tRNA上存在大量的轉(zhuǎn)錄后修飾，而且tRNA需與氨基酸形成氨?；鵷RNA方可參與蛋白翻譯。當(dāng)tRNAs被切割為tRFs&tiRNAs時，這些修飾（包括甲基化修飾、氨?；┒诵揎棧炕虿糠值谋Ａ粝聛?。tiRNAs常由RNA內(nèi)切酶Angiogenin切割產(chǎn)生，這類內(nèi)切酶會在切割位點產(chǎn)生5‘羥基（5’-OH）末端與3’環(huán)磷酸（3‘-cP）末端。然而，5’端與3‘端的接頭連接步驟，需要底物小RNA 5’端為磷酸，3‘端為羥基。此外，某些tRFs&tiRNAs的內(nèi)部修飾比如m1A, m1G與m3C會嚴(yán)重阻礙反轉(zhuǎn)錄過程。因此為了準(zhǔn)確檢測tRFs&tiRNAs，這些修飾必須被有效的去除。高通量測序方法能夠檢測更多類型的RNA,例如+RNA、rRNA、snoRNA和ScaRNA。綜合tiRNA創(chuàng)新服務(wù)
上海英拜生物tRF&tiRNA實時定量PCR技術(shù)服務(wù)流程
1.引物設(shè)計、合成設(shè)計并合成目的tRF&tiRNA的特異性PCR引物。
2.樣品RNA抽提a.若實驗對象為組織樣品，取適量（50-100mg）新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品，加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），勻漿后抽提RNA。b.若實驗對象為細胞樣品，每份樣品取1×106～1×107細胞，完全吸去培養(yǎng)液后加1ml的RNA抽提試劑Trizol（Invitrogen），裂解后抽提RNA。
3.RNA質(zhì)量檢測a．紫外吸收測定法測定RNA在波長260nm和280nm的吸收值，獲得RNA的濃度并通過A260/280及A260/230的吸收比值判斷RNA的純度。b．甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA純度和完整性。注：用于tRF&tiRNA實時定量PCR檢測的RNA樣品，必須高純度、完整，沒有RNase污染（降解的樣品不能用于實時定量PCR檢測），同時提取方法必須保證所得樣品包含完整的小RNA部分。
4.RNA預(yù)處理（可選）使用rtStar?tRF&tiRNAPretreatmentKit(Cat#AS-FS-005,Arraystar)進行預(yù)處理，去除3’氨?；┒伺c3‘環(huán)磷酸末端，磷酸化5’羥基末端，并移去m1A,m3C等多種甲基化修飾。 綜合tiRNA創(chuàng)新服務(wù)tRFs是來源于成熟tRNA或前體tRNA的小片段，可進一步分為tRF-5，tRF-3，tRF-1和i-tRF等，長度約為15-30nt。
逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA
使用rtStar?First-StrandcDNASynthesisKit(3’and5’adaptor)(Cat#AS-FS-003,Arraystar)試劑盒進行接頭連接和反轉(zhuǎn),合成cDNA***鏈。
實時定量PCR
以合成的cDNA作為模板進行實時定量PCR擴增，梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)同時進行實時定量PCR擴增，根據(jù)Ct值制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。以同樣的方法測定每個樣品中的內(nèi)參，校正上樣誤差。6分析結(jié)果、提供實驗報告
分析實時定量PCR結(jié)果，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線定量樣品中的目的tRF&tiRNA。提供實驗報告，包括詳細的實驗方法，實時定量PCR實驗數(shù)據(jù)和圖表。
轉(zhuǎn)運RNA (tRNA)是一種參與解碼mRNA、翻譯蛋白質(zhì)的接頭分子。近年來的研究表明tRNA還能作為小非編碼RNA (sncRNA)的主要來源之一，具有獨特且多樣的功能1。這些tRNA來源的ncRNA并非隨機降解的產(chǎn)物，而是通過精確的生物發(fā)生過程產(chǎn)生的。
轉(zhuǎn)運RNA (tRNA)是一種參與解碼mRNA、翻譯蛋白質(zhì)的接頭分子。這些tRNA來源的ncRNA并非隨機降解的產(chǎn)物，而是通過精確的生物發(fā)生過程產(chǎn)生的 。
源自tRNA的ncRNA大致分為兩大類：tiRNA (或者tRNA halves) 和tRFs (tRNA 衍生片段) tRFs&tiRNAs的組成和數(shù)量高度依賴于細胞類型和疾病狀態(tài)。
實時熒光定量PCR技術(shù)是在普通PCR反應(yīng)體系中加入熒光試劑，利用熒光信號實時檢測PCR進程，***通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。 實時熒光定量PCR能夠?qū)Ｒ?、靈敏、快速、高重復(fù)性地精確定量起始模板濃度。tRF & tiRNA是由tRNA切割產(chǎn)生，長度約15-45個核苷酸的小RNA。由于tRF & tiRNA長度太短，且與tRNA序列完全重疊，不能通過傳統(tǒng)的實時定量PCR進行檢測。本公司通過在tRF & tiRNA兩端引入人工合成序列（adaptor），設(shè)計特殊的跨連接位點的定量PCR引物，可以精確檢測微量樣品中tRF & tiRNA表達水平。tiRNA是源于成熟tRNA的半分子，血管生成素會在壓力應(yīng)激下介導(dǎo)tRNA切割成5'和3'tRNA半分子，長度約30-35nt。單細胞相關(guān)課題tiRNA國家自然科學(xué)基金
重點介紹了tRF&tiRNA分子在人類疾病中的潛在應(yīng)用,并提出了目前存在的問題和未來的研究方向。綜合tiRNA創(chuàng)新服務(wù)
英拜生物為您提供microRNA實時定量PCR技術(shù)服務(wù)，您只需要提供保存完好的組織或細胞標(biāo)本，本公司專業(yè)的技術(shù)服務(wù)人員就可替您完成microRNA實時定量PCR實驗操作和數(shù)據(jù)分析，提供給您完整的實驗報告，為您節(jié)省大量的時間和精力。英拜生物microRNA實時定量PCR技術(shù)服務(wù)流程如下：引物設(shè)計、合成設(shè)計并合成目的microRNA的莖環(huán)RT引物、PCR引物。樣品RNA抽提a．組織樣品：取適量（50～100mg）新鮮組織或正確保存的組織樣品，勻漿后抽提RNA。b．細胞樣品：取1×106～1×107細胞，吸去培養(yǎng)液后用TRIZOL試劑抽提RNA。RNA質(zhì)量檢測a．紫外吸收測定法測定RNA在波長260nm和280nm的吸收值，獲得RNA的濃度并通過A260/280及A260/230的吸收比值判斷RNA的純度。b．用甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳，檢測RNA純度和完整性。注：用于microRNA實時定量PCR檢測的RNA樣品，必須高純度、完整，沒有RNase污染（降解的樣品不能用于實時定量PCR檢測），同時提取方法必須保證所得樣品包含完整的小RNA部分。綜合tiRNA創(chuàng)新服務(wù)
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請：提供標(biāo)書課題設(shè)計、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實驗的開展，設(shè)計的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點**文獻技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學(xué)實驗