CRISPR/Cas系統(tǒng)是細(xì)菌和古細(xì)菌在不斷進(jìn)化的過程中產(chǎn)生的適應(yīng)性免疫防御機(jī)制，它應(yīng)用CRISPR RNA（crRNA）以堿基互補(bǔ)的形式引導(dǎo)相應(yīng)的Cas蛋白識別入侵的外源基因組，并對其DNA進(jìn)行剪切，用以保護(hù)自身的基因組免受外源核酸如噬菌體、病毒等的干擾和破...

DDW2020年，全球細(xì)胞和基因zhiliao（CGT）市場達(dá)到約40億美元，預(yù)計到2030年將增長到約340億美元。隨著較近幾項CGT的批準(zhǔn)、不斷擴(kuò)充的渠道以及CGT公司的大量資金，這些療法的商業(yè)化步伐正在繼續(xù)加快。據(jù)估計，到2025年，F(xiàn)DA將每年批準(zhǔn)10...

在開展除惡性liu外其他適應(yīng)癥的臨床研究時，每一劑量水平的受試者數(shù)量還應(yīng)考慮不同適應(yīng)癥人群對風(fēng)險的可接受程度，或者安全性的評價要求，可能需要通過更大的樣本量提供更充分的安全性信息。此外，其他研究目的，如耐受性、制備可行性和藥理學(xué)活性評估，也可能影響樣本量或劑量...

以上長期隨訪時間的建議主要基于基因zhiliao的產(chǎn)品類型，具體產(chǎn)品的隨訪時間取決于產(chǎn)品的特性和體內(nèi)存在時間、轉(zhuǎn)基因表達(dá)時間、遲發(fā)性不良反應(yīng)的預(yù)期時間及發(fā)生率、受試者適應(yīng)癥和預(yù)期生存期、給藥途徑、以及長期隨訪的其他觀察目的。隨著隨訪數(shù)據(jù)的積累，研究者和研究申辦...

通常不需要進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)的遺傳毒性組合試驗，但應(yīng)根據(jù)基因zhiliao產(chǎn)品的特點(diǎn)、產(chǎn)品的具體適應(yīng)癥、載體的已有信息、導(dǎo)入基因序列結(jié)構(gòu)等，評估基因zhiliao產(chǎn)品整合進(jìn)基因組的可能性，判斷是否需要開展另外的遺傳毒性研究，如研究基因組修飾的發(fā)生情況，并檢測隨后可能發(fā)生...

4嵌合抗原受體（Chimericantigenreceptor，CAR）-T細(xì)胞5（CAR-T）是指通過基因修飾技術(shù)，使用病毒等載體將帶有特異6性抗原識別結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、跨膜區(qū)、共刺激信號jihuo區(qū)等遺傳7物質(zhì)轉(zhuǎn)入自體或異體T細(xì)胞形成的。CAR-T回輸?shù)交颊?..

如果基因zhiliao產(chǎn)品通過全身給xingfang式遞送，長期隨訪中的安全性監(jiān)測不僅包括靶qiguan或靶組織的脫靶活性，而且還應(yīng)包括可能發(fā)生在其他組織和qiguan中的脫靶活性。基因組整合性或者脫靶活性的分析通常需采用有創(chuàng)性12檢測方法取得樣本，實施時還需...

臨床研究人群，如果一種基因zhiliao產(chǎn)品具有引起遲發(fā)性不良反應(yīng)的風(fēng)險，需要開展長期隨訪觀察時，所有接受基因zhiliao產(chǎn)品的受試者在簽署知情同意書后均應(yīng)入組長期隨訪臨床研究。在設(shè)計長期隨訪臨床研究的方案時，應(yīng)考慮目標(biāo)受試者人群及特征、整體健康情況以及接受...

應(yīng)用場景：單克隆抗體藥物輔助篩選；致xingbing毒整合位點(diǎn)檢測與整合偏好性分析等；WGS不適用于轉(zhuǎn)染之后未經(jīng)過傳代培養(yǎng)和表型篩選的細(xì)胞系。豐富的項目經(jīng)驗?zāi)壳埃梢雅c國內(nèi)外多家免疫zhiliao研究前沿企業(yè)開展合作，采用該方法對高度異質(zhì)性的CAR-T細(xì)胞進(jìn)...

細(xì)胞經(jīng)基因修飾后會改變其生物學(xué)特性，同時也會帶來新的安全性風(fēng)險，如基因編輯脫靶風(fēng)險、載體插入突變風(fēng)險、載體重組風(fēng)險、表達(dá)的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物的風(fēng)險等。細(xì)胞經(jīng)基因修飾后會改變其生物學(xué)特性，同時也會帶來新的安全性風(fēng)險，如基因編輯脫靶風(fēng)險、載體插入突變風(fēng)險、載體重組風(fēng)險、表...

