此外，Ago2 RIP 分析表明 miR-1252-5p、circ_0072083、ALKBH5 和 NANOG 可以在同一復合物上富集。此外，在U251/TR和U87/TR 細胞中，通過circ_0072083 沉默，miR-1252-5p 水平明顯增強。miR-1252-5p 過表達顯著降低了 U251/TR 和 U87/TR 細胞中的 ALKBH5 和 NANOG 水平。此外，在用 sh-NC + anti-NC、sh-circ_0072083 + anti-NC 或 sh-circ_0072083 + anti-miR-1252-轉(zhuǎn)染的細胞中研究了 circ_0072083/miR-1252-5p 軸對 ALKBH5 和 NANOG 水平的影響。ALKBH5和NANOG 水平通過circ_0072083沉默顯著降低，這通過miR-1252-5p 敲低恢復。此外，miR-1252-5p 敲低逆轉(zhuǎn)了 circ_0072083沉默介導的 TMZ IC50 降低、細胞增殖、遷移和侵襲以及促進 U251/TR 和 U87/TR 細胞凋亡。這些結(jié)果表明 circ_0072083 可以調(diào)節(jié) miR-1252-5p/ALKBH5/NANOG 軸以控制膠質(zhì)瘤細胞中的 TMZ 抗性。英拜生物是國內(nèi)承接各類高通量測序科研項目以及一站式的測序文章發(fā)表服務的公司之一。遼寧細胞能動性科研
ircPLCE1編碼一種新的蛋白circPLCE1–411
為了研究CRC中circPLCE1的詳細機制，我們首先使用編碼潛能評估工具分析了circPLCE1的編碼潛能，提示circPLCE1的蛋白編碼概率大于0.999。接下來，我們分析了circPLCE1的ORF。在circPLCE1中存在一個潛在的跨越連接ORF編碼一個411氨基酸蛋白(以下簡稱circPLCE1-411，圖3A)。通過雙熒光素酶分析驗證了驅(qū)動ORF翻譯的內(nèi)部核糖體進入位點的活性(圖3B)。接下來，我們構(gòu)建了flag標記的質(zhì)粒以確定circPLCE1-411的存在。通過qRT-PCR檢測circPLCE1和線性PLCE1的表達(圖3C)。此外，我們發(fā)現(xiàn)PLCE1抗體在circPLCE1-411中具有相同的免疫原序列(圖3D)。 解剖學科研地區(qū)科學基金英拜生物您隨身的科研小助手。
接下來，在低氧條件下，在HCCLM3和Hep3B細胞中敲低CFL1的表達（圖5A）。結(jié)果表明，CFL1敲除***逆轉(zhuǎn)了缺氧誘導的HCCLM3細胞增殖、細胞遷移和侵襲以及EMT（圖5A-D）。綜上所述，這些結(jié)果表明CFL1表達受HIF-1α的轉(zhuǎn)錄調(diào)控，介導缺氧誘導的HCC進展。
6、CFL1通過抑制泛素介導的PLD1降解來維持PLD1的表達為了進一步探索CFL1在HCC中致*作用的下游機制，利用KEGG數(shù)據(jù)庫篩選了受CFL1影響的通路。其中CFL1的高表達與細胞膜中細胞粘附分子和蛋白的定位密切相關(guān)（圖6A）。然后，基于蛋白質(zhì)相互作用數(shù)據(jù)庫預測了CFL1和PLD1之間的潛在相互作用（圖6B）。CFL1敲低降低了HCCLM3細胞中PLD1的蛋白水平，而CFL1過表達增強了Hep3B細胞中PLD1蛋白表達（圖6C）。co-IP實驗表明，CFL1與PLD1相互作用，敲低CFL1可促進肝*細胞中PLD1的泛素化(圖6D-E)。用放線菌酮(CHX，2μg/mL)阻斷肝*細胞蛋白質(zhì)合成。繪制蛋白降解曲線，表明CFL1敲低時PLD1蛋白降解更快（圖6F）。此外，蛋白酶體抑制劑MG132(25μM)處理可阻斷CFL1敲低誘導的HCC細胞中PLD1降解（圖6F）。因此，這些結(jié)果表明CFL1抑制肝*細胞中泛素介導的PLD1蛋白水解。
1）SsD在AML中表現(xiàn)出抗增殖活性
