五、npm1突變的AML亞型可預(yù)測(cè)總生存率
評(píng)估了原始亞型和committed亞型是否與患者總生存期相關(guān)(圖5A;補(bǔ)充圖22)。與committed亞型相比，原始亞型與明顯更差的生存率相關(guān)(Log-rank檢驗(yàn)p = 0.002)。為了確定我們的聚類是否超出了已建立的預(yù)測(cè)因素，我們還擬合了一個(gè)多變量Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型，調(diào)整了臨床病理參數(shù)，如性別、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、年齡、核型和突變，包括FLT3- itd、FLT3- TKD、DNMT3A、NRAS和KRAS。多變量分析顯示，原始亞型和committed亞型具有***的互補(bǔ)預(yù)后價(jià)值(p-值= 0.01，圖5B)。 阻斷atm依賴的磷酸化會(huì)損害DNA損傷后PTEN的亞細(xì)胞再分配。推廣課題服務(wù)價(jià)格
OARSI分級(jí)(圖6E)進(jìn)一步提示小鼠SHAM+載體和DMM+circPde4b組軟骨降解較少，而DMM+載體和DMM+circPde4b+RIC8A組軟骨降解情況相反。熱板試驗(yàn)、膝關(guān)節(jié)伸展試驗(yàn)和電擊刺激跑步機(jī)試驗(yàn)顯示，DMM+載體組和DMM+circPde4b+RIC8A組的不適和膝關(guān)節(jié)疼痛多于SHAM+載體組和DMM+circPde4b組(圖6F)。小鼠膝關(guān)節(jié)的三維微CT重建顯示，DMM+NC組和DMM+circPde4b+RIC8A組比SHAM+載體和DMM+circPde4b組有更多的骨贅(圖6G)。此外，四組中RIC8A和p-p38標(biāo)記的免疫組化染色顯示過表達(dá)circPde4b下調(diào)了RIC8A和p-p38的表達(dá)，從而抑制了DMM手術(shù)引起的OA進(jìn)展(圖6H，I)。綜上所述，在小鼠中，circPde4b和RIC8A參與了OA的發(fā)病機(jī)制（圖6J）。
結(jié)論：我們的研究描述了一種新的circRNA在OA中的機(jī)制。我們發(fā)現(xiàn)circPDE4B可以作為蛋白質(zhì)降解的支架，在OA的進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。在臨床前動(dòng)物模型中，CircPDE4B被發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)代謝，阻止軟骨基質(zhì)的形成，證實(shí)了其對(duì)OA發(fā)生的潛在***作用。機(jī)制上，circPDE4B可作為促進(jìn)RIC8A-MID1結(jié)合的支架，降低RIC8A依賴的p38信號(hào)通路的***，從而調(diào)節(jié)OA的進(jìn)展。 推薦課題動(dòng)物模型構(gòu)建IGF-1信號(hào)在Pex誘導(dǎo)的肝纖維化中起重要作用。
確定關(guān)鍵驅(qū)動(dòng)突變?cè)谠己蚦ommitted亞型中的分布(圖1C，補(bǔ)充討論中的亞型和突變部分和補(bǔ)充表6 17)。盡管亞型中富含某些突變(原始組的FLT3-ITD和承諾組的DNMT3A)，驅(qū)動(dòng)突變的遺傳改變對(duì)原始和committed亞型的預(yù)測(cè)較差(補(bǔ)充圖3 16和補(bǔ)充討論)，基因突變和亞型之間的Matthews相關(guān)系數(shù)(MCC)較低(FLT3-ITD的MCC = 0.32, DNMT3A的MCC = 0.16;在precision-recall曲線(AUPRC = 0.62)值下，突變與亞型之間的多變量分析得到一個(gè)薄弱區(qū)域(Supplementary Fig. 7)。
以上數(shù)據(jù)提示，miR-934異常高表達(dá)與結(jié)直腸***進(jìn)展及肝轉(zhuǎn)移***相關(guān)。生存分析顯示，與miR-934表達(dá)較低的患者相比，miR-934表達(dá)較高的患者總生存期(OS)和無病生存期(DFS)較低（Fig.1f,g）。因此，在CRLM患者中，miR-934高表達(dá)與CRLM進(jìn)展和預(yù)后不良呈正相關(guān)。
2、miR-934存在于CRC細(xì)胞衍生的外泌體中
miR-934在HCT-8和LoVo的CM中的表達(dá)***高于其它細(xì)胞（Fig.2a）。隨后，研究發(fā)現(xiàn)HCT-8和LoVo的CM中miR-934的表達(dá)***高于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)（Fig.2b,c）。并且，miR-934在CM中的表達(dá)不隨RNaseA的處理而改變，而隨RNaseA+TritonX-100的處理***下降（Fig.2d），這表明細(xì)胞外的miR-934被膜包裹，而不是直接分泌。因此，推測(cè)miR-934可能是被外泌體傳輸。電鏡和納米顆粒追蹤分析表明，miR-934表達(dá)水平較高的CRC細(xì)胞分泌的外泌體比miR-934表達(dá)水平較低的CRC細(xì)胞分泌的外泌體更多（Fig.2e,f）。各組外泌體標(biāo)志物CD9，ALIX，TSG101均被WB檢測(cè)到（Fig.2g）。為了闡明miR-934是否主要來源于CRC細(xì)胞的外泌體，使用GW4869抑制CRC細(xì)胞的外泌體分泌，發(fā)現(xiàn)miR-934在CRC細(xì)胞來源的外泌體中的表達(dá)水平明顯高于外泌體耗盡的CRC細(xì)胞（Fig.2h）。
