circ_0072083 與 miR-1252-5p 相互作用以調(diào)節(jié) TMZ 抗性
神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的 ALKBH5/NANOG 軸和 TMZ 抗性為了分析circ_0072083如何調(diào)節(jié)ALKBH5/NANOG軸，探索了潛在的 miRNA作為串?dāng)_?；贑ircinteractome和starBase的數(shù)據(jù)庫(kù)，維恩圖顯示只有一種miRNA（miR-1252-5p）可以與circ_0072083、ALKBH5和NANOG結(jié)合。 miR-1252-5p 表達(dá)在 TMZ 抗性組織和細(xì)胞中顯著降低。為了驗(yàn)證它們的相互作用，構(gòu)建了野生型和突變型熒光素酶報(bào)告載體。miR-1252-5p 過(guò)表達(dá)明顯降低了野生型組（WT-circ_0072083、WT-NANOG 3'UTR 和 WT-ALKBH5 3'UTR）的熒光素酶活性，而沒(méi)有改變突變組（MUT -circ_0072083，MUT-NANOG 3'UTR 和 MUT-ALKBH5 3'UTR）。 產(chǎn)生關(guān)于環(huán)境影響疾病的病因和分子機(jī)制的可測(cè)試的假設(shè)。湖北課題服務(wù)兩年
1）circMAPK1的鑒定和circMAPK1的臨床特征
由于MAPK信號(hào)通路在**發(fā)生和進(jìn)展中起著重要的病理作用，我們首先根據(jù)在線數(shù)據(jù)庫(kù)circBase中的circRNA測(cè)序數(shù)據(jù)分析了來(lái)自MAPK通路相關(guān)基因的circRNA。然后我們清點(diǎn)了MAPK通路相關(guān)的circRNAs，發(fā)現(xiàn)大部分細(xì)胞系可以表達(dá)數(shù)以百計(jì)的MAPK通路的circRNAs(圖1a)。在來(lái)源于MAPK1的circRNA中，circ-0006203、circ0004872和circ-0008870在超過(guò)三個(gè)**的測(cè)序數(shù)據(jù)集中被***檢測(cè)。我們利用qRT-PCR檢測(cè)了這三種circRNA在胃*患者的胃*組織和*旁組織中的表達(dá)水平(圖1b)。結(jié)果顯示circ-0004872的表達(dá)變化**為***。circ-0004872在*組織/細(xì)胞中的reads明顯低于正常組織/細(xì)胞(圖1c)。此外，GSE121445和GSE100170數(shù)據(jù)庫(kù)中也證實(shí)了GC中circMAPK1的下調(diào)(圖1d)。這些數(shù)據(jù)提示circ-0004872具有潛在的抑制作用，從而促使我們進(jìn)一步研究其在胃*惡性**中的作用。 河南課題中標(biāo)率高致力于醫(yī)學(xué)相關(guān)領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)和相關(guān)生物醫(yī)學(xué)課題的研究。
五、敲除核孔蛋白來(lái)挽救核孔蛋白的表達(dá)導(dǎo)致果蠅的運(yùn)動(dòng)功能障礙和壽命縮短
Nup62、Nup214、Nup43在運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元中過(guò)表達(dá)***降低了運(yùn)動(dòng)功能和攀爬速度(圖5A和B)。與各自的Nup對(duì)照或?qū)φ战M動(dòng)物相比，過(guò)表達(dá)Nup62和Nup214或Nup62和Nup43的動(dòng)物的壽命明顯縮短——Nup62/ Nup214 OE和Nup62/Nup43 OE的中位存活時(shí)間分別為23天和21天(圖5C)。用RNAi成蟲(Nup62或Nup214)多次暴露于創(chuàng)傷后，檢測(cè)其運(yùn)動(dòng)功能和壽命。Nup62 mRNA (p <0.01)和Nup214 mRNA (p <0.001)與對(duì)照組相比，Nup62和Nup214 RNAi處理組的攀爬水平***降低(圖5D和E)。有趣的是，Nup62 RNAi和Nup214 RNAi處理組創(chuàng)傷后攀爬水平***提高(圖5E, )和速度(圖5F）。
六、核孔病理存在于重復(fù)性TBI患者腦組織中，并與TDP-43病理共同聚集
輕度和重度CTE的組織，但年齡不匹配的對(duì)照組顯示***和強(qiáng)烈的NUP62免疫反應(yīng)性(圖6A,B,C）。21例嚴(yán)重CTE患者腦組織的NUP62水平明顯高于對(duì)照組(圖6D)。輕度CTE病例中NUP62與pTDP-43的共聚集程度有限，而重度CTE病例中NUP62和pTDP-43陽(yáng)性包體在額葉皮質(zhì)的共聚集(箭頭)更為明顯(圖6E)。
