小分子或生物大分子藥物相比，免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品的非臨床研究方法受到多種因素影響，例如動(dòng)物模型的選擇、免疫應(yīng)答的種屬差異等，對(duì)人體安全起始劑量的預(yù)測(cè)可能不...

5. 整合位點(diǎn)分析的應(yīng)用5.1 基因工程研究在轉(zhuǎn)基因生物研究中，整合位點(diǎn)分析可確定外源基因的插入位置和拷貝數(shù)，評(píng)估其對(duì)宿主基因組的影響。5.2 病毒整合研究逆轉(zhuǎn)錄病毒等可在宿主基因組中建立前病毒。整合位點(diǎn)分析有助于理解病毒生命周期和致病機(jī)制。5.3 基因編輯評(píng)...

基因療法作為一種前沿的醫(yī)療技術(shù)，為眾多以往難以應(yīng)對(duì)的健康挑戰(zhàn)帶來了希望。然而，基因療法的成功與否，很大程度上依賴于基因片段在宿主細(xì)胞基因組中的整合位點(diǎn)。整合位點(diǎn)技術(shù)作為確?；驊?yīng)用安全與效果的關(guān)鍵，近年來取得了進(jìn)展。通過不斷發(fā)展和完善整合位點(diǎn)檢測(cè)技術(shù)，我們可以...

這種分散的樣本管理方法可能導(dǎo)致樣本存儲(chǔ)成本飆升、質(zhì)量問題、庫(kù)存文件挑戰(zhàn)和監(jiān)管鏈記錄不佳等問題。臨床試驗(yàn)主辦方需要協(xié)調(diào)將研究試驗(yàn)藥品運(yùn)送到臨床地點(diǎn)，以及在受試者接受zhiliao后收集樣本的工作。這些過程相互交織，擁有一個(gè)可以監(jiān)督整個(gè)臨床階段及以后的活動(dòng)的專業(yè)合...

為了準(zhǔn)確鑒定整合位點(diǎn)，研究者們已開發(fā)出多種基于PCR的檢測(cè)方法，包括逆向PCR（inverse PCR）、連接介導(dǎo)的PCR（ligation-mediated PCR, LM-PCR）和線性擴(kuò)增介導(dǎo)的PCR（linear amplification–media...

整合位點(diǎn)分析方法比較不同整合位點(diǎn)檢測(cè)方法各有特點(diǎn)。傳統(tǒng)方法如Southern印跡操作復(fù)雜但結(jié)果穩(wěn)定；高通量測(cè)序技術(shù)信息量大但成本較高；新興方法在靈敏度和特異性方面有所提升。在選擇檢測(cè)方法時(shí)，應(yīng)考慮實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、樣本?shù)量和預(yù)算等因素。對(duì)于初步篩查，可采用反向PCR等...

整合位點(diǎn)的形成機(jī)制2.1 隨機(jī)整合隨機(jī)整合是指外源DNA通過非同源末端連接(NHEJ)等機(jī)制隨機(jī)插入宿主基因組。這類整合位點(diǎn)缺乏序列特異性，可能發(fā)生在基因組的任何區(qū)域。隨機(jī)整合可能影響重要基因功能，導(dǎo)致插入突變。2.2 定向整合定向整合利用同源重組(HR)機(jī)制...

細(xì)胞和基因療法可進(jìn)一步分為體內(nèi)zhiliao和體外zhiliao，體外zhiliao是將患者的體細(xì)胞從體內(nèi)分離，在體外進(jìn)行培養(yǎng)并使用攜帶有正?；蚱蔚妮d體修復(fù)突變基因，通過注射的方法將改良后的細(xì)胞回輸入患者體內(nèi)以進(jìn)行疾病的zhiliao。體內(nèi)zhiliao是...

隨著測(cè)序技術(shù)的不斷發(fā)展，科學(xué)家們已經(jīng)能夠更精確地識(shí)別和定位整合位點(diǎn)。例如，大規(guī)模錨定平行測(cè)序（MAPS）等高通量測(cè)序技術(shù)為整合位點(diǎn)的分析提供了強(qiáng)有力的支持。這些技術(shù)不僅提高了整合位點(diǎn)識(shí)別的準(zhǔn)確性，還簡(jiǎn)化了分析過程。此外，科學(xué)家們還在不斷探索新的整合位點(diǎn)系統(tǒng)，以...

盡管整合位點(diǎn)在生物學(xué)研究和應(yīng)用中取得了進(jìn)展，但仍面臨著一些挑戰(zhàn)。例如，如何確保整合位點(diǎn)的安全性和可靠性、如何避免整合過程中的基因突變等問題都需要進(jìn)一步的研究和探索。然而，隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步和生物技術(shù)的快速發(fā)展，我們有理由相信整合位點(diǎn)將在未來發(fā)揮更加重要的作...