caspase-3抗體是一種***用于檢測(cè)凋亡細(xì)胞的標(biāo)志物。
Il4ra缺陷小鼠的M2 樣巨噬細(xì)胞減少和再生失調(diào)
為了探索再生過程中胰腺巨噬細(xì)胞的調(diào)節(jié)機(jī)制，我們進(jìn)行了基因集富集分析 (GSEA) 以比較第 3 天和第 1 天巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組譜。巨噬細(xì)胞的 M2 ***和 IL4 刺激特征從第 3 天開始富含巨噬細(xì)胞。我們發(fā)現(xiàn)，表達(dá)IL-4和IL-13分別提高在第1天，和表達(dá)Il4ra自第1天升高，達(dá)到峰值在第3天。為了進(jìn)一步確定受體和配體的細(xì)胞來源，在 AP 損傷后***從胰腺中分離并比較了 CD45.2 +和 CD45.2 -細(xì)胞，有趣的是，Il4ra1被顯性免疫細(xì)胞上表達(dá)（CD45.2 +），而IL4和IL13中主要表達(dá)于實(shí)質(zhì)細(xì)胞（CD45.2 - ）。此外，通過使用Il4ra 缺陷小鼠，我們證明了 IL4Rα 信號(hào)在 AP 損傷后胰腺修復(fù)/再生過程中介導(dǎo)了 M2 巨噬細(xì)胞的極化。值得注意的是，與它們的對(duì)應(yīng)物相比，來自Il4ra -/-小鼠的胰腺在第 3 天和第 5 天具有更多的 ADM 結(jié)構(gòu)?？偟膩碚f，這些發(fā)現(xiàn)表明 IL4/IL4Rα 軸是 AP 恢復(fù)過程中胰腺巨噬細(xì)胞 M2 極化所必需的，發(fā)揮***功能來控制 ADM 形成的程度。 產(chǎn)生關(guān)于環(huán)境影響疾病的病因和分子機(jī)制的可測(cè)試的假設(shè)。內(nèi)分泌課題售后服務(wù)
我們使用抗體陣列評(píng)估了表達(dá)PTEN- wt或PTEN- 398a的MCF10A細(xì)胞裂解液的應(yīng)激反應(yīng)和凋亡通路的活性。推廣課題服務(wù)價(jià)格
由于p65轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核并促進(jìn)其靶向基因的轉(zhuǎn)錄，假設(shè)NFκB/p65信號(hào)通路的***可通過p65的轉(zhuǎn)錄活性上調(diào)miR-934表達(dá)。在p65和miR-934啟動(dòng)子之間發(fā)現(xiàn)了5個(gè)潛在的轉(zhuǎn)錄結(jié)合區(qū)域和2個(gè)特異性結(jié)合位點(diǎn)（Fig. 8d）。隨后，用miR-934啟動(dòng)子中含有p65結(jié)合區(qū)域的載體轉(zhuǎn)染SW480和RKO細(xì)胞；ChIP實(shí)驗(yàn)證明p65對(duì)miR-934的轉(zhuǎn)錄在-2002和-1500 bp（區(qū)域1）之間的區(qū)域內(nèi)***增高，在其他四個(gè)結(jié)合區(qū)域中未觀察到明顯變化（Fig. 8e）。這些數(shù)據(jù)表明，區(qū)域1可能在調(diào)節(jié)CRC細(xì)胞中p65介導(dǎo)的miR-934轉(zhuǎn)錄誘導(dǎo)中起關(guān)鍵作用。熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)證實(shí)p65對(duì)SW480和RKO細(xì)胞中miR-934啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄影響（Fig. 8f）。作者發(fā)現(xiàn)只有突變結(jié)合位點(diǎn)1可以下調(diào)p65的熒光素酶報(bào)告基因活性，抑制miR-934的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，這證明p65可以通過結(jié)合位點(diǎn)1正向直接調(diào)節(jié)miR-934的表達(dá)(Fig. 8f)。此外，作者證明了SW480和RKO細(xì)胞中的突變結(jié)合位點(diǎn)1可以消除CXCL13的促進(jìn)作用和NFκB/p65信號(hào)對(duì)miR-934表達(dá)的抑制作用(Fig. 8g,h)。綜上所述，這些結(jié)果證明CXCL13/CXCR5/NFκB/p65信號(hào)通路促進(jìn)CRC細(xì)胞中miR-934的轉(zhuǎn)錄，形成一個(gè)正反饋回路，參與持續(xù)的M2巨噬細(xì)胞極化和CRC細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。推廣課題服務(wù)價(jià)格
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5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)