長期表達。與其他產(chǎn)品相比，部分基因zhiliao產(chǎn)品的明顯特征是可以在患者靶細胞或基因修飾細胞中持續(xù)存在并編碼表達作用因子（功能性蛋白或基因表達調(diào)節(jié)元件），并通過長久或長期改變靶細胞或組織的功能來達到zhiliao效果。同時，由于基因zhiliao編碼的作用因...

插入突變風(fēng)險評估一些整合性載體（如逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒、轉(zhuǎn)座子）可將外源基因插入整合到細胞基因組中，這可能會導(dǎo)致關(guān)鍵基因突變或jihuo原基因，從而導(dǎo)致惡性liu風(fēng)險增加。影響插入突變的關(guān)鍵風(fēng)險因素包括：（1）載體的整合特征，如插入位點的偏好性；（2）載體的設(shè)計...

gRNA的長度和錯配： 17個核苷酸長度的gRNA顯示出更高的基因組編輯效率。相比之下，18-20 bp的長度顯示出較低的基因組編輯效率。在人類細胞中減少潛在脫靶效應(yīng)的指導(dǎo)方針：1) 應(yīng)避免在PAM的7-10 bp范圍內(nèi)靶序列有超過3個錯配；2) 在PAM的1...

單克隆擴增=變？相反的，可能是療效持久的正面信號。那么在臨床過程中發(fā)現(xiàn)遲發(fā)性單克隆慢病毒整合增殖就一定高度懷疑二次成瘤嗎？其實CAR-Tzhiliao到目前為止還沒有導(dǎo)致T細胞惡性liu的報告。一項調(diào)查年到2017年CAR-CD19臨床I/II期ALL、NHL...

TCR修飾免疫細胞的脫靶毒性可通過評估TCR與人體自身抗原肽的交叉識別能力來評估。首先，應(yīng)采用體外試驗測定TCR修飾的免疫細胞與人自身抗原肽-HLA（與遞呈靶抗原肽的HLA等位基因相同）復(fù)合物的親和力，并說明抗原肽的選擇依據(jù)及選擇范圍。此外，還應(yīng)研究其他相關(guān)或...

長期隨訪的觀察時間長期隨訪的持續(xù)時間應(yīng)確保足以觀察到受試者因產(chǎn)品特性、暴露情況（生物分布和給藥途徑）等導(dǎo)致的風(fēng)險，應(yīng)不短于遲發(fā)性不良反應(yīng)的預(yù)期發(fā)生時間。一般而言，針對不同類型的基因zhiliao產(chǎn)品建議如下：?具有基因組整合活性的載體（例如γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病...

基因zhiliao的前景是巨大的。有超過 7,000 種遺傳病有可能通過基因療法zhiyu。制藥和生物技術(shù)公司清楚地認(rèn)識到 CGT 的潛力，全球TOP 20（按收入計）的生物制藥公司中有 16 家將 CGT 業(yè)務(wù)添加到其產(chǎn)品組合中。然而，雖然期望、興趣和投資熱...

Cas9蛋白是一種切割外來DNA的酶，像一把分子剪刀。該蛋白通常與兩個RNA分子結(jié)合：crRNA和另一個稱為tracrRNA（或“反式j(luò)ihuocrRNA”）。這兩個RNA分子引導(dǎo)Cas9到它將進行切割的目標(biāo)部位。這段DNA是與crRNA的20個核苷酸互補的。...

CRISPR/Cas系統(tǒng)是細菌和古細菌在不斷進化的過程中產(chǎn)生的適應(yīng)性免疫防御機制，它應(yīng)用CRISPR RNA（crRNA）以堿基互補的形式引導(dǎo)相應(yīng)的Cas蛋白識別入侵的外源基因組，并對其DNA進行剪切，用以保護自身的基因組免受外源核酸如噬菌體、病毒等的干擾和破...