生殖毒性基因zhiliao產(chǎn)品應(yīng)根據(jù)受試物的產(chǎn)品類型、作用機(jī)制、一般毒理發(fā)現(xiàn)、生物分布特征以及患者人群來評(píng)估潛在的生殖/發(fā)育毒性風(fēng)險(xiǎn)。生殖毒性試驗(yàn)的研究策略和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估可參考ICHS5（R3）的建議和ICHM3（R2）、S6及S9中的相關(guān)內(nèi)容。通常需要開展胚胎-...

盡管整合位點(diǎn)檢測(cè)技術(shù)在基因應(yīng)用領(lǐng)域取得了進(jìn)展，但仍面臨一些挑戰(zhàn)。例如，現(xiàn)有的檢測(cè)方法可能無法完全識(shí)別出所有整合位點(diǎn)，特別是那些位于基因組重復(fù)區(qū)域或復(fù)雜結(jié)構(gòu)中的整合位點(diǎn)。此外，整合位點(diǎn)檢測(cè)技術(shù)的成本和時(shí)間成本仍然較高，限制了其在臨床應(yīng)用中的普及。為了克服這些挑戰(zhàn)...

免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn)水平與多種因素有關(guān)，如細(xì)胞來源和類型、體內(nèi)活性和存活時(shí)間、是否有外源基因表達(dá)、基因表達(dá)使用的載體類型以及是否存在基因組整合等。針對(duì)不同風(fēng)險(xiǎn)水平的免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品，隨訪持續(xù)時(shí)間的建議如下：?對(duì)于沒有外源基因表達(dá)、且體外操...

基因編輯產(chǎn)品除了適用基因zhiliao產(chǎn)品的一般考慮以及整合性載體的特殊考慮外，長(zhǎng)期隨訪中還應(yīng)額外關(guān)注脫靶風(fēng)險(xiǎn)，量化評(píng)估脫靶活性和在靶活性之間的相關(guān)性，或利用在靶活性來預(yù)測(cè)脫靶活性的水平。在開發(fā)過程中應(yīng)同時(shí)關(guān)注基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、脫靶效率、插入突變情況、目的基因在靶...

不同基因zhiliao產(chǎn)品的特殊考慮1.關(guān)于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體基因zhiliao產(chǎn)品，例如轉(zhuǎn)座子元件、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒及其他逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，或利用整合性載體或基于轉(zhuǎn)座子的載體在體外修飾的細(xì)胞，長(zhǎng)期隨訪中需格外關(guān)注基因zhiliao...

全基因組測(cè)序是對(duì)重組細(xì)胞的基因組DNA進(jìn)行深度測(cè)序，技術(shù)成熟簡(jiǎn)單這里不做介紹了，我們分享一下LM-PCR結(jié)合二代測(cè)序的檢測(cè)方法。LM-PCR全稱連接介導(dǎo)的PCR。將含有慢病毒插入的基因組進(jìn)行隨機(jī)打斷并連接接頭，然后通過兩輪PCR富集含有慢病毒LTR-宿主區(qū)域的...

免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品的風(fēng)險(xiǎn)水平與多種因素有關(guān)，如細(xì)胞來源和類型、體內(nèi)活性和存活時(shí)間、是否有外源基因表達(dá)、基因表達(dá)使用的載體類型以及是否存在基因組整合等。針對(duì)不同風(fēng)險(xiǎn)水平的免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品，隨訪持續(xù)時(shí)間的建議如下：?對(duì)于沒有外源基因表達(dá)、且體外操...

例如，對(duì)于經(jīng)過基因修飾的免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品如CAR-T，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR)和流式細(xì)胞術(shù)（Flowcytometry）進(jìn)行PK分析，分別通過測(cè)定外源基因拷貝和CAR+細(xì)胞數(shù)量的變化，有助于互相驗(yàn)證檢測(cè)方法的可靠性，可以更duomi...

在細(xì)菌細(xì)胞中，某種特定質(zhì)粒的數(shù)目。根據(jù)復(fù)制特性，質(zhì)粒分嚴(yán)緊型和松弛型兩類，前者在細(xì)胞中只含1～2個(gè)，而后者含10～15個(gè)以上。恒定的拷貝數(shù)與質(zhì)粒復(fù)制控制系統(tǒng)、宿主細(xì)胞遺傳背景及生長(zhǎng)條件有關(guān)。質(zhì)粒復(fù)制控制系統(tǒng)首先通過調(diào)節(jié)復(fù)制的起始點(diǎn)來控制拷貝數(shù)，調(diào)節(jié)因素包括阻遏...