我們前期發(fā)現(xiàn)5’-tiRNA-Val(一種tiRNA)的含量在結(jié)直腸*組織中***升高，且可能通過與Ago2相互作用調(diào)控mRNA的穩(wěn)定性參與ANG介導(dǎo)的腸*細(xì)胞遷移過程，但有待***與深入研究。為此，本項(xiàng)目擬在細(xì)胞和動(dòng)物水平明確5’-tiRNA-Val在ANG促結(jié)直腸*轉(zhuǎn)移中的作用；然后，利用RNA-seq技術(shù)篩選和鑒定受該tiRNA調(diào)控的轉(zhuǎn)移相關(guān)靶基因；***，從mRNA穩(wěn)定性調(diào)控層面，闡明該tiRNA對(duì)轉(zhuǎn)移相關(guān)基因調(diào)控的分子機(jī)制。我們認(rèn)為，本項(xiàng)目將拓展一類新的非編碼RNA的作用機(jī)制認(rèn)識(shí)，同時(shí)也有助推動(dòng)tiRNA在**診斷和***的臨床轉(zhuǎn)化研究。tRF&tiRNA是由tRNA切割產(chǎn)生，長(zhǎng)度約15-45個(gè)核苷酸的小RNA。青海tiRNA國(guó)家自然科學(xué)基金
上海英拜生物tRF&tiRNA實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)服務(wù)流程
1.引物設(shè)計(jì)、合成設(shè)計(jì)并合成目的tRF&tiRNA的特異性PCR引物。
2.樣品RNA抽提a.若實(shí)驗(yàn)對(duì)象為組織樣品，取適量（50-100mg）新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品，加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），勻漿后抽提RNA。b.若實(shí)驗(yàn)對(duì)象為細(xì)胞樣品，每份樣品取1×106～1×107細(xì)胞，完全吸去培養(yǎng)液后加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），裂解后抽提RNA。
3.RNA質(zhì)量檢測(cè)a．紫外吸收測(cè)定法測(cè)定RNA在波長(zhǎng)260nm和280nm的吸收值，獲得RNA的濃度并通過A260/280及A260/230的吸收比值判斷RNA的純度。b．甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)RNA純度和完整性。注：用于tRF&tiRNA實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)的RNA樣品，必須高純度、完整，沒有RNase污染（降解的樣品不能用于實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)），同時(shí)提取方法必須保證所得樣品包含完整的小RNA部分。
4.RNA預(yù)處理（可選）使用rtStar?tRF&tiRNAPretreatmentKit(Cat#AS-FS-005,Arraystar)進(jìn)行預(yù)處理，去除3’氨?；┒伺c3‘環(huán)磷酸末端，磷酸化5’羥基末端，并移去m1A,m3C等多種甲基化修飾。 在線tiRNA整體服務(wù)重點(diǎn)介紹了tRF&tiRNA分子在人類疾病中的潛在應(yīng)用,并提出了目前存在的問題和未來(lái)的研究方向。
轉(zhuǎn)運(yùn)RNA (tRNA)是一種參與解碼mRNA、翻譯蛋白質(zhì)的接頭分子。近年來(lái)的研究表明tRNA還能作為小非編碼RNA (sncRNA)的主要來(lái)源之一，具有獨(dú)特且多樣的功能1。這些tRNA來(lái)源的ncRNA并非隨機(jī)降解的產(chǎn)物，而是通過精確的生物發(fā)生過程產(chǎn)生的。
轉(zhuǎn)運(yùn)RNA (tRNA)是一種參與解碼mRNA、翻譯蛋白質(zhì)的接頭分子。這些tRNA來(lái)源的ncRNA并非隨機(jī)降解的產(chǎn)物，而是通過精確的生物發(fā)生過程產(chǎn)生的 。
源自tRNA的ncRNA大致分為兩大類：tiRNA (或者tRNA halves) 和tRFs (tRNA 衍生片段)
tiRNA和tRF是近期發(fā)現(xiàn)的一類來(lái)源于tRNA的新型小RNA，長(zhǎng)度在16-50 nt。tiRNA是來(lái)源于成熟tRNA的半分子，血管生成素會(huì)在壓力應(yīng)激下介導(dǎo)tRNA切割成5’-和3’-tRNA半分子，長(zhǎng)度約30-35nt。tRFs是來(lái)源于成熟tRNA或前體tRNA的小片段，根據(jù)其在tRNA上對(duì)應(yīng)的位置可進(jìn)一步分為tRF-5，tRF-3， tRF-1和i-tRF等，長(zhǎng)度約為15-30nt。據(jù)報(bào)道，tiRNA和tRF可以microRNA的方式參與RNA干擾，另外可結(jié)合諸如YBX1蛋白因子調(diào)控靶mRNA的穩(wěn)定性。tiRNA和tRF不僅可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物，還具有***潛能。云序生物tiRNA測(cè)序采用獨(dú)有的﹑***的tiRNA和tRF數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行分析，并額外附送miRNA表達(dá)譜分析。tRNA衍生片段(tRNA-derivedfragments,tRF&tiRNA)為近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一類非編碼RNA,在外周血循環(huán)中表達(dá)穩(wěn)定。