主要有兩方面的原因：一方面，高拷貝數(shù)時外源基因的表達(dá)量不再由質(zhì)粒的拷貝數(shù)決定，可能是由轉(zhuǎn)錄和翻譯水平?jīng)Q定的；另一方面，高拷貝數(shù)的質(zhì)粒往往很不穩(wěn)定。由于質(zhì)?？截悢?shù)的變化直接與基因目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)率有關(guān)，因此對于重組蛋白的生產(chǎn)來說，質(zhì)粒的拷貝數(shù)是一個非常重要的參數(shù)。同...

利用ddPCR檢測溶液中空載體的濃度和整合到T細(xì)胞群中的CAR和TCR載體的平均數(shù)量。ddPCR檢測到的平均每個細(xì)胞的載體拷貝數(shù)與流式細(xì)胞術(shù)檢測到的細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)比例呈線性關(guān)系。使用ddPCR與Real-time PCR的定量精度比較表明，ddPCR明顯更精確，測量...

對于CAR修飾的免疫細(xì)胞，應(yīng)采用多種體外方法評估其胞外抗原識別區(qū)的脫靶風(fēng)險。TCR修飾免疫細(xì)胞的脫靶毒性可通過評估TCR與人體自身抗原肽的交叉識別能力來評估。首先，應(yīng)采用體外試驗測定TCR修飾的免疫細(xì)胞與人自身抗原肽-HLA（與遞呈靶抗原肽的HLA等位基因相同...

細(xì)胞外檢測方法：細(xì)胞外檢測方法較為直接，將基因組提純后進(jìn)行CRISPR體外切割實驗，再捕獲發(fā)生脫靶切割的位點(diǎn)即可。1) Digenome-seqDigenome-seq是較早提出的一類細(xì)胞外脫靶位點(diǎn)檢測方法，提純的基因組DNA被Cas9/sgRNA切割后，再經(jīng)...

細(xì)胞外檢測方法：細(xì)胞外檢測方法較為直接，將基因組提純后進(jìn)行CRISPR體外切割實驗，再捕獲發(fā)生脫靶切割的位點(diǎn)即可。1) Digenome-seqDigenome-seq是較早提出的一類細(xì)胞外脫靶位點(diǎn)檢測方法，提純的基因組DNA被Cas9/sgRNA切割后，再經(jīng)...

利用ddPCR檢測溶液中空載體的濃度和整合到T細(xì)胞群中的CAR和TCR載體的平均數(shù)量。ddPCR檢測到的平均每個細(xì)胞的載體拷貝數(shù)與流式細(xì)胞術(shù)檢測到的細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)比例呈線性關(guān)系。使用ddPCR與Real-time PCR的定量精度比較表明，ddPCR明顯更精確，測量...

病人在6個月后達(dá)到MRD陰性，CAR-T細(xì)胞在4.2年后仍然可以在外周血檢測到，并且骨髓中檢測不到B細(xì)胞liu克隆。二代測序整合位點(diǎn)分析顯示這是因為某些CAR-T細(xì)胞的融合位置位于TET2基因9號到10號外顯子之間可變剪切區(qū)域，導(dǎo)致TET2基因跳讀和功能障礙，...

Southern blot 是一種常用的 DNA 定量的分子生物學(xué)方法。其原理是將待測的 DNA 樣品固定在固相載體（硝酸纖維膜或尼龍膜）上，與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交，在與探針有同源序列的固相 DNA 的位置上顯示出雜交信號，通過檢測信號的有無、強(qiáng)弱可以對樣品...

圍繞大家關(guān)心的CRISPR基因編輯安全性問題，我們首先對CRISPR脫靶位點(diǎn)檢測技術(shù)進(jìn)行一次大盤點(diǎn)，在sgRNA設(shè)計階段需要如何做才能夠盡可能地避免脫靶現(xiàn)象的發(fā)生。較簡單的脫靶位點(diǎn)檢測方法是全基因組測序（WGS），但在實際使用中，即使測序深度達(dá)到100X，也很...

基因編輯產(chǎn)品除了適用基因zhiliao產(chǎn)品的一般考慮以及整合性載體的特殊考慮外，長期隨訪中還應(yīng)額外關(guān)注脫靶風(fēng)險，量化評估脫靶活性和在靶活性之間的相關(guān)性，或利用在靶活性來預(yù)測脫靶活性的水平。在開發(fā)過程中應(yīng)同時關(guān)注基因轉(zhuǎn)導(dǎo)效率、脫靶效率、插入突變情況、目的基因在靶...

f如果RCT設(shè)計不可行，申請人可能在確證性臨床試驗中采用單臂試驗（singlearmtrial,SAT）。在這種情況下，申請人應(yīng)解釋無法開展RCT試驗的理由并提供相應(yīng)研究證據(jù)，并有必要利用回顧性數(shù)據(jù)、前瞻性真實世界研究、薈萃分析或流行病學(xué)調(diào)查等數(shù)據(jù)及探索性研究...

