4.FBW7通過NR4A1抑制SCD1的轉(zhuǎn)錄作者在基因表達(dá)譜中發(fā)現(xiàn)了NR4A家族的核受體(NR4A1,NR4A2)是FBW7下調(diào)的基因。作者因此采用qRT-PCR和westernblot檢測(cè)了FBW7T205A過表達(dá)的PANC-1和SW1990細(xì)胞中NR4A1和NR4A2的水平。結(jié)果發(fā)現(xiàn)FBW7T205A降低了NR4A1和NR4A2的mRNA和蛋白水平。此外，與FBW7T205A相比，F(xiàn)BW7R465H（顯性陰性FBW7突變體）*略微降低了NR4A1、NR4A2和SCD1的表達(dá)。同時(shí)NR4A1沉默降低了SCD1的表達(dá)，并且啟動(dòng)子實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)NR4A1與SCD1啟動(dòng)子結(jié)合，促進(jìn)了SCD1的轉(zhuǎn)錄。CHIP檢測(cè)顯示FBW7T205A過表達(dá)減少了NR4A1與SCD1啟動(dòng)子的結(jié)合，但過表達(dá)FBW7R465H無***差異(圖4G)。在熒光素酶檢測(cè)中也有相同的趨勢(shì)，MUTpGL3-SCD1啟動(dòng)子組沒有***差異。此外，NR4A1過表達(dá)可抵消FBW7T205A對(duì)SCD1的影響。綜上所述，F(xiàn)BW7通過降低NR4A1與SCD1啟動(dòng)子的結(jié)合來抑制SCD1的轉(zhuǎn)錄。上海英拜生物提供可靠可信可參觀的實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。缺氧信號(hào)通路科研整體服務(wù)
5’-tRF-GlyGCC作為CRC患者的biomarker的診斷價(jià)值
為了檢測(cè)血漿5’-tRF-GlyGCC水平是否對(duì)CRC患者具有診斷價(jià)值，ROC曲線以確定臨界值。血漿5’-tRF-GlyGCC含量可以區(qū)分CRC患者和HC，曲線下面積(AUC)為0.882。5’-tRF-GlyGCC的比較好截?cái)嘀禐?.9725(敏感性86%，特異性72%。結(jié)果表明，5’-tRF-GlyGCC的診斷價(jià)值遠(yuǎn)高于CEA(AUC0.762)和CA199(0.557)。此外，5’-tRF-GlyGCC、CEA和CA199組合的ROC曲線將AUC值提高到0.926。聯(lián)合的比較好臨界值為3.1273(敏感性86，特異性84%)。這說明血漿5’-tRF-GlyGCC水平對(duì)CRC患者具有良好的診斷能力。 腸道微生物科研省自然科學(xué)基金英拜的員工福利待遇很好。
2.Tempol能中度改善DHEA誘導(dǎo)的PCOS大鼠的糖耐量
由于多囊卵巢綜合征與代謝紊亂密切相關(guān)，評(píng)估了不同組的胰島素敏感性和葡萄糖穩(wěn)態(tài)。DHEA+PBS組大鼠的空腹血糖水平雖然沒有明顯差異，但其空腹血清胰島素水平和HOMA-IR值均高于油+PBS組。Tempol***降低了空腹胰島素水平，而對(duì)PCOS大鼠的空腹血糖水平和HOMA-IR值無***影響(圖2A-C)。OGTTs顯示PCOS大鼠葡萄糖***延遲和曲線下面積增加，這表明DHEA處理降低了葡萄糖排泄能力。經(jīng)tempol***后，糖耐量受損情況得到改善(圖2D)。ITTs證明，三組大鼠對(duì)胰島素的反應(yīng)相同(圖2E)。
此外，circPDE4B不影響MID1水平(圖4E)。RPD和序列IP分析都顯示circPDE4B促進(jìn)了RIC8A和MID1的結(jié)合(圖4F，G)。與這一發(fā)現(xiàn)相一致的是，體外結(jié)合試驗(yàn)表明，circPDE4B增加了重組RIC8A和MID1蛋白之間的關(guān)聯(lián)(圖4H)。通過co-IP，MID1與RIC8A在N端調(diào)控域結(jié)合(圖4I)。此外，我們檢測(cè)了RIC8A的功能位點(diǎn)。在HCs中免疫沉淀RIC8A并進(jìn)行MS分析，證實(shí)了RIC8A中氨基酸殘基的泛素化(圖4J)。在RIC8A、K143和K187中鑒定出10個(gè)泛素化位點(diǎn)，并且在人類和小鼠之間并不保守(圖4J)。因此，我們將保守的RIC8A位點(diǎn)從賴氨酸(K)突變?yōu)榫彼?R)，以排除泛素化。IP結(jié)果表明，與WT相比，K415的取代**降低了RIC8A的泛素化位點(diǎn)(圖4K)。有趣的是，K415在哺乳動(dòng)物中高度保守(圖4L，M)。此外，在K415突變后，circPDE4B過表達(dá)或抑制不再調(diào)節(jié)RIC8A的泛素化水平(圖4N)。這些結(jié)果表明circPDE4B可以作為促進(jìn)RIC8A和MID1之間聯(lián)系的支架。巨噬細(xì)胞表型協(xié)調(diào)急性胰腺炎損傷后的炎癥和修復(fù)再生。
