5、GPX4活性預(yù)防鐵死亡促進(jìn)轉(zhuǎn)移作者推測(cè)細(xì)胞對(duì)鐵死亡的抗性可能使細(xì)胞能夠抗住在轉(zhuǎn)移過程中面臨的代謝和環(huán)境壓力。注射Py230-27HCS細(xì)胞的小鼠發(fā)生micrometastasis，而注射Py230-27HCR細(xì)胞的小鼠發(fā)生macrometastasis；但是無論是從micrometastasis還是從macrometastasis處分離出的轉(zhuǎn)移病灶表現(xiàn)出相似的對(duì)鐵死亡誘導(dǎo)劑（RSL3和ML210）相同的抗性。因此，27HCR細(xì)胞轉(zhuǎn)移表型的增加可能是促進(jìn)27HC抗性的適應(yīng)性事件的結(jié)果，而不是與羥甾醇***相關(guān)的基因表達(dá)/生化活性的特定變化。此外，GPX4的敲除***降低了B16F10細(xì)胞27HCS和27HCR衍生物的轉(zhuǎn)移，盡管后者的轉(zhuǎn)移程度較低。同樣，通過直接計(jì)數(shù)轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)證明，在Py230細(xì)胞的27HCR衍生物中觀察到的轉(zhuǎn)移表型在GPX4敲低后完全消除。這些數(shù)據(jù)證實(shí)了GPX4在轉(zhuǎn)移過程中預(yù)防鐵死亡的重要作用。這些數(shù)據(jù)表明大黃酸***可以改善DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎。醫(yī)學(xué)科研科研實(shí)驗(yàn)可參觀
意味著先前接受過CAR-T細(xì)胞***的小鼠的**控制***增強(qiáng)(Fig.5H-I)。值得注意的是，第30天的**大小與**侵襲前血液中CD3+T細(xì)胞的數(shù)量呈***負(fù)相關(guān)(Fig.5J)，表明CDK4/6i處理的CAR-T細(xì)胞的持久性增強(qiáng)是驅(qū)動(dòng)**控制的關(guān)鍵因素。事實(shí)上，**接種后40天，接受預(yù)處理的CAR-T細(xì)胞的小鼠浸潤C(jī)D4+和CD8+CAR-T細(xì)胞的數(shù)量***增加(Fig.5K)。接下來通過將未處理或預(yù)處理的抗LeYCAR-T細(xì)胞轉(zhuǎn)移到OVCAR-3荷瘤小鼠體內(nèi)，檢測(cè)了CDK4/6i預(yù)處理對(duì)CAR-T細(xì)胞急性療效的影響。用CDK4/6i預(yù)處理CAR-T細(xì)胞可***增強(qiáng)其抗**活性（Fig.5L-M)。與此一致，轉(zhuǎn)移后數(shù)周發(fā)現(xiàn)接受預(yù)處理細(xì)胞的小鼠血液中CD4+和CD8+細(xì)胞以及**中CD8+細(xì)胞數(shù)量***增高（Fig.5N-O)?？傊?，這些數(shù)據(jù)證明CDK4/6i體外***是增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞表型和長期療效的穩(wěn)健策略。免疫應(yīng)答科研實(shí)驗(yàn)可參觀英拜提供可靠的技術(shù)咨詢。
PD-L1-Lnc***c-Myc信號(hào)通路促進(jìn)**進(jìn)展
過表達(dá)PD-L1-Lnc上調(diào)的基因大部分在PD-L1-LncshRNA出現(xiàn)下調(diào)；進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)這些基因約20%參與了c-Myc信號(hào)通路。將變化***并參與了c-myc信號(hào)通路的基因進(jìn)行q-PCR檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在A549細(xì)胞系和肺*異種移植中，過表達(dá)或干擾PD-L1-Lnc后，這些基因的表達(dá)產(chǎn)生明顯變化。此外，將過表達(dá)的PD-L1-Lnc和干擾的c-MycsiRNA共轉(zhuǎn)染到這些基因中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，c-MycsiRNA***減弱了原本PD-L1-Lnc過表達(dá)對(duì)這些的促進(jìn)作用。作者進(jìn)一步研究PD-L1-Lnc和c-Myc之間存在怎樣的聯(lián)系，MYC家族在**細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和凋亡中如何發(fā)揮作用，將生物素偶連的反義寡核苷酸固化在鏈霉親和素磁珠上進(jìn)行C-Myc沉淀，將生物素標(biāo)記的探針作為陰性對(duì)照，WB結(jié)果顯示PD-L1-Lnc和c-Myc出現(xiàn)了免疫共沉淀，接下來在細(xì)胞中通過A/G蛋白質(zhì)瓊脂糖珠使其與c-Myc抗體結(jié)合，過表達(dá)PD-L1-Lnc、敲低PD-L1-Lnc進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)c-Myc抗體組中檢測(cè)到了PD-L1-Lnc，然而在IgG對(duì)照組中沒有檢測(cè)到PD-L1-Lnc。