GUIDE-Seq脫靶評估技術(shù)的優(yōu)勢分析鼓潤致力于基因組編輯工具脫靶的分析檢測工作，為篩選、優(yōu)化基因組編輯工具的保真性提供標(biāo)準(zhǔn)化的分析。我們脫靶分析具有如下優(yōu)勢：實用性強(qiáng)：能反映CRISPR在真核細(xì)胞中進(jìn)行基因編輯的在靶與脫靶情況，以進(jìn)行安全性和有效性評價；檢...

持續(xù)ganran，有復(fù)制能力的病毒或細(xì)菌載體基因zhiliao產(chǎn)品，有可能在免疫能力低下的患者中發(fā)展為持續(xù)ganran，進(jìn)一步增加發(fā)生遲發(fā)但嚴(yán)重ganran的風(fēng)險?；蚓庉嫽钚?，基因編輯等新型基因zhiliao產(chǎn)品有獨(dú)特的基因組修飾功能，可誘導(dǎo)人類基因組中的位...

對于CAR修飾的免疫細(xì)胞，應(yīng)采用多種體外方法評估其胞外抗原識別區(qū)的脫靶風(fēng)險。TCR修飾免疫細(xì)胞的脫靶毒性可通過評估TCR與人體自身抗原肽的交叉識別能力來評估。首先，應(yīng)采用體外試驗測定TCR修飾的免疫細(xì)胞與人自身抗原肽-HLA（與遞呈靶抗原肽的HLA等位基因相同...

基因重排或重組。當(dāng)基因zhiliao產(chǎn)品所用載體及其攜帶的基因發(fā)生復(fù)制時，可能出現(xiàn)非zhiliao目的非預(yù)期的基因表達(dá)或改變，或者與相應(yīng)野生型或輔助病毒互補(bǔ)后產(chǎn)生回復(fù)突變或意外復(fù)制或形成6新的病毒。免疫原性。由于基因zhiliao產(chǎn)品在體內(nèi)的持續(xù)暴露或者需要多...

圍繞大家關(guān)心的CRISPR基因編輯安全性問題，我們首先對CRISPR脫靶位點(diǎn)檢測技術(shù)進(jìn)行一次大盤點(diǎn)，在sgRNA設(shè)計階段需要如何做才能夠盡可能地避免脫靶現(xiàn)象的發(fā)生。較簡單的脫靶位點(diǎn)檢測方法是全基因組測序（WGS），但在實際使用中，即使測序深度達(dá)到100X，也很...

使用CRISPR/Cas9、ZFNs和TALENs等設(shè)計核酸酶進(jìn)行基因組編輯，可以將遺傳物質(zhì)定向?qū)氩溉閯游锘蚪M的特定位點(diǎn)。然而，可能會出現(xiàn)非預(yù)期的靶上和靶外基因組修飾，這可能導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，并破壞正?；虻墓δ?，從而可能導(dǎo)致臨床前和臨床研究中的安全問題。...

不同基因zhiliao產(chǎn)品的特殊考慮。關(guān)于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體基因zhiliao產(chǎn)品，例如轉(zhuǎn)座子元件、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒及其他逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，或利用整合性載體或基于轉(zhuǎn)座子的載體在體外修飾的細(xì)胞，長期隨訪中需格外關(guān)注基因zhiliao產(chǎn)...

遲發(fā)性不良反應(yīng)相關(guān)的潛在風(fēng)險因素在評估基因zhiliao產(chǎn)品的風(fēng)險因素時，申請人應(yīng)考慮基因zhiliao產(chǎn)品的特性，同時參考該產(chǎn)品的非臨床和臨床數(shù)據(jù)以及類似產(chǎn)品的已知數(shù)據(jù)。基因zhiliao產(chǎn)品的非臨床研究旨在為臨床研究提供支持性信息和關(guān)鍵安全性特征參數(shù)，如機(jī)...

應(yīng)用場景：單克隆抗體藥物輔助篩選；致xingbing毒整合位點(diǎn)檢測與整合偏好性分析等；WGS不適用于轉(zhuǎn)染之后未經(jīng)過傳代培養(yǎng)和表型篩選的細(xì)胞系。豐富的項目經(jīng)驗?zāi)壳?，唯可已與國內(nèi)外多家免疫zhiliao研究前沿企業(yè)開展合作，采用該方法對高度異質(zhì)性的CAR-T細(xì)胞進(jìn)...