此外，GFP-INPP4B的表達(dá)在基礎(chǔ)和wnt刺激條件下降低了GSK3β蛋白水平，與GSK3β的增強(qiáng)破壞一致(圖6d)。通過HrsshRNA消耗抑制晚期核內(nèi)體形成后，降低的GSK3β蛋白水平得以恢復(fù)(圖6f,g)。GFP-INPP4B而不是gfp載體細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的GSK3β蛋白酶保護(hù)，這與GSK3β向晚期核內(nèi)體轉(zhuǎn)運(yùn)的增強(qiáng)相一致(圖6h)。免疫熒光證實了這一點(diǎn)，在GFP-INPP4B中觀察到RFP-GSK3與LysoTracker共定位，這是一種積累在晚期核內(nèi)體/溶酶體中的染料，而不是gfp載體細(xì)胞(圖6i)。醫(yī)學(xué)整體課題外包服務(wù)。帕金森小鼠模型課題產(chǎn)學(xué)研合作
表觀基因組學(xué) (ChIP-Seq) 模塊
ChIP-seq 模塊目前包含大量染色質(zhì)免疫沉淀測序 (ChIP-seq) 數(shù)據(jù)，反映了特定的衰老相關(guān)基因座是如何受組蛋白修飾和轉(zhuǎn)錄因子調(diào)節(jié)的。這些數(shù)據(jù)有助于闡明調(diào)控因素如何在全基因組范圍內(nèi)影響衰老過程中的基因表達(dá)。ChIP-seq 數(shù)據(jù)來自已發(fā)表的與衰老相關(guān)的文章，并使用相同的分析方法處理原始數(shù)據(jù)以保持一致性。直觀地顯示了衰老過程中特定基因組位點(diǎn)不同轉(zhuǎn)錄因子的富集或組蛋白修飾的變化。
蛋白質(zhì)組學(xué)（蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用）模塊
衰老過程中蛋白質(zhì)穩(wěn)態(tài)受損是典型的，蛋白質(zhì)相互作用隨著年齡的增長而發(fā)生顯著變化。蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用模塊（PPI）旨在允許查詢感興趣的蛋白質(zhì)及其與衰老相關(guān)的相互作用蛋白。結(jié)果以兩種方式呈現(xiàn)：交互式表格和網(wǎng)絡(luò)圖。前者提供了更詳細(xì)的信息，包括相互作用蛋白的數(shù)量、細(xì)胞/組織類型和支持相互作用的出版物；后者允許蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)的可視化，并提供使用在線工具對選定數(shù)據(jù)執(zhí)行基因本體或 KEGG 通路分析的選項。因此，PPI 將成為分析細(xì)胞衰老過程中關(guān)鍵蛋白質(zhì)相互作用的有用模塊，從而可以在蛋白質(zhì)水平上更好地了解人類衰老。 分子生物學(xué)課題協(xié)同創(chuàng)作英拜提供生物醫(yī)學(xué)課題外包服務(wù)。
為了檢測補(bǔ)充NAD + 是否可以糾正IFNα刺激的下游效應(yīng)，用1 mM β-煙酰胺單核苷酸(NMN)培養(yǎng)CD8 + T細(xì)胞以恢復(fù)NAD +/NADH比值（圖6e）。然后，評估了用抗CD3/CD28再刺激后的氧化反應(yīng)和細(xì)胞活力。補(bǔ)充NMN的NAD + 增加了OCR（圖6f），但未增加ECAR，表明線粒體能力增加。重要的是，通過NMN處理恢復(fù)NAD + 的可用性改善了IFNα延長和TCR刺激后的細(xì)胞活力（圖6 g），表明NAD途徑調(diào)節(jié)這些活化的人CD8 + T細(xì)胞中的線粒體適應(yīng)性和細(xì)胞存活率。總之，這些數(shù)據(jù)表明，在人TCR刺激的CD8 + T細(xì)胞中，延長IFNα暴露增加了NAD + 的消耗，并降低了NAD +/NADH比值。這導(dǎo)致再刺激后線粒體呼吸缺陷和細(xì)胞活力降低。NAD + 前體NMN糾正了這些代謝變化，提高了CD8 + T細(xì)胞活力。
2）阿爾茨海默病患者皮質(zhì)區(qū)受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化水平升高
由于NOX4蛋白水平在AD患者受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中升高，我們研究NOX4在AD患者受損星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激中的作用。我們用免疫熒光染色法檢測了AD患者或非AD供者大腦顳葉皮質(zhì)組織中GFAP陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞中4-HNE的蛋白水平(圖2A)。免疫熒光染色顯示，AD患者(AD)皮質(zhì)區(qū)分子層GFAP陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞中4-HNE陽性染色強(qiáng)度相對于非AD供者增加(圖2A、B)。