為了闡明SsD在白血病中的藥理作用，我們在10個人白血病細胞系中探討了一系列SsD濃度的影響。我們發(fā)現(xiàn)SsD在大多數(shù)白血病細胞系中以劑量依賴的方式抑制細胞活力(圖1A)。為了進一步研究SsD對白血病的抑制作用，我們在4種白血病細胞系NB4、kas1、MV4-11和U937(SsD敏感性排名前4位的細胞)進行了集落實驗。與細胞活力結(jié)果相似，SsD***抑制了所測細胞系的集落數(shù)量和大小(圖1B-E)。有趣的是，SsD對細胞增殖和活力的抑制可能是由于細胞周期阻滯在G1期和NB4細胞凋亡增加(圖1F-G)。 增加乳酸桿菌水平導致尿酸水平下降。
1、白樺素作為SREBP加工特異性抑制劑的鑒定
構(gòu)建了一個由含SRE啟動子驅(qū)動的熒光素酶報告基因，并從人肝*細胞系Huh-7中生成了穩(wěn)定表達該報告基因的細胞系(命名為Huh-7/SRE-Luc)。然后將該細胞與不同化合物孵育，并進行熒光素酶活性測定。有趣的是，只有白樺素[lup-20(29)-ene-3b,28-diol]有效降低了熒光素酶的活性。白樺素是一種天然存在的五環(huán)三萜，可以很容易地從樺樹皮中提取出來(比較高可達干重的30%)。
作者直接檢測了白樺素對SREBP加工的影響和特異性，并與25-HC進行比較。25-HC有三個主要作用：通過抑制SREBP-2的切割降低n-SREBP-2(圖1A)；***LXR，進而上調(diào)SREBP-1的轉(zhuǎn)錄，導致n-SREBP-1的增加(圖1A)；促進HMG-CoA還原酶(HMGCR)的降解，HMGCR是膽固醇生物合成中的限速酶(圖1B)。另一方面，白樺素有效降低了內(nèi)源性的n-SREBP-1和n-SREBP-2(圖1A)，表明白樺素在不***LXR的情況下抑制了SREBP的加工。 2108年俞立團隊明確闡述了收集和檢測遷移體的實驗方法。丙酸科研國家自然科學基金
尿酸升高直接引起腸道屏障損傷。遼寧細胞能動性科研
circ_0072083 敲低降低了 TMZ 抗性
神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞中的 TMZ 抗性為了研究circ_0072083對TMZ抗性的作用，用sh-circ_0072083或sh-NC 轉(zhuǎn)染U251/TR和U87/TR細胞。用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的sh-circ_0072083是基于具有比較高敲低效率的si-circ_0072083#1序列構(gòu)建的。sh-circ的轉(zhuǎn)染誘導U251/TR 和 U87/TR 細胞中circ_0072083 水平降低 65% 以上。circ_0072083 敲低明顯降低了 U251/TR 和 U87/TR 細胞中TMZ的IC50。接下來，在用TMZ (50 μg/mL) 處理的細胞中進行功能分析。在TMZ存在的情況下，circ_0072083沉默通過降低增殖和集落形成的能力顯著抑制細胞增殖。此外，在TMZ存在下，circ_0072083干擾明顯增加了U251/TR和U87/TR細胞的凋亡。此外，敲低circ_0072083顯著削弱了通過TMZ攻擊的兩種細胞系的遷移和侵襲能力。此外，在異種移植模型中研究了 circ_0072083對 TMZ 功效的影響。用sh-circ_0072083或sh-NC轉(zhuǎn)染U251/TR細胞建立異種移植模型，然后用TMZ（20mg/kg）或PBS處理小鼠。與 sh-NC + TMZ 組相比，sh-circ + TMZ 組的**體積和重量明顯減少。此外，與 sh-NC + TMZ 組相比，sh-circ_0072083 + TMZ 組中的 circ_0072083 豐度顯著降低。這些結(jié)果表明，circ_0072083 沉默減弱了膠質(zhì)瘤中的 TMZ 抗性。 遼寧細胞能動性科研
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7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