5.ELNAT1與UBC9啟動子形成DNA-RNA三聯(lián)體，通過招募hnRNPA1增強H3K4me3修飾
為了探索ELNAT1誘導(dǎo)BCa淋巴轉(zhuǎn)移的分子機制，我們使用NGS檢測過表達(dá)ELNAT1的BCa細(xì)胞和對照細(xì)胞（Figure5A），由于SUMOylation已經(jīng)被證明可以調(diào)節(jié)特異性RNA的識別，并參與RNA分選進(jìn)入EVs的過程，因此鑒定ELNAT1的SUMOylation相關(guān)靶基因。在受ELNAT1調(diào)控的925個基因中，作者發(fā)現(xiàn)UBC9是SUMOylation相關(guān)基因變化*****的（Figure5B-D）。接著通過RNA純化（ChIRP）檢驗ELNAT1與UBC9中P1（153~143bp）啟動子區(qū)域存在生理相互作用（Figure5E,F）。CD光譜證實ELNAT1/UBC9TTS1組在270~280nm處有一個***的正峰，在210nm處有一個負(fù)峰。 阻斷atm依賴的磷酸化會損害DNA損傷后PTEN的亞細(xì)胞再分配。貴州課題實驗可參觀
鑒于以上結(jié)果，作者想進(jìn)一步探究tiRNA-Gly與RBM17作用的分子結(jié)果。結(jié)果顯示，tiRNA-Gly可提高總RBM17蛋白的水平，但是不影響RBM17的mRNA水平（圖3H-I）。隨后，用蛋白質(zhì)合成抑制劑環(huán)己胺(CHX)處理細(xì)胞，tiRNA-Gly轉(zhuǎn)染后增加了K1細(xì)胞內(nèi)源性RBM17蛋白的半衰期，而β-actin作為對照（圖3J）。此外，蛋白酶體抑制劑MG132處理后，內(nèi)源性RBM17在轉(zhuǎn)染tiRNA-Gly的K1細(xì)胞中的積累量**高于轉(zhuǎn)染siRNA-NC的K1細(xì)胞，表明tiRNA-Gly抑制了蛋白酶體依賴性的PTC細(xì)胞中RBM17的降解（圖3K）。此外，tiRNA-Gly的過表達(dá)***抑制了泛素化RBM17的水平（圖3L）。綜上所述，tiRNA-Gly可以穩(wěn)定RBM17蛋白通過泛素/蛋白酶體依賴性降解。蛋白組學(xué)課題實驗可參觀***ATM對PTEN的磷酸化增加了DNA損傷后AKT和p27Kip1的***。
***的shrna介導(dǎo)的Hrs耗散(補充圖6a, b)導(dǎo)致gfp載體細(xì)胞中cd63陽性晚期核內(nèi)體減少，并將GFPINPP4B細(xì)胞中晚期核內(nèi)體形成增加的水平逆轉(zhuǎn)為gfp載體控制水平(圖5a, b)。在非錨定細(xì)胞生長試驗中，耗用Hrs shRNA對gfp載體軟瓊脂集落的大小沒有影響，但減少了GFP-INPP4B細(xì)胞集落的大小，這與Hrs依賴的細(xì)胞增殖一致(圖5c, d)。將MCF-7細(xì)胞注射到雌性BALB/c裸小鼠腹股溝第四乳腺脂肪墊中，在體內(nèi)檢測**生長的hrs依賴性。與GFPvector相比，GFP-INPP4B在體內(nèi)**體積和體外**重量***增加(3倍)(圖5e g)。雖然敲除Hrs沒有影響gfp載體**的大小和重量，但GFP-INPP4B**的增強生長被減少Hrs抑制(圖5e g)，表明INPP4B促進(jìn)pik3a突變ER+乳腺*細(xì)胞的增殖和**生長以hrsdependence的方式。
相反，miR-199a-5p抑制劑處理可提高WT小鼠脾CD4+ T細(xì)胞中Sirt1的表達(dá)(圖5E)，并降低衰老標(biāo)志物p21, p16和乙酰p53水平(圖5F)。***，與MRL/lpr相比，hUC-MSCs可增加miR-199a-5p的產(chǎn)生，表明hUC-MSCs是miR-199a-5p來源的關(guān)鍵調(diào)控因子 (圖5G)。