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膠原蛋白的熱變性溫度可以通過測定膠原蛋白溶液增比黏度的變化來確定。其方法是將膠原蛋白樣品溶于一定量的緩沖溶液中,并配制成一定濃度的溶液,然后用烏式黏度計測量溶液在一定溫度區(qū)間內(nèi)保持一定時間后的增比黏度,以增比黏度對溫度作圖,當(dāng)增比黏度變化50%時所對應(yīng)的溫度即為熱變性溫度。熱變性溫度還可通過拉曼光譜和差示掃描量熱法等進行測定。有人測得鱸魚、鯽魚和鳙魚魚皮膠原蛋白的熱變性溫度分別為25、27和30℃,它們的棲息水溫分別為26~27、29和32℃,亞氨基酸含量分別為、,與3種魚皮膠原的熱變性溫度相吻合Ⅱ型膠原和Ⅺ型膠原Ⅱ型膠原由三條α1肽鏈組成,即[α1(Ⅱ)]3,富含羥賴氨酸,并且糖化率高,含糖量可達4%,是軟骨中的主要膠原。另外,即使同一生物,皮和骨膠原蛋白的熱變形溫度也可能不一,像來自日本海鱸、鮐魚、大頭鯊和眼斑鲀的皮膠原蛋白的變性溫度為℃,而骨膠原蛋白的變性溫度則為℃。附帶結(jié)論是骨膠原蛋白的變性溫度范圍整體上比皮膠原蛋白的變性溫度范圍要高。而且骨膠原蛋白和皮膠原蛋白在不同pH時的溶解度不同。這表明皮和骨膠原蛋白的分子特性和構(gòu)型存在差異。 膠原蛋白是一類蛋白質(zhì)家族,已至少發(fā)現(xiàn)了30余種膠原蛋白鏈的編碼基因。江西玻尿酸膠原蛋白固體飲料
酶解膠原蛋白的工藝主要分為單酶水解法和多酶水解法。多酶水解法又分為混合酶水解法(比如牛胰蛋白酶,鏈霉菌蛋白酶,芽孢桿菌蛋白酶混合)和分步酶水解法,酶法提取皮膠原具體實驗工藝及條件的選取通常應(yīng)考慮要開發(fā)的產(chǎn)品對分子量的要求,要得到分子量較小的膠原多肽一般采用多酶水解法。影響酶解效果的因素主要有:酶的種類、加酶量、酶解溫度、酶解時間、pH值及料水比。采用酶法提取骨料中的膠原蛋白,既能有效縮短提取時間,又能獲得具有良好生物活性的膠原蛋白,而且對環(huán)境的污染也較小。膠原蛋白不易被普通蛋白酶水解,但能被動物膠原酶斷裂,斷裂的碎片自動變性后可被普通蛋白酶水解。胃蛋白酶水解膠原蛋白的適宜條件為~、溫度37℃。 遼寧牡蠣膠原蛋白固體飲料采用酶法提取骨料中的膠原蛋白,既能有效縮短提取時間,又能獲得具有良好生物活性的膠原蛋白。
有人對海參膠原研究發(fā)現(xiàn),刺參體壁含蛋白,其中70%為膠原蛋白。氨基酸分析,膠原富含丙氨酸和羥脯氨酸,但羥賴氨酸含量較少,SDS電泳及SP凝膠柱分析發(fā)現(xiàn)其膠原組成為(α1)2α2。還有人從仿刺參()提取膠原蛋白,利用EDTA和Tris-HCl浸泡溶漲,用氫氧化鈉除去雜質(zhì)和非膠原蛋白,采用胃蛋白酶促溶提取粗制膠原,通過鹽析和透析獲取精致膠原蛋白,并進一步利用SephacrylS-300HR凝膠過濾和DEAE-52陰離子交換除去多糖,獲取膠原蛋白純品。SDS-PAGE電泳表明膠原分子的組成為(α1)3,且α鏈類似于脊椎動物Ⅰ型膠原的α1鏈,熱收縮溫度為57℃,低于牛皮膠原5℃。還有人對采自日本Senzaki海灣的Stomolopusmeleagri水母的外傘組織進行了分析。整個中膠層被分成三部分,利用醋酸首先將凍干的水母中膠層分為酸溶性蛋白和酸不溶性物質(zhì),利用NaCl溶液將酸溶性蛋白分為酸溶性膠原蛋白和酸溶性非膠原蛋白,而不溶入醋酸的中膠層經(jīng)胃蛋白酶處理后大多變?yōu)榭扇苄缘哪z原質(zhì)。然后利用氨基酸分析儀對分離得到的三部分的組成分別進行分析。發(fā)現(xiàn)該水母外傘中膠原蛋白含量很高,大約占干重的。經(jīng)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳分析其膠原蛋白是由三個獨特α鏈組成。