此外，AD患者皮質(zhì)區(qū)ML中受損的GFAP陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞4-HNE陽性染色強(qiáng)度高于非AD供者(圖2A和B)。AD患者中4-HNE與GFAP亞細(xì)胞共定位陽性的受損星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量***增加(圖2C)。此外，相對于非AD供體，4-HNE在AD患者的NOX4陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞***定位(圖2D)。AD患者的NOX4和4-HNE陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量相對于非AD供者***增加(圖2E)。這些結(jié)果提示AD患者受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化水平升高。 英拜生物致力于分子生物行業(yè)十余年。
利用METABRIC數(shù)據(jù)集，我們評估了1459例ER+乳腺*中17個常見Wnt/β-catenin通路基因的表達(dá)，包括幾個Wnt靶基因(圖7a)。為了確定INPP4B是否促進(jìn)PI3K和Wnt/β-catenin通路之間的對話，我們用增加劑量的PI3K抑制劑BKM120(0.5和1 M)處理gfp載體和GFPINPP4B MCF-7細(xì)胞，并測量Wnt靶基因AXIN2、LEF1和MYCN的mRNA表達(dá)(圖7b d)。在gfp載體細(xì)胞中，低劑量的BKM120對Wnt靶基因表達(dá)的影響**小，而高劑量的Wnt基因表達(dá)降低。在GFP-INPP4B表達(dá)細(xì)胞中，低濃度的BKM120部分挽救了Wnt基因表達(dá)的增加，在更高濃度時進(jìn)一步降低?？傊?，這些發(fā)現(xiàn)與INPP4B促進(jìn)Wnt/β-catenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而通過增強(qiáng)晚期核內(nèi)體形成促進(jìn)pik3a突變ER+乳腺*細(xì)胞的增殖的解釋相一致(圖7e)。進(jìn)一步了解阻斷atm依賴的PTEN磷酸化如何影響細(xì)胞對基因毒性損傷的反應(yīng)。課題整包課題分子生物學(xué)
IGF-1信號在Pex誘導(dǎo)的肝纖維化中起重要作用。帕金森小鼠模型課題產(chǎn)學(xué)研合作
作者收集并分析了黑色素瘤患者在***過程中的連續(xù)血液樣本，在此期間，患者接受CDK4/6i聯(lián)合靶向MEK抑制劑***，隨后接受PD-1和CTLA-4 ICB聯(lián)合***（Fig.6 F），患者達(dá)到完全緩解。使用CITE-seq技術(shù)評估一系列患者樣本，觀察到CDK4/6i + MEKi***后CD8 + T細(xì)胞記憶群的頻率呈時間依賴性增加，其特征為SELL、IL7R和TCF7的高表達(dá)（Fig.6G-I），這與臨床分析一致。事實上，偽時間分析揭示了從記憶樣群體到效應(yīng)細(xì)胞的分化軌跡，CDK4/6i在該軌跡早期抑制CD8 + T細(xì)胞，隨后的ICB***加速了分化（Fig.6J）?？缭皆摃r間的TCR克隆追蹤也發(fā)現(xiàn)，CDK4/6抑制增加了罕見T細(xì)胞克隆的頻率，主要存在于記憶群體內(nèi)，隨后ICB處理擴(kuò)增了這些克?。‵ig.6K）。這表明ICB***釋放了外周血中更多種類T細(xì)胞受體。總之，這些數(shù)據(jù)表明，CDK4/6i可用作ICB給藥前促進(jìn)更有利T細(xì)胞表型的啟動工具。
這項研究證明了在細(xì)胞毒性T細(xì)胞中藥理學(xué)抑制CDK4/6可誘導(dǎo)RB介導(dǎo)的G1期阻滯，并促進(jìn)記憶表型的獲得，可***增強(qiáng)這些細(xì)胞的長期抗**活性(Fig. 7)。 帕金森小鼠模型課題產(chǎn)學(xué)研合作
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進(jìn)度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請：提供標(biāo)書課題設(shè)計、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實驗的開展，設(shè)計的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c(diǎn)，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點(diǎn)**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c(diǎn)研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實驗