二、INPP4B增強(qiáng)pik3a突變ER+乳腺*和乳腺上皮細(xì)胞增殖
GFP-INPP4B在MCF-7和T47D ER+乳腺*細(xì)胞中表達(dá)，這兩種細(xì)胞分別有PIK3CAE545K和PIK3CAH1047R高活化突變.*細(xì)胞進(jìn)行非錨定細(xì)胞生長(zhǎng)的能力是細(xì)胞轉(zhuǎn)化的一個(gè)標(biāo)志。GFP-INPP4B***增加了軟瓊脂中MCF-7細(xì)胞集落大小(2.1倍)和T47D細(xì)胞集落大小(1.8倍)，但對(duì)集落數(shù)量沒(méi)有影響(圖2a-c)。與細(xì)胞增殖增加相一致。與載體對(duì)照相比，GFP-INPP4B在血清剝奪后增強(qiáng)了MCF-7細(xì)胞的增殖(1.7倍)(圖2d, e)，但不影響在含血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的MCF-7細(xì)胞的增殖。過(guò)表達(dá)GFPINPP4B的MCF-7細(xì)胞中，egf刺激的AKTS473和AKTT308磷酸化水平略有降低(圖2f-h)。表達(dá)MCF-10A腺泡的Myc-INPP4BWT而不是Myc-INPP4BC842A (PI (3,4)P2 4-磷酸酶死亡)的腺泡(補(bǔ)充圖2k)顯示增殖細(xì)胞的百分比明顯高于病媒控制的腺泡(1.5倍)(圖2i, j)。 第4周測(cè)定FITC標(biāo)記的葡聚糖(4kd)和血液中FITC水平。河北標(biāo)書(shū)歡迎咨詢
褪黑素可減少TBI誘發(fā)的小鼠腦行為缺陷和病變體積
為了利用褪黑素對(duì)TBI誘導(dǎo)的神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)果和病變體積的影響，進(jìn)行了行為分析以及HE染色。關(guān)于線握測(cè)試，與假手術(shù)組相比，TBI在第1-8天導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)表現(xiàn)顯著下降，但與TBI組相比，褪黑素和Lip-1的***改善了第2-6天的運(yùn)動(dòng)表現(xiàn)。在MWM測(cè)試中觀察到，與假手術(shù)組相比，TBI在第10-15天導(dǎo)致潛伏期延長(zhǎng)，但是褪黑素和Lip-1***的TBI小鼠均表現(xiàn)出比TBI小鼠明顯更短的逃避潛伏期。曠場(chǎng)試驗(yàn)中，與假手術(shù)組相比，TBI組的動(dòng)物的總距離、中心移動(dòng)距離和花費(fèi)時(shí)間明顯縮短。褪黑素***可顯著逆轉(zhuǎn)上述參。HE染色顯示，褪黑素和Lip-1***的TBI組在TBI后第16天的病變體積明顯小于TBI組。兩者合計(jì)，結(jié)果提供了褪黑素***小鼠中TBI后改善運(yùn)動(dòng)，記憶和焦慮結(jié)局以及病變體積的證據(jù)。 遼寧標(biāo)書(shū)服務(wù)兩年FMT可能通過(guò)***NF -κB信號(hào)通路來(lái)緩解腸道炎癥。
5）NOX4的升高通過(guò)抑制人類星形膠質(zhì)細(xì)胞線粒體呼吸和ATP的產(chǎn)生來(lái)促進(jìn)線粒體代謝的損傷，從而促進(jìn)氧化應(yīng)激
我們研究了AD期間NOX4升高誘導(dǎo)受損星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激的潛在分子機(jī)制。與對(duì)照組相比，NOX4過(guò)表達(dá)***抑制了OCR的基礎(chǔ)水平，且***降低了寡霉素和FCCP作用下的OCR水平(圖5A和B)。接下來(lái)，我們研究了NOX4上調(diào)對(duì)人類星形膠質(zhì)細(xì)胞線粒體呼吸途徑調(diào)控的分子靶點(diǎn)。我們分析了包括NADH在內(nèi)的5種線粒體ETC蛋白復(fù)合物的水平(圖5C)。與OCR水平一致，與對(duì)照組相比，NOX4過(guò)表達(dá)***抑制了5種線粒體氧化磷酸化酶復(fù)合物的蛋白水平并***減少ATP的產(chǎn)生(圖5D)。免疫熒光染色顯示，與對(duì)照組相比，NOX4的升高導(dǎo)致線粒體碎裂，并***增加了線粒體碎裂的細(xì)胞數(shù)量(圖5G)。這些結(jié)果表明，NOX4的升高通過(guò)抑制人類星形膠質(zhì)細(xì)胞線粒體呼吸和ATP的產(chǎn)生，從而損害線粒體代謝，從而促進(jìn)氧化應(yīng)激。