免疫學(xué)分析和研究結(jié)果表明,使用膠原加完全弗氏佐劑,能對膠原產(chǎn)生多克隆和單克隆抗體。由T細胞啟動的對膠原蛋白免疫反應(yīng)的證據(jù)是,位于重要組織相容性(H-2)部位上ⅠA或ⅠB亞區(qū)的免疫反應(yīng)基因已被鑒定。膠原蛋白免疫原性的臨床評價通常是皮膚過敏性測試(細胞免疫指數(shù),遲發(fā)性Ⅳ型反應(yīng))和由反應(yīng)型抗體的存在(體液免疫指數(shù))來確定的。實踐證明,在患者身上進行這兩種評價是合理的。在治好前,用過敏劑量的植入性膠原對患者進行皮試,大約3%有潛在的反應(yīng),反復(fù)多次處理的患者,大約1%~2%會產(chǎn)生遲發(fā)性過敏性的臨床病狀。典型的癥狀包括局部水腫和紅斑反應(yīng),有的還伴有硬化和瘙癢,持續(xù)時間4~6個月,個別甚至可達1年以上。這些食物中的膠原蛋白分子量非常大,極不容易被人體吸收。
水解膠原蛋白和膠原多肽也并不相同,可以近似認(rèn)為是宏觀和微觀的關(guān)系。膠原蛋白分子經(jīng)水解后主要形成相對分子量較小的膠原多肽,由于膠原蛋白獨特的三股超螺旋結(jié)構(gòu),性質(zhì)十分穩(wěn)定,一般的加工溫度及短時間加熱都不能使其分解,從而造成其消化吸收較困難,不易被人體充分利用。水解后其吸收利用率可以提高很多,且可以促進食品中的其它蛋白質(zhì)的吸收。膠原多肽除了肽鏈的兩端含有未縮合的末端羧基和氨基外,在側(cè)鏈上還含有Lys的ε-NH2以及Asp和Glu的-COOH。膠原多肽可完全溶解于水(冷水亦可溶解),水溶液低粘度,在60%的高濃度下也有流動性,耐酸堿性能好,在酸、堿存在的情況下均無沉淀;耐高溫性能好,200℃加熱亦無沉淀,同時它還具有良好的吸油性、起泡性和吸水性等。 采用酶法提取膠原蛋白及其多肽的研究主要是從動物皮及其加工副產(chǎn)物中。天津大豆膠原蛋白哪個牌子好
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由于氨基酸組成和交聯(lián)度等方面的差異,使得水產(chǎn)動物尤其是其加工廢棄物——皮、骨、鱗中所含有的豐富的膠原蛋白具有很多牲畜膠原蛋白所沒有的優(yōu)點,另外來源于海洋動物的膠原蛋白在一些方面明顯優(yōu)于陸生動物的膠原蛋白,比如具有低抗原性、低過敏性等特性。因此水產(chǎn)膠原蛋白可能逐步替代陸生動物膠原蛋白。膠原蛋白種類較多,常見類型為Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅴ型和Ⅺ型。膠原蛋白因具有良好的生物相容性、可生物降解性以及生物活性,因此在食品、醫(yī)藥、組織工程、化妝品等領(lǐng)域獲得比較廣的應(yīng)用。江西玻尿酸膠原蛋白固體飲料
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