tRF & tiRNA實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)服務(wù)流程
1.引物設(shè)計(jì)、合成
2. 樣品RNA抽提
3. RNA質(zhì)量檢測(cè)
4.RNA預(yù)處理（可選）
4.逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA使用rtStar?First-StrandcDNASynthesisKit(3’and5’adaptor)(Cat#AS-FS-003,Arraystar)試劑盒進(jìn)行接頭連接和反轉(zhuǎn),合成cDNA***鏈。
5.實(shí)時(shí)定量PCR以合成的cDNA作為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增，梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)同時(shí)進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增，根據(jù)Ct值制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。以同樣的方法測(cè)定每個(gè)樣品中的內(nèi)參，校正上樣誤差。
6.分析結(jié)果、提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告分析實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量樣品中的目的tRF&tiRNA。提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告，包括詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方法，實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和圖表。 英拜生物為您提供tiRNA實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)服務(wù).在線tiRNA整體服務(wù)
高通量測(cè)序分析發(fā)現(xiàn)了一類新的小非編碼RNA。青海tiRNA國(guó)家自然科學(xué)基金
piRNA測(cè)序技術(shù)服務(wù)
piRNA是一類長(zhǎng)度約26-32nt的小非編碼RNA分子，通過與Piwi蛋白家族成員作用發(fā)揮功能。與miRNA數(shù)目只有幾百種不同，piRNA在人、小鼠、大鼠中***表達(dá)。piRNA在長(zhǎng)度、表達(dá)類型、基因結(jié)構(gòu)和生成方式上均與miRNA截然不同。在功能上，piRNA在生殖發(fā)育和精子形成過程中保護(hù)精子基因組免受轉(zhuǎn)座子插入的危害，通過表觀遺傳調(diào)控基因表達(dá)，蛋白翻譯和mRNA更新，以及維持染色質(zhì)結(jié)構(gòu)和細(xì)胞周期進(jìn)程，并與**進(jìn)程有關(guān)。
tRF&tiRNA測(cè)序技術(shù)服務(wù)
tRNA是非編碼小RNA分子的主要來(lái)源。tRNA來(lái)源的RN**段（tRF）和tRNA半分子（tiRNA）的生物發(fā)生是一個(gè)精確調(diào)控的過程，其含量有時(shí)甚至超過microRNA，具有獨(dú)特而多樣的功能。康成生物率先推出tRF&tiRNA高通量測(cè)序，使用Arraystar***授權(quán)的分析系統(tǒng)，提供從樣品到數(shù)據(jù)分析的一站式技術(shù)服務(wù)。 青海tiRNA國(guó)家自然科學(xué)基金
公司特色是以各式高通量二代測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請(qǐng)：提供標(biāo)書課題設(shè)計(jì)、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的開展，設(shè)計(jì)的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c(diǎn)，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點(diǎn)**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c(diǎn)研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)