系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)患者大多數(shù)存在I型IFN刺激基因(ISGs)的高表達(dá)。線粒體異常也有報(bào)道，但I(xiàn)型IFN暴露對(duì)這些變化的貢獻(xiàn)尚不清楚。此外，I型IFN通過(guò)上調(diào)脂肪酸氧化(FAO)和氧化磷酸化(OXPHOS)促進(jìn)漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞（pDCs）的線粒體功能。本文數(shù)據(jù)表明，I型IFN暴露通過(guò)代謝重編程促進(jìn)CD8 + T細(xì)胞死亡，有助于SLE發(fā)病。本文于2021年3月發(fā)表在《Nature Communications》IF:12.121。
1、ISGs高表達(dá)患者OXPHOS基因下調(diào)
為了確定是否T細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組特征可以幫助鑒定SLE患者的疾病活動(dòng)，作者對(duì)來(lái)源于***和未***女性的CD8+T和CD4+T細(xì)胞的mRNA進(jìn)行測(cè)序。對(duì)DEGs進(jìn)行聚類熱圖分析，發(fā)現(xiàn)SLE患者根據(jù)ISG表達(dá)水平被分為***的兩類：SLE-1和SLE-2（Fig.1a,b）。在兩種T細(xì)胞中，SLE-2類群的患者具有更強(qiáng)烈的I型IFN特征。在CD4+T細(xì)胞中，這種特征伴隨著參與JAK-STAT信號(hào)和T細(xì)胞共刺激的基因，而在CD8+T細(xì)胞中，ISG基因的高表達(dá)與基因參與細(xì)胞周期，響應(yīng)DNA損傷和凋亡有關(guān)（Fig.1a,b）。 LAG抗體***富集ciRS-7但未富集circNDUFB2.
另外，之前報(bào)道過(guò)hnRNPA1將miR-196a和miR-320加載到EVs中，本研究ELNAT1表現(xiàn)出的EVs-細(xì)胞比率與miR-196a和miR-320相當(dāng)（Figure 6 F）。hnRNPA1沉默***抑制了ELNAT1在BCa細(xì)胞分泌的EVs中的富集（Figure 6 G）。此外，缺失的ELNAT1（包含hnRNPA1結(jié)合位點(diǎn)的610-680 nt）主要保留在BCa細(xì)胞中（Figure 6 H），證實(shí)了ELNAT1通過(guò)與hnRNPA1的相互作用被加載到EVs中。
驗(yàn)證SUMOylation是否有助于hnRNPA1介導(dǎo)的EVs包裹ELNAT1。在BCa細(xì)胞中，hnRNPA1中K113位點(diǎn)突變使BCa細(xì)胞分泌的EVs中ELNAT1表達(dá)降低，沉默UBC9降低了BCa細(xì)胞分泌的EVs中ELNAT1的富集（Figure 6 I, J）。與hnRNPA1 WT沉默相比，hnRNPA1沉默后，轉(zhuǎn)染hnRNPA1K113R并不能恢復(fù)EVs介導(dǎo)的ELNAT1下調(diào)（Figure 6 K）。共聚焦顯微鏡顯示，在UBC9沉默或hnRNPA1K113R突變后，ELNAT1在CD36標(biāo)志的多囊泡（MVBs）中的積累明顯下降（Figure 6 L），表明ELNAT1進(jìn)入EVs受hnRNPA1的SUMO化調(diào)控。 生物素標(biāo)記的miR-127-3p比陰性對(duì)照探針捕獲的circSDHC.內(nèi)蒙古標(biāo)書(shū)動(dòng)物模型構(gòu)建
circRNAs在**的發(fā)展和進(jìn)展中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用.河北標(biāo)書(shū)歡迎咨詢
二、YTHDF1缺乏可抑制胃*進(jìn)展和轉(zhuǎn)移
YTHDF1在不同胃*細(xì)胞株中的蛋白表達(dá)水平，遠(yuǎn)高于正常胃腺細(xì)胞GES-1。為了進(jìn)一步探討YTHDF1在胃*中的作用，采用了胃*細(xì)胞系、細(xì)胞系來(lái)源的異種移植(CDX)和PDX模型(圖2A)。首先，通過(guò)產(chǎn)生兩種穩(wěn)定的shRNA表達(dá)人胃*細(xì)胞株MGC-803和HGC-27，研究了YTHDF1的抑制作用，這兩種細(xì)胞株在所有被檢測(cè)的胃*細(xì)胞株中YTHDF1的表達(dá)相對(duì)較高(補(bǔ)充圖S2B)。YTHDF1基因敲除確實(shí)降低了胃*細(xì)胞的增殖(圖2B)。此外，在MGC-803和HGC-27細(xì)胞中YTHDF1敲除降低細(xì)胞的遷移和侵襲能力(圖2C)。隨后通過(guò)皮下注射YTHDF1敲除的MGC-803細(xì)胞到免疫缺陷裸鼠，研究YTHDF1的抑制是否會(huì)影響體內(nèi)胃*的發(fā)生。 河北標(biāo)書(shū)歡迎咨詢
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4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過(guò)表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)