質(zhì)粒載體的分類：按復(fù)制形式：分為嚴(yán)緊型和松弛型復(fù)制。根據(jù)質(zhì)粒DNA復(fù)制與宿主之間的關(guān)系或在宿主細胞的拷貝數(shù)的多少，可以將質(zhì)粒分為兩種不同的復(fù)制類型：嚴(yán)緊型和松弛型。嚴(yán)緊型質(zhì)粒復(fù)制受宿主染色體DNA復(fù)制的嚴(yán)格控制，拷貝數(shù)較小一般只有1~3個拷貝。疏松型質(zhì)粒的復(fù)制...

f如果RCT設(shè)計不可行，申請人可能在確證性臨床試驗中采用單臂試驗（singlearmtrial,SAT）。在這種情況下，申請人應(yīng)解釋無法開展RCT試驗的理由并提供相應(yīng)研究證據(jù)，并有必要利用回顧性數(shù)據(jù)、前瞻性真實世界研究、薈萃分析或流行病學(xué)調(diào)查等數(shù)據(jù)及探索性研究...

致瘤性的風(fēng)險:考慮產(chǎn)品特征，所使用整合性載體(如逆與產(chǎn)品的儲存、運輸和分配有關(guān)的風(fēng)險（如保存、冷凍和解凍過程）、冷鏈或其他類型受控溫度條件被突破的風(fēng)險、與產(chǎn)品穩(wěn)定性有關(guān)的風(fēng)險，這可能會影響CAR-T細胞的生物學(xué)活性進而導(dǎo)致治療失敗。與產(chǎn)品活性相關(guān)的風(fēng)險與產(chǎn)品活...

脫靶來自于這些技術(shù)所攜帶的功能基團，如堿基編輯的脫氨酶和先導(dǎo)編輯的逆轉(zhuǎn)錄酶，不依賴sgRNA結(jié)合基因組DNA的情況下產(chǎn)生的脫靶。為檢測第二類脫靶現(xiàn)象，研究者需要針對每種技術(shù)設(shè)計專門的檢測方法。1) R-loop seq在堿基編輯開發(fā)早期，雖然靶位點的編輯效率很...

長期隨訪獲得的臨床經(jīng)驗以及基因組整合位點分析方法的明顯改進，都有助于更好地理解整合性基因zhiliao載體相關(guān)風(fēng)險。很多能夠介導(dǎo)外源基因轉(zhuǎn)入細胞核的載體（如逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、轉(zhuǎn)座子元件和基因編輯產(chǎn)品等）有基因組整合潛力，需要通過長期隨訪觀察遲發(fā)性不良反應(yīng)的風(fēng)險；...

CGT 成功的關(guān)鍵CGT 的生產(chǎn)比傳統(tǒng)生物制劑復(fù)雜得多，影響實驗室到臨床流轉(zhuǎn)時間的關(guān)鍵因素包括：樣品生命周期管理法規(guī)要求物流這些挑戰(zhàn)因素存在于從早期研究到臨床試驗、制造和較終交付的整個轉(zhuǎn)化周期。為了讓這些重要的挽救生命的療法能更快上市，CGT 公司轉(zhuǎn)向可以幫助...

CRISPR基于sgRNA與基因組序列互補定位到靶位點，不論哪種CRISPR系統(tǒng)，都存在sgRNA序列不完全匹配但能夠結(jié)合基因組的脫靶現(xiàn)象，CRISPR定位到脫靶位點引發(fā)序列改變就屬于第二類風(fēng)險。CRISPR技術(shù)誕生剛過10年，期間迅速取代TALEN和ZFN，...

CIRCLE-seq和CHANGE-seq與SITE-seq同期發(fā)表的CIRCLE-seq一定程度上解決了SITE-seq的一些問題。CIRCLE-seq的第一步是將純化后的基因組DNA隨機打斷成300bp左右的片段，然后首尾相連成環(huán)狀DNA，這種方法很好地避...

CIRCLE-seq和CHANGE-seq與SITE-seq同期發(fā)表的CIRCLE-seq一定程度上解決了SITE-seq的一些問題。CIRCLE-seq的第一步是將純化后的基因組DNA隨機打斷成300bp左右的片段，然后首尾相連成環(huán)狀DNA，這種方法很好地避...

對于TCR修飾的T細胞，還應(yīng)關(guān)注引入TCR鏈和內(nèi)源性TCR之間的錯配可能性，應(yīng)描述和說明旨在降低錯配可能性的TCR設(shè)計策略。誘導(dǎo)多能干細胞來源的細胞產(chǎn)品誘導(dǎo)多能干細胞（inducedpluripotentstemcell，iPS）自身具有致瘤性風(fēng)險，在體內(nèi)可形...