在transwell系統(tǒng)中，hUC-MSCs與MRL/lpr脾CD4+ T細(xì)胞共培養(yǎng)48 h后，細(xì)胞內(nèi)miR-199a-5p升高，Sirt1基因表達(dá)降低，CD4+ T細(xì)胞中衰老標(biāo)志物的表達(dá)水平恢復(fù)，而miR-199a-5p抑制劑處理后仍處于抑制狀態(tài)(圖5G-I)?？偟膩碚f，這些數(shù)據(jù)表明hUC-MSCs通過miR-199a-5p介導(dǎo)的Sirt1下調(diào)和隨后p53去乙?；臏p少，增加了脾臟CD4+ T細(xì)胞的衰老。課題外包服務(wù)找英拜放心安心。
2）UCP1在AKI中***下調(diào)，且與腎損傷嚴(yán)重程度呈高度負(fù)相關(guān)
UCPs超家族與能量代謝密切相關(guān)，并在多種疾病中介導(dǎo)脂質(zhì)消耗。基于UCPs的功能，我們通過westernblot和免疫組化方法對正常C57小鼠腎組織中UCP1、UCP2和UCP3的表達(dá)進(jìn)行了表征。結(jié)果顯示，UCP1和UCP2表達(dá)較好，而UCP3幾乎未檢測到(圖2A-B)。在UCPs中，UCP1被認(rèn)為是脂質(zhì)降解**關(guān)鍵的基因，而UCP2與之沒有直接關(guān)系。因此，我們選擇UCP1進(jìn)行進(jìn)一步分析，證實其在皮質(zhì)小管中高表達(dá)，在髓質(zhì)中部分表達(dá)，C57小鼠、Sprague-Dawley大鼠、Wistar大鼠腎小球、**幾乎無表達(dá)(圖2C-D)。為了進(jìn)一步確認(rèn)UCP1在腎臟中的表達(dá)位點，我們用凝集素染色顯示腎臟的形態(tài)，然后對UCP1進(jìn)行染色。結(jié)果顯示，UCP1主要表達(dá)于腎小管以上結(jié)果提示，UCP1可能在腎小管的結(jié)構(gòu)和功能中發(fā)揮著潛在的重要作用。 解決了對確定因果調(diào)節(jié)機制網(wǎng)絡(luò)的方法的關(guān)鍵需求。神經(jīng)元損傷課題產(chǎn)學(xué)研合作
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接下來研究RASA1是否參與了CRC細(xì)胞中外泌體miR-335-5p對遷移、侵襲和EMT的誘導(dǎo)。蛋白質(zhì)印跡分析顯示，miR-335-5p模擬物-exo增加了Ras和波形蛋白的蛋白水平，但降低了RASA1和E-鈣粘蛋白的蛋白水平；對于RASA1過表達(dá)，觀察到這些蛋白質(zhì)的反向表達(dá)趨勢。此外，RASA1過表達(dá)逆轉(zhuǎn)了miR-335-5p模擬物-exo誘導(dǎo)的SW480細(xì)胞遷移和侵襲。這些結(jié)果表明外泌體miR-335-5p可能通過靶向RASA1誘導(dǎo)遷移、侵襲和EMT。
該研究揭示了外泌體 miR-335-5p 在 CRC 轉(zhuǎn)移中的新功能，并闡明了外泌體包裹的 miR-335-5p 通過直接靶向 RASA1 促進(jìn) CRC 細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移和 EMT 轉(zhuǎn)化。 這些發(fā)現(xiàn)強烈表明外泌體 miR-335-5p 可能是一種預(yù)后生物標(biāo)志物，并為解決 CRC 轉(zhuǎn)移提供有價值的***策略。 貴州課題實驗可參觀
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