沉默MIR210HG可以通過miR-337-3p/137-HMGA2軸阻斷TGF-b和Wnt信號(hào)通路
之前的GSEA表明MIR210HG與TGFb/Smad3和Wnt/b-catenin信號(hào)通路相關(guān)。為了進(jìn)一步研究MIR210HG調(diào)控子宮內(nèi)膜*細(xì)胞進(jìn)展的機(jī)制，我們檢測(cè)了MIR210HG、HMGA2、miR-337-3p和miR-137對(duì)TGF-b、Wnt和EMT通路相關(guān)蛋白水平的調(diào)控作用。MIR210HG的下調(diào)降低了TGF-bII、p-Smad3和Snail的表達(dá)以及b-catenin在細(xì)胞核中的分布(圖6A和6B)?；谶@些結(jié)果，我們推測(cè)MIR210HG可能通過靶向miR-3373p/137-HMGA2調(diào)控軸抑制EMT、TGF-b和Wnt信號(hào)通路。干擾HMGA2***降低TGF-bII、p-Smad3和Snail的表達(dá)，b-catenin在細(xì)胞核中的分布(圖6C和6D)。我們之前曾報(bào)道過HMGA2在Ishikawa和HEC-1A細(xì)胞系中調(diào)節(jié)Snail、Slug、N-cadherin、MMP-2和MMP-9的表達(dá)。我們接下來研究了miR-337-3p/137表達(dá)的誘導(dǎo)是否影響TGF-b、Wnt和EMT通路相關(guān)蛋白的水平。 N6甲基腺苷（m6A）是一種常見的真核細(xì)胞mRNA修飾。江蘇更年期綜合MS科研
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3.免疫浸潤細(xì)胞分析
對(duì)斑塊中浸潤的免疫細(xì)胞進(jìn)行了相關(guān)分析，結(jié)果表明活化的肥大細(xì)胞和TFH細(xì)胞顯示出協(xié)同的作用。同時(shí)，CD8T細(xì)胞和M0巨噬細(xì)胞顯示出**強(qiáng)的競(jìng)爭(zhēng)作用。對(duì)免疫浸潤細(xì)胞進(jìn)行PCA分析，結(jié)果表明，免疫浸潤可以區(qū)分晚期斑塊和早期斑塊。
4.GSEA分析
將所有表達(dá)數(shù)據(jù)分為早期和晚期斑塊組，然后進(jìn)行GSEA分析。結(jié)果顯示與免疫細(xì)胞和免疫相關(guān)功能高度相關(guān)
5.差異表達(dá)分析
使用R軟件limma包分析早起、晚期斑快差異基因（log2(foldchange)>1，adjustedpvalue<.05），pheatmap包進(jìn)行結(jié)果喲可視化。
6.差異基因GO、Pathway富集分析
使用ClusterProfiler包對(duì)差異進(jìn)進(jìn)行GO、Pathway分析。使用ggplot2包進(jìn)行結(jié)果可視化。 缺氧信號(hào)通路科研整體服務(wù)
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1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請(qǐng)：提供標(biāo)書課題設(shè)計(jì)、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的開展，設(shè)計(jì)的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c(diǎn)，中標(biāo)率很高。
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4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)