急性髓系白血病(AML)的靶向***的實(shí)施一直具有挑戰(zhàn)性。FTO是一種m6A去甲基酶，作為一種致*基因，促進(jìn)白血病*基因介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和白血病發(fā)生。因此為大家介紹于2021年3月發(fā)表于影響因子為8.579的Theranostics上文章“Saikosaponin D exhibits anti-leukemic activity by targeting FTO/m6A signaling”。在這里，我們研究了Saikosaponin-d (SsD)在AML中***的抗增殖作用中的作用，并通過(guò)靶向SsD的FTO來(lái)評(píng)估m(xù)6A去甲基化活性。SsD在體外和體內(nèi)均能***抑制AML細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯。機(jī)制上，SsD直接靶向FTO，從而增加了m6A RNA的甲基化，降低了下游基因轉(zhuǎn)錄本的穩(wěn)定性，導(dǎo)致相關(guān)通路的抑制。重要的是，SsD還克服了FTO/m6A介導(dǎo)的白血病對(duì)酪氨酸激酶抑制劑的耐藥性。總之，F(xiàn)TO依賴的m6A RNA甲基化介導(dǎo)了SsD的抗白血病作用，使SsD成為一種***白血病的藥物。阻斷atm依賴的磷酸化會(huì)損害DNA損傷后PTEN的亞細(xì)胞再分配。
值得注意的是，與對(duì)照組相比，NOX4的升高增加了鐵的積累，這是鐵死亡的特異性標(biāo)志(圖7D)。接下來(lái)，我們使用3D分析儀分析NOX4上調(diào)后人星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞毒性的形態(tài)學(xué)變化(圖7E)。相對(duì)于對(duì)照，NOX4的升高誘導(dǎo)了細(xì)胞毒性的形態(tài)學(xué)特征，包括細(xì)胞質(zhì)面積縮小和起泡(圖7E)。此外，與對(duì)照組相比，NOX4升高后，形態(tài)死亡細(xì)胞數(shù)量***增加(圖7F)。與形態(tài)學(xué)分析結(jié)果一致，相對(duì)于對(duì)照，NOX4的升高***增加了細(xì)胞毒性水平(圖7G)。這些結(jié)果表明，NOX4通過(guò)氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的人星形膠質(zhì)細(xì)胞脂質(zhì)過(guò)氧化促進(jìn)了鐵死亡。
結(jié)論：NOX4通過(guò)線粒體代謝損傷，氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化作用促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞的鐵死亡，這是AD期間星形膠質(zhì)細(xì)胞損傷的一種重要分子機(jī)制。 使用motif和CHIP-seq預(yù)測(cè)影響基因簇表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子。內(nèi)蒙古課題創(chuàng)新服務(wù)
TIMEOR用于推斷基因調(diào)控事件之間的關(guān)系。湖北課題服務(wù)兩年
3）FTO是SsD的直接靶點(diǎn)
基于基因芯片數(shù)據(jù)，SsD介導(dǎo)的白血病發(fā)生抑制主要是由于m6A通路，我們假設(shè)SsD可能調(diào)節(jié)白血病m6ARNA甲基化。我們確定了FTO在白血病發(fā)生中起作用。為了驗(yàn)證SsD與FTO的直接結(jié)合，我們首先基于已發(fā)表的FTO晶體結(jié)構(gòu)進(jìn)行分子對(duì)接分析。SsD的比較好結(jié)合位點(diǎn)表現(xiàn)出與底物結(jié)合位點(diǎn)互補(bǔ)的特殊形狀，占據(jù)了整個(gè)結(jié)合口袋(圖3A-B)。4個(gè)氨基酸殘基(R96,K216,E234,R332)參與了與SsD的相互作用(圖3C)，在抑制FTO活性方面發(fā)揮了關(guān)鍵作用。在NB4和Kas-1AML細(xì)胞中，SsD與FTO蛋白的結(jié)合導(dǎo)致了明顯的熱轉(zhuǎn)移，表明對(duì)熱降解有保護(hù)作用(圖3D)。接著，我們利用NMR進(jìn)一步研究了FTO和SsD之間的相互作用，在滴定過(guò)程中觀察到信號(hào)的劑量依賴性衰減(圖3E)。這些結(jié)果表明，F(xiàn)TO干擾了SsD的狀態(tài)。接下來(lái)，我們使用LC-MS/MS定量分析了細(xì)胞對(duì)SsD的攝取(圖3F)。在NB4和Kas-1細(xì)胞中，SsD在0.05-0.14nmol/百萬(wàn)細(xì)胞中檢測(cè)到。HPLC顯示SsD對(duì)體外FTO去甲基化的抑制活性(圖3G)。此外，在無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)中，斑點(diǎn)印跡試驗(yàn)證實(shí)了SsD介導(dǎo)的FTO活性競(jìng)爭(zhēng)性抑制(圖3H)。綜上所述，F(xiàn)TO是SsD的直接靶點(diǎn)，可能是SsD誘導(dǎo)的白血病細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的主要介質(zhì)。 湖北課題服務(wù)兩年
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