m6A酶系統(tǒng)
METTL3是早先被鑒定為結(jié)合SAM的組件，其缺失引起小鼠胚胎干細(xì)胞、Hela細(xì)胞和HepG2 細(xì)胞中m6Apeaks的減少。METTL3及其同源蛋白METTL14定位在富含剪切因子的細(xì)胞核內(nèi)亞細(xì)胞器－核小斑（Nuclear speckle）上，顯示ｍ６Ａ修飾可能和ＲＮＡ的剪切加工相關(guān)。WTAP與METTL3–METTL14 二聚體相互作用，并共定位于核小斑，影響甲基化效率，參與mRNA剪。而KIAA1429作為候選的甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合體的新亞基，是整體甲基化進(jìn)程所必須的[2]。FTO是ALKB家族的成員，作為***個(gè)被發(fā)現(xiàn)的去甲基酶，可影響剪切因子SRSF2的RNA結(jié)合能力，進(jìn)而調(diào)控pre-mRNA的剪切加工過程[3]。目前已發(fā)現(xiàn)FTO調(diào)節(jié)異常與肥胖、大腦畸形和生長遲緩相關(guān)， 揭示m6A可能對(duì)這些疾病具有重要的調(diào)節(jié)功能[4-6]。 上海英拜生物設(shè)有專業(yè)的武漢技術(shù)中心。
4、CLF1敲除抑制小鼠HCC的生長和肺部轉(zhuǎn)移隨后，作者在體內(nèi)進(jìn)一步驗(yàn)證CLF1的功能。結(jié)果如圖3所以，敲除CFL1后***降低了HCC細(xì)胞的**體積和**，并減少了肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量。IHC表明CLF1的敲除也導(dǎo)致EMT相關(guān)蛋白的抑制?？傊?，CLF1敲除抑制小鼠HCC的生長和肺部轉(zhuǎn)移。
5、CFL1是HIF-1α在HCC細(xì)胞中的下游靶基因?yàn)榱岁U明低氧對(duì)HCC中CFL1表達(dá)的影響，將HCCLM3和Hep3B細(xì)胞在低氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。結(jié)果發(fā)現(xiàn)低氧誘導(dǎo)導(dǎo)致CFL1的表達(dá)升高，但是當(dāng)HIF-1α敲除后，低氧誘導(dǎo)并不能提高CFL1的表達(dá)，并且使用HIF-1α的抑制劑處理HCCLM3和Hep3B細(xì)胞，也能降低因低氧誘導(dǎo)導(dǎo)致CFL1表達(dá)升高（圖4A-F）。ChIP-PCR檢測(cè)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，HIF-1α和HIF-1β與HCC細(xì)胞CFL1啟動(dòng)子中的HRE直接結(jié)合（圖4G）。在低氧條件下，轉(zhuǎn)染HRE熒光素酶質(zhì)?；駽FL1啟動(dòng)子-熒光素酶質(zhì)粒的HEK293T細(xì)胞中熒光素酶報(bào)告基因活性升高（圖4H）。 英拜跟客戶形成產(chǎn)學(xué)研合作模式。深圳免疫病理芯片科研
增加乳酸桿菌水平導(dǎo)致尿酸水平下降。醫(yī)學(xué)科研科研實(shí)驗(yàn)可參觀
然后使用單細(xì)胞RNA-seq來描述移植后30天脾臟中存留的T細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄譜（Fig. 4G）。使用pseudobulk RNA-seq分析和預(yù)轉(zhuǎn)移體外培養(yǎng)的基因比較，生成了持續(xù)細(xì)胞的基因標(biāo)記，其標(biāo)志是記憶相關(guān)基因(Sell，F(xiàn)oxp1，Tcf7，Cd7，Il7r，Klf2，Ccl5)的高表達(dá)和效應(yīng)相關(guān)基因(Gzmd，Ifng，Prf1，Gzma，Gzmb)的低表達(dá)(Fig. 4H-I)。對(duì)先前的體外單細(xì)胞數(shù)據(jù)（Fig. 2H-J）的進(jìn)一步分析顯示，CDK4/6i處理后，具有這種持續(xù)性特征的細(xì)胞頻率從7.5%增加至26.8%（Fig. 4J-K）。這些數(shù)據(jù)表明，抑制CDK4/6促進(jìn)T細(xì)胞向真實(shí)的記憶表型分化，其特征是功能的長期持久性。醫(yī)學(xué)科研科研實(shí)驗(yàn)可參觀
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6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)