在國家藥典委員會公布的《人用基因制品總論》（草案）的3.1條款中，特別指出：“應(yīng)檢測重組載體基因組或質(zhì)粒的完整性和均一性，載體和zhiliao序列的遺傳穩(wěn)定性”；“對于病毒載體，適當(dāng)情況下應(yīng)測定插入位點，并充分評估插入突變的可能性和相關(guān)風(fēng)險”。對此，可分別采用...

人工構(gòu)建的質(zhì)粒載體分類：高拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體，ColE1、pMB1派生質(zhì)粒具有高拷貝數(shù)的特點。適合大量增殖克隆基因，或需要大量表達的基因產(chǎn)物。低拷貝數(shù)的質(zhì)粒載體，由pSC101派生來的載體特點是分子量小的拷貝數(shù)。它有特殊的用途：當(dāng)有些被克隆的基因的表達產(chǎn)物過多時...

改進Cas變體使用SpCas9和SaCas9 變體：已研發(fā)出諸如SpCas9-Nickase、dCas9 、dCas9–FokI、xCas9、Cas9-NG、evoCas9、SpCas9 – HFI、eSpCas9和Hypa-Cas9等多種Cas變體，可降低脫...

生殖毒性基因zhiliao產(chǎn)品應(yīng)根據(jù)受試物的產(chǎn)品類型、作用機制、一般毒理發(fā)現(xiàn)、生物分布特征以及患者人群來評估潛在的生殖/發(fā)育毒性風(fēng)險。生殖毒性試驗的研究策略和風(fēng)險評估可參考ICHS5（R3）的建議和ICHM3（R2）、S6及S9中的相關(guān)內(nèi)容。通常需要開展胚胎-...

確證性臨床試驗。與其它藥物一樣，免疫細胞zhiliao產(chǎn)品的確證性研究（或關(guān)鍵研究）的目的是確認(rèn)探索性研究中初步提示的療效和安全性，為注冊提供關(guān)鍵的獲益/風(fēng)險評估證據(jù)。確證性研究的目標(biāo)人群、主要和次要終點的選擇、研究持續(xù)時間、樣本量估計和統(tǒng)計學(xué)設(shè)計等應(yīng)符合具體...

實時熒光定量PCR，其定量的基本原理是在PCR反應(yīng)體系中加入非特異性的熒光染料（如：SYBRGREENI）或特異性的熒光探針（如：Taqman探針），實時檢測熒光量的變化，獲得不同樣品達到一定的熒光信號（閾值）時所需的循環(huán)次數(shù)：CT值（CycleThresho...

新型CAR/TCR T細胞臨床產(chǎn)品中載體拷貝數(shù)的定量—數(shù)字PCR法?；蚬こ蘐細胞已經(jīng)成為zhiliaoB細胞惡性的重要方法。CAR-T細胞的常見應(yīng)用是zhiliao過表達細胞外標(biāo)記物的B細胞惡性?；蚬こ蘐細胞已經(jīng)成為zhiliaoB細胞惡性的重要方法。CA...

基因編輯定量脫靶檢測:基因編輯定量脫靶檢測,使用CRISPR/Cas9、ZFNs和TALENs等設(shè)計核酸酶進行基因組編輯，可以將遺傳物質(zhì)定向?qū)氩溉閯游锘蚪M的特定位點。然而，可能會出現(xiàn)非預(yù)期的靶上和靶外基因組修飾，這可能導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，并破壞正?；虻墓δ?..

CAR-T細胞輸注后患者反應(yīng)及毒性分析：本次收集攻擊113例患者，采用qPCR和dPCR檢測20例使用axis-cel和tissa-cel處理的gDNA樣本的拷貝數(shù)。在接受tissa-celzhiliao的患者中，9例患者接受了DLBCLzhiliao，1例患...

γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體（RetroviralVector）：早期臨床試驗曾發(fā)現(xiàn)，逆轉(zhuǎn)錄病毒對造血干細胞進行基因改造回輸人體后誘導(dǎo)了的發(fā)生。目前對逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的臨床使用安全性仍在探索中，建議謹(jǐn)慎使用γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體進行分裂活躍的干細胞類產(chǎn)品的基因編輯。慢病毒載體...

穿梭質(zhì)粒：是指一類人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點和篩選，因而可以在兩種不同類群宿主中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。此概念不僅用于不同的微生物菌群之間，也可以推廣到真核生物表達載體的構(gòu)建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳動物表達載體pMT2和用于植物細胞的...